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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
653
- 英文名:
RNAtiqu FFPE RNA Extraction Kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
室温(15~30℃)
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括固定组织RNA提取试剂盒现货供应在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:固定组织RNA提取试剂盒现货供应
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
英文名:RNAtiqu FFPE RNA Extraction Kit
编号:WE0196
规格:50次
本试剂盒适用于从福尔马林固定、石蜡包埋的组织中有效纯化总RNA。适合从小于30 mg的石蜡包埋组织或切片中抽提高纯度的总RNA,本试剂盒无需使用酚/*仿抽提和异丙醇沉淀,一小时内即可完成多个样品的抽提。本品使用专门优化的裂解液和蛋白酶K,释放福尔马林固定或组织切片样本中的RNA,无需过夜操作;消化后的样品在较高的温度孵育后,去除由福尔马林交联造成的抑制作用,有效释放组织切片中的RNA,而避免危害RNA的完整性;优化的缓冲系统使裂解液中的RNA可特异结合到硅胶吸附膜上,而其他污染物可流过膜;可通过漂洗步骤有效去除,经过洗脱的RNA可直接用于RT-PCR、Real-Time PCR和印迹分析等实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 |
| Buffer GTL | 15ml |
| Buffer GL | 25ml |
| 蛋白酶K | 12.5mg |
| 蛋白酶K 储存液 | 1.25ml |
| Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
| RNase-Free Water | 10ml |
| 过滤柱FM及收集管 | 50套 |
| 吸附柱RS及收集管 | 50套 |
| RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
自备试剂:无水乙醇(新开封或提取RNA专用)、10mM PBS(PH7.4)(固定液中的组织)。
产品特点:
1、安全-无酚*仿等有机物抽提。
2、快速-可在一小时内完成实验。
3、高效-提取RNA得率高、纯度好。
4、可从石蜡包埋或福尔马林固定样品中提取高纯RNA。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、向蛋白酶K 中加入0.625ml 蛋白酶K 储存液使其溶解,-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。
2、预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
3、获得样品后,要尽快将样品在4%-10%的福尔马林中固定,固定时间以14-24小时为宜,时间过长易导致RNA断裂,影响下游实验。
4、确保包埋前的样品彻底脱水,残留的福尔马林会抑制蛋白酶K 的作用。
5、第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
6、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer GTL和Buffer GL于56℃水浴重新溶解。
操作步骤:
1、样本处理:
① 石蜡包埋样本:用手术刀将组织块中多余的石蜡修剪掉,露出组织。
② 福尔马林等固定液中的样本:取约20 mg的样本,切成小块,置于离心管中,加入500μl 10mM PBS(PH7.4),涡旋振荡,12000rpm(~~13400×g)离心1分钟,重复3次,可直接进行第7步操作。
2、将组织块切成5-10μM的薄片。
注意:如果样品表面已经暴露在空气中,请将接触空气的2-3片弃掉不用。
3、取约1×1cm2的切片(共约4-5片切片)置于离心管(自备)中,加入1ml二甲*,盖紧管盖,涡旋震荡10秒。
4、12000rpm离心2分钟,小心吸弃上清,注意不要吸弃沉淀。
5、加入1ml无水乙醇,涡旋震荡混匀。12000rpm离心2分钟,弃上清,注意不要吸弃沉淀。
注意:乙醇可以除去样品中残余的二甲*。
6、打开管盖,室温或最高至37℃孵育10分钟,直至无乙醇残留。
7、加入150μl Buffer GTL,重悬沉淀;加入10μl 蛋白酶K ,涡旋震荡混匀。
8、56℃孵育15分钟,直至样品完全溶解。80℃孵育15分钟。短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。
注意:
1)此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸,孵育的温度过高或时间过长可能造成RNA断裂,产生RNA碎片。
2)56℃孵育后的样品可置于室温,直至水浴锅或干浴锅温度达到80℃后再把样品置于80℃孵育。
9、加入320μl Buffer GL,涡旋震荡彻底混匀。
10、将步骤9中所得到的溶液全部加入到已装入收集管的过滤柱中。12000rpm离心1分钟,收集滤液。
11、在步骤10得到的滤液中,加入720μl无水乙醇,涡旋震荡彻底混匀。
注意:加入无水乙醇后,可能有少量沉淀物析出,但不影响后续操作。
12、将步骤11中所得的溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
13、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
14、重复步骤13。
15、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟以彻底晾干。
注意:这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
16、将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中,向吸附柱的中间部位悬空加入20-50μlRNase-Free Water,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,-20℃保存RNA。
注意:
