PAGE胶微量蛋白染色试剂盒(可脱色)北京厂家现货

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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括PAGE胶微量蛋白染色试剂盒(可脱色)北京厂家现货在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：PAGE胶微量蛋白染色试剂盒(可脱色)北京厂家现货
品牌：百奥莱博
规格：250ml|1000ml
英文名：PAGE protein staining kit
本试剂盒适用于快速检测PAGE胶上的微量蛋白质，它的敏感度几乎可以达到银染的敏感度（ng级水平或者更高），但是比银染简单、稳定、重复性高。染色液所含有的成份和PAGE胶中的SDS、TRIS共同作用形成特殊复合物沉淀在胶基质中形成白色的背景染色。有蛋白的地方，蛋白质的存在干扰这种复合物沉淀的形成，因此蛋白条带仍旧保持透明无色，在黑色的背景下，就可以清晰见到透明的蛋白条带。

试剂盒组份(250ml)：
染色液—————————250ml
显色液—————————250ml
脱色液—————————125ml

产品特点：
1.电泳后采用两个简单步骤，15分钟内完成全部过程。
2.环保染料，完全不含有各种醋酸、甲醇等有毒有刺激性成份。
3.蛋白条带为不透明白背景上的透明条带，灵敏度为传统方法的10倍以上（纳克级或者更高）。
4.可逆染色，完全不影响蛋白性质，不影响抗体抗原结合性质。如果需要可以脱色15分钟后继续做蛋白电洗脱（切下特定条带脱色后洗脱下来可以用来做抗原生产使用）、定量、Western blot实验、质谱分析、N末端测序等。
5.在普通双蒸水中可以保留一年以上，不退色，缩小，蛋白质不扩散，一年后依然可以用来做Western blot等蛋白微分析。

操作步骤：
1. 染色
1) 电泳后用清水冲洗胶30-60 秒钟，然后将PAGE 胶放置于一个透明的玻璃培养皿中，根据胶大小倒入适量的染色液（确保胶都浸没在染色液内，20-25ml 足够染色一块普通的8×10cm mini 胶了），摇床上轻摇染色10-15 分钟(10-15%胶15 分钟，5-7.5%胶可缩短时间到10 分钟)。
2) 倒弃染色液，加入20-25ml 的显色液，立刻同时用手轻摇胶显色0.5-1 分钟（将透明培养皿放在一个黑色（暗）背景上观察条带出现情况，此时在不透明的白背景上应该看到透明的蛋白条带，不要显色时间过长，过长反而会降低分辨率）。
3) 看到满意条带后，用清水冲洗1-2 分钟后，放置于蒸馏水中保存。
2. 脱色
1) 根据个人需要将所需目的条带切下后或者直接整块胶加入适量脱色液，摇床上轻摇10 分钟或者直到脱色完全，最后用清水冲洗几次。
2) 现在胶可以用于蛋白电洗脱，Western blot 等操作，或者可以再用传统方法永久染色。

问题与解决方法
●没有见到条带可能的原因分析
1. 应该把透明培养皿放在黑色背景上看，条带为黑背景上面透明的条带。
2. 染色过头了。染色时要在暗背景上监测蛋白条带出现情况，一旦见到满意条带要立刻用蒸馏水冲洗停止染色。对于已经染色过头的胶，可以用脱色液部分脱色（胶脱色后，还可以再次反复染色）。
3. 蛋白浓度太低了，检测上样蛋白的浓度。
●干胶后，条带不见了可能的原因分析
这是一种可逆的负染色方法，干燥以后蛋白条带就和背景区分不出来了，因此不可以做成干胶。如果要长期保存，可以脱色后再用传统方法染色保存。
●染色后未脱色即直接转膜做Western blot效果不好可能的原因分析
应该脱色后才转膜做Western blot。

储存条件：室温避光，有效期12个月。

本品别名：PAGE胶微量蛋白染色试剂盒(可脱色)|可逆微量蛋白染色试剂盒|超敏感可脱色PAGE胶蛋白染色试剂盒

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·SYBR Green qPCR预混液
编号：ALH185
英文名称：2×SYBR Green qPCR Mix
规格：50μl×50次|50μl×200次
本品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。已经将热启动HotMaster Taq DNA聚合酶、dNTP、特殊稳定剂、优化的反应缓冲液、BSA和SYBR Green I等试剂预混成一种适合Real Time PCR反应检测用2×Premix Type试剂，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。使用时只需加入模板和引物和水，便可在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对目的基因进行准确定量检测，重复性好，可信度高。本品采用全新的Hotmaster Taq DNA 聚合酶，该酶不同于一般Hot-start 酶之处在于，一般的Hot-start 酶只在第一步温度升高之前封闭酶的活性，而Hotmaster Taq DNA 聚合酶是利用抑制剂通过温度调节方式封闭Hotmaster Taq DNA聚合酶的底物结合位点，温度低于40℃时，形成非活性的酶-抑制剂复合物，当温度升高至引物特异性的退火温度时，结合平衡向模板-特异性引物复合物形成方向移动，因此最大限度的减少PCR扩增全程中的非特异性扩增产物产生，大大提高了荧光定量PCR反应的精确性。

