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- NobleRyder
- P0819
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- 2025年12月17日
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北京诺博莱德科技有限公司
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| Tricine-SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 |
聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)原理在于聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶及 SDS-聚丙烯酰胺凝胶；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开，主要用于分离蛋白质和寡核苷酸。常规 SDS-PAGE凝胶电泳适用于分离大分子蛋白，对于小分子量的蛋白或多肽，分辨率大大降低。
NobleRyder Tricine-SDS-PAGE 电泳能够较好的分离 10KD 以下的蛋白或多肽，是电泳法分离多肽的主要方法，30T 一般可以配制 30～35 块胶，具体配制的量应根据器具大小决定。电泳分离后可直接考马斯亮蓝染色、银染等。
产品组成：
| 编号 名称 |
P0819 30T |
Storage |
| 试剂(A): 49.5%T 3%C | 2ml | 4℃ |
| 试剂(B): 49.5%T 6%C | 60ml | 4℃ |
| 试剂(C): Gel buffer | 90ml | 4℃ |
| 试剂(D): Glycerol | 20ml | RT |
| 试剂(E): Ammonium Persulfate | 0.3g | RT |
| 试剂(F): TEMED | 2×1ml | 4℃ 避光 |
| 使用说明书 | 1 份 | |
Tricine-SDS-PAGE凝胶配制试剂盒操作步骤(仅供参考)：
1、 配制 10%过硫酸铵(APS)：直接在 0.3g Ammonium Persulfate 中加入 3ml 蒸馏水，充分溶解，分装成小份储存于-20℃或 4℃。注意：一般用 1.5mlEP 管分装成 0.5-1ml每支，-20℃保存，每支使用 2-3 次即弃用。短期使用时，可保存于 4℃，1 周有效。
2、 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照附表配制分离胶：
① 将不同体积的蒸馏水、49.5%T 6%C、Gel buffer、Glycerol 加入到离心管中充分混合。
② 加入 10%APS 和 TEMED，立即涡旋混匀 5～10s，以使溶液充分混匀。
③ 在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液(1mm mini-gel，分离胶溶液加约 4ml），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层 1～3cm 的水层，使凝胶表面保持平整。
④ 静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
3、 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照附表配制夹层胶：
① 去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水尽量吸去。
② 将不同体积的蒸馏水、49.5%T 3%C 和 Gel buffer 加入到离心管中混合。
③ 加入 10%APS 和 TEMED，立即涡旋混匀 5～10s，以使溶液充分混匀。
④ 将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面(对于 1mm 的 mini-gel，夹层胶溶液加约1ml)，然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层 1～2cm 的水层，使凝胶表面保持平整。
⑤ 静置，待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
4、 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照附表配制浓缩胶：
① 去除覆盖在夹层胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
② 将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和 Gel buffer 加入到离心管中混合。
③ 加入 10%APS 和 TEMED，立即涡旋混匀 5～10s，以使溶液充分混匀。
④ 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
⑤ 静置，待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，避免破坏加样孔。进行电泳操作。
5、 电泳
将电泳槽置于 4℃或冰水浴中，外槽加入阳极缓冲液，内槽加入阴极缓冲液，30V 预电泳10 min，将处理好的样品加入点样孔， 30V 电泳 1h， 100V 电泳至溴酚蓝到达胶底部后停止电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。
附表 Tricine-SDS-PAGE 凝胶配方表
| 成分 | 分离胶 | 夹层胶 | 浓缩胶 | ||
| 浓度/体积 | 20%/4.5ml | 16.5%/4.5ml | 15.5%/4.5ml | 10%/2ml | 10%/2ml |
| 49.5%T 3%C | - | - | - | 0.407ml | 0.16ml |
| 49.5%T 6%C | 1.82ml | 1.5ml | 1.395ml | - | - |
| Gel buffer | 1.5ml | 1.5ml | 1.5ml | 0.667ml | 0.667ml |
| Glycerol | 0.48ml | 0.48ml | 0.48ml | - | - |
| 蒸馏水 | 0.7ml | 1.02ml | 1.125ml | 0.926ml | 1.344ml |
| 10%APS | 40μl | 40μl | 40μl | 20μl | 20μl |
| TEMED | 5μl | 5μl | 5μl | 3μl | 3μl |
1、 过硫酸铵配制成 10%APS 溶液后应当-20℃保存，用 2~3 次，亦可 4℃保存几天。
2、 TEMED 易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切。可通过适当调节 TEMED 的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
3、 配制聚丙烯凝胶的过程中，如果室温较低，可以置于 37℃放置，加速凝固。在液体混匀的时候应尽量避免气泡的产生。
4、 在分离胶上层加蒸馏水时要缓慢，速度不宜过快。
5、 49.5%T 3%C 和 49.5%T 6%C 为不同比例的 Acr-Bis，有轻微神经毒性，请小心操作。
Tricine-SDS-PAGE凝胶配制试剂盒有效期：24 个月有效。
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