1)RNase-Free Water体积不应小于20μl,体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量,可用20-50μl新的RNase-Free Water重复步骤16。
3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤16。
储存条件:室温(15~30℃)。
欲咨询购买固定组织RNA提取试剂盒现货供应,请致电北京百奥莱博科技有限公司,为您提供最全面周到的产品服务,除此之外,我公司正在促销以下产品:
·植物RNA提取试剂盒(含DNase I)
编号:WE0200
英文名称:RNAtiqu Plant RNA Extraction Kit(DNase I)
规格:50次
本试剂盒用于从各种植物中提取纯化高品质总RNA,也适用于真菌菌丝RNA的提取。独特的Shredder分离柱,用于匀质化和过滤高粘度的植物或真菌裂解物,同时采用硅基质膜吸附RNA进行纯化,使多聚糖等各种污染物通过洗涤被有效去除,经洗脱的RNA可直接用于各种下游实验。由本试剂盒提取RNA分子量大于200碱基,纯度高,几乎无DNA残留。如果是对微量DNA非常敏感的RNA实验,残留的DNA可利用无RNase的DNase在柱上进行消化去除。提取的RNA可用于Northern Blot、Dot Blot 、RT-PCR和体外翻译等实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 |
| DNase I | 1000 U |
| 10×Reaction Buffer | 1000μl |
| Buffer RL | 35ml |
| Buffer RLC | 35ml |
| Buffer RW1 | 40ml |
| Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
| RNase-Free Water | 10ml |
| 过滤柱FL及收集管 | 50套 |
| 吸附柱RM及收集管 | 50套 |
| RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
保存条件:DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存,其它组分室温(15~30℃)。
自备试剂:β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
① 使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
② 配制溶液应使用无RNase的水。
③ 操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2、预防RNase污染,应注意以下几方面:
① 使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
② 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
③ 配制溶液应使用无RNase的水。
④ 操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
3、提取的样品避免反复冻融,否则影响RNA提取的量和质量。
4、Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇,1ml Buffer RL加10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。Buffer RLC使用时不需加β-巯基乙醇。
5、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
6、Buffer RL和Buffer RLC如果产生沉淀,请加热使其溶解后室温放置。
7、所有离心步骤均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。
操作步骤:
1、50-100 mg植物组织在液氮中迅速研磨成粉末,加入600μl Buffer RL(使用前检查是否加入β-巯基乙醇)或Buffer RLC。涡旋振荡使其充分裂解。
注意:
① Buffer RL主要成分为异硫*酸胍,适用于大多数植物组织的裂解。但有些植物组织(如玉米的胚乳),由于次级代谢产物较特殊,异硫*酸胍使样品产生沉淀,导致RNA提取效果不佳,此时可加入Buffer RLC替代Buffer RL。
② 56℃孵育1-3分钟有助于组织的裂解,但是淀粉含量高的植物不要进行高温孵育。
2、将步骤1所得全部液体转移至已装入收集管的过滤柱中,12000rpm(~~13400×g)离心2分钟,将收集管中的上清液转移到一个新的离心管(自备)中。
注意:
① 在吸取液体时可以将枪头尖端剪掉,便于取样。
② 过滤柱FL可以除去大部分的碎片,但仍会有小部分流出,离心后会在收集管内形成沉淀,在进行下一步时注意避免吸到沉淀。
3、在步骤2所得干净的裂解液中加入0.5倍体积的无水乙醇,迅速混匀。
注意:加入乙醇后可能会产生沉淀,但不影响后续试验。
4、将上步得到的溶液转移到已装入收集管的吸附柱中,若一次不能将全部溶液加入吸附柱中,请分两次转入; 12000rpm离心15秒,弃掉废液,将吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1,12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6、配制DNase I 混合液:取52μl RNase-Free Water,向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl),混匀, 配制成终体积为80μl的反应液。
7、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液,20-30℃孵育15分钟。
8、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1, 12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心15秒,弃废液。
10、重复步骤9。
11、将吸附柱放回收集管中,12000rpm离心1分钟,将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干吸附柱中的无水乙醇。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱装入新的离心管中,向吸附膜的中间加入30-50μl RNase-Free Water,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟,得到的RNA溶液保存在-70℃,防止降解。
