细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒促销

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名称：细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒促销
英文名：Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit
规格：50T
编号：SY0326
品牌：百奥莱博
细胞核蛋白、细胞浆蛋白在细胞研究和蛋白质组学中具有重要意义，因此在体外研究中需要将其从细胞或组织中分离。本试剂盒提供了一种较为简单方便，高效的蛋白抽提方法，其原理是：通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂C抽提得到细胞核蛋白。

本试剂盒1次可对2×106个细胞和30-50mg组织样品进行抽提，按照该使用量，SY0326可抽提50个样品。

产品组份：
胞浆蛋白抽提试剂A————10ml
胞浆蛋白抽提试剂B————0.5ml
胞核蛋白抽提试剂————2.5ml

储存条件：-20℃，有效期一年。

使用方法
将试剂盒各组分溶解后立即放置在冰上，混匀。取适量的胞浆蛋白抽提试剂A（以下统称：试剂A）和胞核蛋白抽提试剂（以下统称：试剂C）备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

1 细胞样品蛋白的抽提
1）细胞处理
对于贴壁细胞：PBS清洗细胞1次，EDTA溶液消化细胞或用细胞刮子刮下细胞，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，尽量吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
【注】：尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解抽提的目的蛋白。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，PBS清洗细胞1次，收集细胞，尽量吸尽上清，留细胞沉淀备用。
2） 每20µl细胞沉淀加入200µl含PMSF的试剂A。
【注】：对于2×106个Hela细胞，其细胞沉淀的体积大约为20µl或40mg。
3） 最高速剧烈涡旋5s，完全悬浮分散细胞沉淀。
【注】：如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开，可以适当延长旋涡震荡的时间。
4） 冰浴10-15min。
5） 加入胞浆蛋白抽提试剂B（以下统称：试剂B） 10µl。最高速剧烈涡旋5s，冰浴1min。
6） 最高速剧涡旋5s，4℃12,000-16,000g离心5min。
7） 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，上清即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，也可以冻存备用。
【注】：此步千万不要触及沉淀，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，以免吸到沉淀。
8） 对于沉淀，完全吸尽残余上清，加入50µl含PMSF的试剂C。
【注】：此步需完全吸尽上清，否则会带来细胞浆蛋白的污染。
9） 最高速剧烈涡旋15-30s，把沉淀完全悬浮并分散开。然后放回冰浴中，每隔1-2min再高速剧烈涡旋15-30s，共30min。10）4℃ 12,000-16,000g离心10min。
11）立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用，也可以-70℃冻存备用。

2 组织样品的抽提
1） 将组织切成非常细小的碎片。根据后续使用量按照20:1的比例混合试剂A和B，并加入PMSF至最终浓度为1mM，混匀即可配制成组织匀浆液。按照每60mg组织加入200µl组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液，并在玻璃匀浆器内充分匀浆。
【注】：匀浆需在冰浴或4℃进行。
2） 匀浆后将匀浆液转移至塑料离心管内，冰浴放置15min。
3） 4℃ 1,500g离心5min。把上清转移至一预冷的塑料管中，上清含部分细胞浆蛋白。
【注】：吸上清时千万不要触及沉淀。
4） 对于上述收集得到的沉淀，已经充分匀浆，但很多细胞仍没有破碎。接下来请参照【细胞样品蛋白抽提】的步骤2）开始操作，即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作，即可得到细胞浆蛋白和细胞核蛋白。抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤【组织样品抽提】中步骤3）抽提得到的细胞浆蛋白合并备用。

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