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- NobleRyder
- P0819
- 北京
- 2025年12月17日
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北京诺博莱德科技有限公司
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| Tricine-SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 |
聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)原理在于聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶及 SDS-聚丙烯酰胺凝胶；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开，主要用于分离蛋白质和寡核苷酸。常规 SDS-PAGE凝胶电泳适用于分离大分子蛋白，对于小分子量的蛋白或多肽，分辨率大大降低。
NobleRyder Tricine-SDS-PAGE 电泳能够较好的分离 10KD 以下的蛋白或多肽，是电泳法分离多肽的主要方法，30T 一般可以配制 30～35 块胶，具体配制的量应根据器具大小决定。电泳分离后可直接考马斯亮蓝染色、银染等。
产品组成：
| 编号 名称 |
P0819 30T |
Storage |
| 试剂(A): 49.5%T 3%C | 2ml | 4℃ |
| 试剂(B): 49.5%T 6%C | 60ml | 4℃ |
| 试剂(C): Gel buffer | 90ml | 4℃ |
| 试剂(D): Glycerol | 20ml | RT |
| 试剂(E): Ammonium Persulfate | 0.3g | RT |
| 试剂(F): TEMED | 2×1ml | 4℃ 避光 |
| 使用说明书 | 1 份 | |
Tricine-SDS-PAGE凝胶配制试剂盒操作步骤(仅供参考)：
1、 配制 10%过硫酸铵(APS)：直接在 0.3g Ammonium Persulfate 中加入 3ml 蒸馏水，充分溶解，分装成小份储存于-20℃或 4℃。注意：一般用 1.5mlEP 管分装成 0.5-1ml每支，-20℃保存，每支使用 2-3 次即弃用。短期使用时，可保存于 4℃，1 周有效。
2、 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照附表配制分离胶：
① 将不同体积的蒸馏水、49.5%T 6%C、Gel buffer、Glycerol 加入到离心管中充分混合。
② 加入 10%APS 和 TEMED，立即涡旋混匀 5～10s，以使溶液充分混匀。
③ 在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液(1mm mini-gel，分离胶溶液加约 4ml），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层 1～3cm 的水层，使凝胶表面保持平整。
④ 静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
3、 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照附表配制夹层胶：
① 去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水尽量吸去。
② 将不同体积的蒸馏水、49.5%T 3%C 和 Gel buffer 加入到离心管中混合。
③ 加入 10%APS 和 TEMED，立即涡旋混匀 5～10s，以使溶液充分混匀。
④ 将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面(对于 1mm 的 mini-gel，夹层胶溶液加约1ml)，然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层 1～2cm 的水层，使凝胶表面保持平整。
⑤ 静置，待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
4、 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照附表配制浓缩胶：
① 去除覆盖在夹层胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
② 将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和 Gel buffer 加入到离心管中混合。
③ 加入 10%APS 和 TEMED，立即涡旋混匀 5～10s，以使溶液充分混匀。
④ 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
⑤ 静置，待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，避免破坏加样孔。进行电泳操作。
5、 电泳
将电泳槽置于 4℃或冰水浴中，外槽加入阳极缓冲液，内槽加入阴极缓冲液，30V 预电泳10 min，将处理好的样品加入点样孔， 30V 电泳 1h， 100V 电泳至溴酚蓝到达胶底部后停止电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。
附表 Tricine-SDS-PAGE 凝胶配方表
| 成分 | 分离胶 | 夹层胶 | 浓缩胶 | ||
| 浓度/体积 | 20%/4.5ml | 16.5%/4.5ml | 15.5%/4.5ml | 10%/2ml | 10%/2ml |
| 49.5%T 3%C | - | - | - | 0.407ml | 0.16ml |
| 49.5%T 6%C | 1.82ml | 1.5ml | 1.395ml | - | - |
| Gel buffer | 1.5ml | 1.5ml | 1.5ml | 0.667ml | 0.667ml |
| Glycerol | 0.48ml | 0.48ml | 0.48ml | - | - |
| 蒸馏水 | 0.7ml | 1.02ml | 1.125ml | 0.926ml | 1.344ml |
| 10%APS | 40μl | 40μl | 40μl | 20μl | 20μl |
| TEMED | 5μl | 5μl | 5μl | 3μl | 3μl |
1、 过硫酸铵配制成 10%APS 溶液后应当-20℃保存，用 2~3 次，亦可 4℃保存几天。
2、 TEMED 易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切。可通过适当调节 TEMED 的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
3、 配制聚丙烯凝胶的过程中，如果室温较低，可以置于 37℃放置，加速凝固。在液体混匀的时候应尽量避免气泡的产生。
4、 在分离胶上层加蒸馏水时要缓慢，速度不宜过快。
5、 49.5%T 3%C 和 49.5%T 6%C 为不同比例的 Acr-Bis，有轻微神经毒性，请小心操作。
Tricine-SDS-PAGE凝胶配制试剂盒有效期：24 个月有效。
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文献和实验浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。如果使用碧云天生 产的Western及IP细胞裂解液或RIPA裂解液，可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0011/P0012)。 2. 电泳(Electrophoresis) (1) SDS-PAGE凝胶配制 Ø SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(P
公司名字暂略（其实主要的还是那几家），但是给出了参考价格，方便大家事先做好预算，好跟老板汇报。 好，下面是常用的试剂 我尽量按照做western的顺序来讲 一、 样品制备 货号 名称 规格 单价 P0013 Western及IP细胞裂解液 100ml 158.00元 ST506 PMSF(100mM) 10ml 92.00元 P0012S BCA蛋白浓度测定试剂盒 200次 139.00元 二、蛋白电泳 P0012A SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 1盒 139.00元
Long PCR Reagents and Guidelines
to those above work well. Long PCR Buffer In our hands tricine buffer works well with Tth but not as well with Taq. The pH is probably critical to the efficiency of amplification of long targets PCR_protocol.html#Cheng">(1) . 1X Long
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