注意:
① RNase-Free Water体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
② 如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
③ 如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤12。
储存条件:室温(15~30℃)。
固定组织RNA提取试剂盒现货供应关键词:固定组织RNA提取试剂盒,WE0196,RNAtiqu FFPE RNA Extraction Kit
·一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(高含量ROX校正染料)
编号:WE0139
英文名称:SuperSYBR One Step RT-qPCR Kit(High ROX)
规格:100次
本试剂盒是一步法Real-Time RT-qPCR专用试剂盒。所含的SYBR Green I荧光染料可以与所有的双链DNA相结合,使该产品可以用于多种不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应,逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行,反应过程中无需添加试剂,无需打开管盖,避免了污染的同时提高了实验效率。全新高效逆转录酶RNase H活性缺失,减少了逆转录反应中RNA的降解。该酶逆转录效率高,可对少量 RNA模板进行良好的逆转录反应。与RNA亲合性高,能通读GC含量高,二级结构复杂的RNA模板。全新高效热启动酶,在常温下酶的活性被封闭,从而有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增,极大提高了荧光定量PCR反应的精确性。所包含的缓冲系统使以上两种酶同时发挥最大功效,提高效率。本产品灵敏度高,特异性高,线性范围广,对目的基因定量更准确。
ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差,一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同,因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器:(WE0137)
Roche LightCycler 480,Roche LightCyler 96,Bio-rad iCyler iQ,iQ5,CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器:(WE0138)
ABI Prism7500/7500 Fast,QuantStudio® 3 System,QuantStudio® 5 System,QuantStudio® 6 Flex System,QuantStudio® 7 Flex System,ViiA 7 system,Stratagene Mx3000/Mx3005P,Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器:(WE0139)
ABI Prism7000/7300/7700/7900,Eppendorf,ABI Step One/Step One Plus等。
试剂盒组成:
| 组份 | WE0137-100次 | WE0138-100次 | WE0139-100次 |
| 2×SuperSYBR One Step Buffer | 1.4ml | 1.4ml | 1.4ml |
| SuperSYBR One Step EnzymeMix | 50μl | 50μl | 50μl |
| 50×Low ROX | - | 50μl | - |
| 50×High ROX | - | - | 50μl |
| RNase-Free Water | 1.5ml | 1.5ml | 1.5ml |
注意事项:
1、本试剂盒中的各试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。
2、本产品以RNA为模板进行一步法RT-PCR实验,在操作过程中应避免RNase污染,建议在专门的区域进行RNA操作,使用专门的仪器和耗材,操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套,实验相关耗材应用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并高压灭菌30分钟后使用。
3、SuperSYBR One Step RT-qPCR Buffer中含有SYBR Green I 荧光染料,保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
4、本试剂盒中的各试剂应避免反复冻融,反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃,避光。如果在短期内需要频繁使用,可在2~8℃保存。
5、本试剂盒必须使用特异性引物,引物的选择可根据具体实验来选择,引物设计的好坏直接影响到RT-PCR反应的结果,设计引物时需考虑GC含量,引物长度,引物位置,PCR产物的二级结构等因素,建议采用专业的引物设计软件进行设计。
6、本品不能用于探针法荧光定量PCR。
操作步骤:
1、将RNA模板、引物、2×SuperSYBR One Step Buffer、SuperSYBR One Step EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、PCR反应体系
| 试剂 | 25μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×SuperSYBR One Step Buffer | 12.5μl | 1× |
| Forward Primer,10μM | 0.5μl | 0.2μM |
| Reverse Primer,10μM | 0.5μl | 0.2μM |
| SuperSYBR One Step EnzymeMix | 0.5μl | |
| RNA Template | Xμl | 10 pg~100ng |
