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北京诺博莱德科技有限公司
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| 溴化乙锭溶液(EB,1mg/ml) |
溴化乙锭(Ethidium Bromide,EB)分子式为 C21H20BrN3 ,分子量为 394.31,是一种非常灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的 DNA,302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号。溴化乙锭具有一定的毒性,实验结束后应对含 EB 的溶液进行净化处理再行弃置,避免污染环境。
产品组成:
| 编号 名称 |
N0889 | Storage |
| Ethidium Bromide(1mg/ml) | 10ml | RT避光 |
| 使用说明书 | 1份 | |
1、 电泳缓冲液(如 TAE、TBE 等)
2、 微波炉
3、 紫外分析仪或凝胶成像系统
溴化乙锭溶液(EB,1mg/ml) 操作步骤(仅供参考):
1、 将 50ml 琼脂糖凝胶溶液(浓度一般为 0.8~2%)在微波炉中融化。
2、 加入 50~100μl Ethidium Bromide(1mg/ml),轻轻摇匀避免气泡。
3、 冷却至 50~60℃不烫手时倒胶,待琼脂糖凝胶完全凝固,拔出梳子并置于电泳缓冲液中,上样电泳。
4、 紫外分析仪或凝胶成像系统下观察并拍照或记录。
注意事项:
1、 凝胶厚度一般不超过 0.5cm,凝胶太厚会影响检测的灵敏度。
2、 通过凝胶电泳回收 DNA 片段时,应避免长时间暴露于紫外线下。
3、 EB 有一定毒性,对皮肤、眼睛有一定刺激,请小心操作。
4、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
溴化乙锭溶液(EB,1mg/ml) 有效期:24 个月有效。
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文献和实验(final) dATP C10 H14 N5 O12 P3 Na2 x3H2 O 589.2 3.24ml 850 µl 4.24ml dGTP C10 H13 N5 O13 P3 Na3 x2H2 O 609.2 3.55ml 400 µl 4.10ml dCTP C9 H13 N3 O13 P3 Na3 x2H2 O 569.1 3.44ml 800 µl 4.39ml dTTP C10 H14 N2 O14 P3 Na3 x2H2 O 584
,因此一般不必洗去背景就可观察到核骏电泳带。如果背景太深条带不够清晰,可将胶浸泡于lmmol/L MgSO4中1小时或10mmol/L MgCL2中5分钟,使非核酸结合的EB退色。染色一般在电泳结束后进行,将胶浸入0.5μg/ml的EB水溶液中10分钟即可。EB见光会分解,染色时应避光。染色与电泳同时进行,只须制胶时将EB加入胶内使浓度达0.5μg/ml,这样可在电泳过程中随时观察核酸迁移情况。EB带正电荷,会中和核酸分于的负电荷,同时由于它的嵌入增加了核酸分于的刚性,所以在含EB的胶内电泳,核酸的迁移速度
)时,可以检测到少至10 ng 的NDA条带。溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配。溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性!会在60-70度时蒸发(所以最好不要在胶太热的时候加,或者应该加到液体里,0.5 μg/ml,染色半小时)(当EB加得过多时,也可以在室温用水将已染色的凝胶浸泡20 min 以降低未结合的EB引起的背景荧光)。 溴化乙锭溶液的净化处理:由于溴化乙锭具有一定的毒性,实验结束后,应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置,以避免污染环境和危害人体健康。 (1) 对于EB含量大于0.5 mg
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