北京现货鸡白痢沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒(SPP.P)

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品，包括北京现货鸡白痢沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒(SPP.P)品牌在内的动物疫病PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品，欢迎选购。

名称：北京现货鸡白痢沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒(SPP.P)品牌
编号：SYA543
等级：科研试剂
产地：国产|进口

关于北京现货鸡白痢沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒(SPP.P)品牌的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·牛病毒性腹泻(BVDV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA490
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒

·人副流感病毒4型单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA177
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
人副流感病毒4型单重荧光PCR检测试剂盒说明书
一、简介：
人副流感病毒(Parainfluenza viruses，PIVs)，是一种常常引起儿童下呼吸道感染的单链的RNA病毒，属于副黏病毒。本试剂盒用一对人副流感病毒4 型特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用一步法荧光RT-PCR 技术对人副流感病毒4 型RNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中人副流感病毒4 型(PIV4)的探针报告基团为FAM。

二、用途：
本试剂盒适用于各种咽拭子、鼻拭子等临床样品中人副流感病毒4 型的特异性检测。适用于人副流感病毒4 型感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
人副流感病毒4型反应液(PIV4-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
人副流感病毒4 型阳性对照(PIV4-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月，反复冻融次数不宜超过5次。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Stratagene MX系列，Bio-Rad系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(PIV4-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm 离心10s，向设定的N 个PCR 反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照PIV4-PTC)5μL，10000rpm 瞬时离心10 秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。其中FAM基团检测PIV4，淬灭基团为None。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC)：FAM和HEX/VIC/JOE通道全部阴性。
(2) 阳性对照(PIV4-PTC)：FAM和HEX/VIC/JOE通道均有扩增曲线。
以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效
8.3 结果判定
FAM通道：Ct值≤35，人副流感病毒PIV4亚型核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明人副流感病毒PIV4亚型核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明人副流感病毒PIV4亚型核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA 酶。
(3) PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等)，防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



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·猪传染性萎缩性鼻炎(SAR)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA441
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒

·普氏立克次体/羌虫病立克次体双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA140
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·人类小DNA病毒(B19)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA246
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·手足口病EV71型/CoxA16型病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA213
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·禽流感通用型单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA152
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)/B(SEB)双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA057
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·肠出血性大肠杆菌(O104)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA082
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·单增李斯特氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA257
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪流行性腹泻病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA779
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对猪流行性腹泻病毒特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用一步法荧光RT-PCR技术对猪流行性腹泻病毒RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中猪流行性腹泻病毒的探针报告基团为FAM。

二、用途：
本试剂盒适用于病猪血液、肠系膜淋巴结、扁桃体、肠组织(空肠中段)、肠内容物以及粪便等标本中的猪流行性腹泻病毒(PEDV)特异性检测。适用于猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
猪流行性腹泻病毒反应液(PEDV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(PEDV-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管中备用。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管中备用。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500µL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无DNA酶污染的离心管中备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中备用。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(PEDV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加15μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(PEDV-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX 参比荧光。

八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(PEDV-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明PEDV核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明PEDV核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行PEDV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明PEDV核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购北京现货鸡白痢沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒(SPP.P)品牌。