| 50×Low ROX or High ROX(optional) | 0.5μl | 1× |
| RNase-Free Water | up to 25μl |
注意:
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果,可以终浓度0.1-0.5μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2)不同仪器的激发光学系统有所不同,根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX。
3、涡旋震荡混匀,短暂离心,将溶液收集到管底。
4、RT-qPCR反应条件(荧光定量PCR为两步法),本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为例。
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 反转录 | 45℃ | 10 min | |
| PCR预变性 | 95℃ | 5 min | |
| 变性 | 95℃ | 10 s | 30-40个循环 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 45 s | |
| 融解曲线分析 | 95℃ | 15 s | |
| 60℃ | 1 min | ||
| 95℃ | 15 s | ||
| 60℃ | 15 s |
注意:
1)建议采用两步法PCR反应程序,若提高反应特异性,可提高退火温度,以60-64℃作为设定范围的参考;若因使用Tm值较低的引物等原因,得不到良好的实验结果时,可尝试进行三步法PCR扩增。
2)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定,本程序是以ABI7500荧光定量PCR仪为参照设定。
RT-qPCR反应条件(荧光定量PCR为三步法):
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 反转录 | 45℃ | 10min | |
| PCR预变性 | 95℃ | 5min | |
| 变性 | 95℃ | 15s | 30-40 个循环 |
| 退火 | 56℃-64℃ | 30s | |
| 延伸 | 72℃ | 30s | |
| 融解曲线分析 | 95℃ | 15s | |
| 60℃ | 1min | ||
| 95℃ | 15s | ||
| 60℃ | 15s |
注意:
1)三步法PCR扩增时,退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
2)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定,本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。
储存条件:-20℃,避免反复冻融
固定组织RNA提取试剂盒现货供应关键词:固定组织RNA提取试剂盒,WE0196,RNAtiqu FFPE RNA Extraction Kit
·抗β-Tubulin单克隆抗体
编号:WE0355
英文名称:Anti β-Tubulin Mouse Monoclonal Antibody
规格:100μl
微管是细胞骨架的重要组成部分,存在于所有哺乳动物细胞。它由分子量约55kD的α微管蛋白(α-Tubulin)和β微管蛋白(β-Tubulin)组成,并以αβ异源二聚体的形式存在。其中β-Tubulin蛋白表达水平相对恒定,常被用于Western Blot检测时校正系统的内参照。
抗体类型:鼠单克隆抗体IgG
免疫原:人工合成人β-Tubulin C末端多肽
应用范围:
WB(1:500-5000)
IHC(1:50-500)
ELISA(需摸索最佳稀释度)
应用种属:人,小鼠,果蝇,非洲蟾蜍,袋鼠,衣藻
·BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒(WB IHC)
编号:WE0324
英文名称:BCIP/NBT Kit(40×)
规格:40ml
BCIP是碱性磷酸酶最佳的底物组合之一。在碱性磷酸酶催化下,BCIP会被水解而产生强反应性的产物,该产物与NBT发生反应,形成不溶性的深蓝色至蓝紫色化合物。该试剂盒可用于AP系统的IHC 和Western Blot 实验的酶促显色。在AP催化下,在组织切片或印迹膜上结合了AP偶联物的地方产生深蓝色沉淀,可根据颜色反应来确定目的蛋白的位置及表达情况。
试剂盒组成:
| 组份 | 40ml |
| 40×BCIP | 1ml |
| 40×NBT | 1ml |
| BCIP/NBT Buffer | 40ml |
注意事项:
1、工作液应现配现用,配制好的工作液1小时内有效。
2、工作液用量必需充足,保证完全覆盖组织片或印迹膜。
3、为获得最佳实验结果,请务必优化实验条件。
4、NBT有毒,使用时请采取必要的防护措施。
5、本产品仅用于科研,不能用于人体实验或人体治疗。
操作步骤:
1、BCIP/NBT显色工作液配制:根据需要量,将40×BCIP、40×NBT和BCIP/NBT Buffer以1:1:38的体积比混匀后,即为BCIP/NBT显色工作液。
2、显色:
1)印迹膜显色:将配制好的工作液滴加在印迹膜上(或将印迹膜倾入到BCIP/NBT显色工作液中),室温避光孵育3-10分钟。显色完毕后,将膜浸入水中,终止反应。
2)组织切片或细胞爬片显色:滴加适量的BCIP/NBT显色工作液于需要显色的组织切片或细胞爬片上,室温避光孵育3-10分钟。显微镜下观察控制显色时间,当达到最佳显色效果后,自来水冲洗终止显色。显色后的切片经复染、脱水透明,封片后可长期保存。
储存条件:2~8℃
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【公告】丁香通试用中心:10月免费试用装精选(10月18日有更新)
2013年诺贝尔生理或医学奖落花落“基础研究”,无疑给了大家一剂兴奋:在最基础的研究上,坚持下去;在小实验室里,自由探索。丁香通试用中心为助力科研,特推出申请试用装,送丁当的活动。 活动时间:2013.10.9-10.30 活动形式:跟帖附上申请的试用装,每申请一件,送2个丁当。 格式:我申请:动物组织总RNA提取试剂盒 重点推荐:5款PCR、RNA提取试剂盒 产品特点简介: 1. 动物组织总RNA提取试剂盒:去除DNA污染;无需担心RNA降解;高纯度;高得率
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