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- 百奥莱博
- SY0283-RMW
- 北京
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
286
- 英文名：
Zero TOPO-Blunt Cloning Kit
- 保质期：
12个月
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
20T
特别提示：包括零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒
英文名称：Zero TOPO-Blunt Cloning Kit
产品货号：SY0283
产品规格：20T
本试剂盒是利用拓扑异构酶（Topoisomerase）高效快速连接DNA片段的原理进一步研发而成，与传统的T4连接酶相比，具有以下优势：
1）快速，仅需1-5分钟即可完成连接反应。
2）高效，无自连现象，阳性克隆率接近100%，无需设置蓝白斑筛选；
3）操作简单，从连接到涂板仅需15-20min。操作过程省去冰浴、热激和1h复苏。
4）可连接长达10kb目的产物。
产品用途：平末端PCR产物的快速克隆。克隆后PCR产物的快速测序【使用M13F/M13R引物】。
产品组份：
pESI-Blunt vector 30ng/µl)————20µl
1kb control insert(40ng/µl)————5µl
10×Enhancer————————20µl
储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。
除了零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：
名称：λDNA(不含N6-甲基腺嘌呤)
货号：BTN90407B
规格：5μg
本产品Lambda DNA(λDNA)为λ噬菌体中的DNA，是一种常见的DNA底物，分子量为31.5×106Da/48502bp，浓度为200～500μg/ml。A型为普通Lambda DNA。B型为不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型为非甲基化的cl857 Sam7 λDNA，是从感染的大肠杆菌GM119菌株中分离得到的。该菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作为对DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。
储存溶液：Tris-HCl(pH8.0)10mM；EDTA 1mM
储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。
纯度：
1. OD260nm/280nm＞1.8。
2. 琼脂糖凝胶电泳出现清晰单一条带。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保温16小时后，琼脂糖凝胶电泳时出现清晰单一条带。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃，2小时)后，在琼脂糖凝胶电泳时出现8条清晰的DNA电泳带。
名称：新生霉素溶液
货号：BTN120695
规格：5mL
本产品是浓度为50mg/mL的新生霉素溶液。新生霉素(Albamycin、Cardelmycin、Cathomycin、Cathomycine)，分子式为：C31H35N2NaO11，分子量是：634.61，CAS号：1476-53-5，抗菌谱和青霉素相似，主要用于耐药性金葡菌引起的感染，如肺炎、败血症等，对严重感染疗效较差。通过抑制细胞增殖、抑制DNA合成、影响拓扑异构酶ⅡDNA交联复合物的形成及延误细胞周期进展发挥抗癌作用。
结构式：
储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期6个月。
名称：N端Myc标签融合蛋白质粒
货号：YT482
规格：1μg
本质粒是用于在哺乳动物细胞中表达N端和Myc tag(Myc标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5"端含有一个可以编码Myc标签的序列，因此可以表达出含有Myc标签的融合蛋白，可以方便地使用抗Myc的抗体来识别目的蛋白，有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
本质粒质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 1-602 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 620-639 |
| Myc tag | 679-708 |
| multiple cloning site | 711-784 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 827-848 |
| SV40 polyA signal | 860-1243 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 1381-1687 |
| bla promoter | 1712-1836 |
| SV40 promoter | 1856-2194 |
| neomycin/kanamycin resistance ORF | 2229-3020 |
| HSV-thymidine kinase(TK)polyA signal | 3021-3479 |
| pUC origin | 3608-4275 |
本质粒的图谱如下：
使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致，即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
储存条件：-20℃。
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文献和实验Blunt PCR克隆乃利用传统T4连接酶方法，但载体和Topo平端的一样，含ccdB基因，所以同样可降低菌落背景，易于筛选。 表10 PCR克隆试剂盒的选择 Amplification Enzyme Application of Cloned PCR Product Ligation Method Product
，ccdB基因的表达蛋白，会破坏细菌的DNA gyrase，造成细菌染色体的降解导致细菌死亡。如果有插入片断，则ccdB基因表达受到阻碍，所以细胞可生长。这样可以把高背景的缺点改善，节省筛选的时间。Topo平端克隆 与Topo TA方法一样，操作简单快速。 平端PCR 克隆 方法（Zero Blunt PCR Cloning Kit） Zero Blunt PCR 克隆 乃利用传统T4连接酶方法，但载体
），需要用有特定甲基化背景（dam-/dcm-）菌株扩增得到的质粒才能切割，等等，（此处省略若干连载）。 酶界之“求同存异，合作共赢” 只要“切削补”得到平末端，都能凑一起 终于盘算好能让目标片段和载体牵手了，你还得要检查一下这一轮操作插入载体后，在目标基因 ATG 前面会不会意外引入终止密码、或者不同编码框的 ATG ——提前终止或者密码“三观不一致”都可能影响后续的表达。筛选时需要有可靠的方法来验证目标片段大小是否正确、“正向插入”还是“反向插入”。有时还需要考虑 ATG 距离启动子后 SD
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