试剂盒组分(50次)：
2×SYBR qPCR Mix————————1.25ml
100×ROX参比染料————————25μl

注意事项：
1. 本制品含独立参比染料ROX，客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX参比染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。
2. 本制品含SYBR Green I 强光下易分解，降低敏感度，使用时避免长时间强光照射本制品。
3. 建议在冰上配制PCR反应液，再放入PCR仪器中扩增。可以提高扩增特异性，减少背景。
4. 本制品含有4 mM MgCl2（反应体系终浓度是2 mM Mg2+），可用25mM MgCl2 优化Mg2+浓度。

储存条件：-20℃，有效期半年。



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·DNA/RNA/miRNA分离提取试剂盒
编号：ALH069
英文名称：Tissue Cells DNA/RNA/microRNA Extraction & Isolation Kit
规格：50次
本试剂盒适用于快速从同一个动物细胞或者组织样品中同时提取分离基因组DNA和包括miRNA的RNA(如购买额外miRNA吸附柱子和配套溶液，还可以将同一个样品的总RNA和miRNA分离并提取，富集miRNA。）。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA/DNA酶，然后裂解混合物RNA/miRNA/ DNA同时通过一个基因组DNA吸附柱，基因组DNA被吸附而miRNA/RNA穿透滤过。DNA吸附柱上基因组DNA经过一系列漂洗-离心洗脱得到纯净基因组DNA。滤过的miRNA/RNA用乙醇调节结合条件后，miRNA/RNA在高离序盐状态下选择性吸附于miRNA/RNA吸附柱上， 再通过一系列快速的漂洗-离心洗脱得到纯净的miRNA/RNA。无*酚、*仿DNA/RNA快速提取技术基础上配合独特的分离技术同时得到的miRNA/RNA/基因组DNA纯度高，互不干扰。得到的miRNA/RNA不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。基因组DNA也可以直接用于下游的Southern、酶切、PCR等各种试验。

产品特点：
1. 完全不使用有毒的*酚，*仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2. 快速，简捷，单个样品miRNA/RNA/基因组DNA分离操作一般可在40分钟内完成。
3. 独特吸附柱和配方确保有效清除基因组DNA残留，一般情况下得到的miRNA/RNA不需要DNase消化可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
4. 多次柱漂洗确保miRNA/RNA/基因组DNA高纯度，可直接用于下游各种实验。

产品组分：
裂解液RLT Plus————50ml
Wash Solution 1————12ml
Wash Solution 2/3————10ml
RNase-free H2O—————10ml
抑制物去除液——————25ml
漂洗液—————————15ml
洗脱缓冲液———————10ml
基因组DNA吸附柱和收集管————50套
RNA吸附柱和收集管————50套

储存条件：室温，有效期12个月。

注意事项
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 样品处理量绝对不要超过基因组吸附柱和和RNA吸附柱处理能力，否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大，例如胸腺脾脏DNA含量丰富，超过5mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富，超过3x106细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量，如细胞不超过3-4x106，组织不超过10mg。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
3. 裂解液RLT Plus 、抑制物去除液IR、Wash solution 1、Wash solution 2/3中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 该试剂盒如需要用于植物样品尤其是多糖多酚次级代谢产物丰富的困难样品的DNA/miRNA/RNA提取，请咨询技术人员，可能需要用到其它试剂。
5. 如购买额外miRNA吸附柱子和配套溶液，还可以将同一个样品的总RNA和miRNA分离并提取，富集miRNA。请咨询我们。
6. 关于DNA 的微量残留：
一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留（ DNase 消化也无法做到100% 无残留）， 本试剂盒，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA 分离清除技术，绝大多数DNA 已经被清除，不需要DNase 消化，可直接用于反转录PCR 和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：
1) 选用跨内含子的引物，以穿过mRNA 中的连接区，这样DNA 就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA 和cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。

操作步骤：

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
提示：
 第一次使用前请先在漂洗液RW 瓶、漂洗液WB 和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇!
1. 组织培养细胞
a. 收集<107 悬浮细胞到一个1.5ml 离心管，对于贴壁细胞，孔板培养可以直接裂解，细胞瓶培养应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。
b. 13000rpm 离心10 秒（或者300xg 离心5 分钟），使细胞沉淀下来。完全吸弃上清，留下细胞团，注意不完全弃上清会稀释裂解液导致产量纯度降低。
c. 轻弹管壁将细胞沉淀完全松散重悬， 加350μl（ <5×10^6细胞） 或600μl（5x106-1×10^7细胞）裂解液RLT Plus，吹打混匀后用手剧烈振荡20 秒充分裂解。
d. 匀浆：（处理细胞量极少时<1×10^5一般不需要，涡旋振荡一分钟匀浆）。用带钝针头的一次性1 ml(配0.9mm 针头) 注射器抽打裂解物5-10 次或直到得到满
意匀浆结果(或者电动匀浆30 秒) ，可以剪切DNA，降低粘稠度防堵塞柱子和提高产量。
e. 将裂解混合物或匀浆混合物全部加到DNA 吸附柱上（吸附柱放在收集管内）。
f. 接操作步骤项下3。

2. 动物组织（例如鼠肝脑）
a. 电动匀浆：新鲜组织用解剖刀迅速切成小碎块,加入350μl(<20mg 组织)或者600μl(20-30mg 组织)的裂解液RLT Plus 后电动彻底匀浆20-40 秒。
b. 液氮研磨+匀浆：在液氮中研磨组织成细粉后，取适量组织细粉(20mg/30mg)转入装有350μl/600μl 组织裂解液RLT Plus 的1.5ml 离心管中， 用手剧烈振荡20秒，充分裂解。用带钝针头的一次性1 ml(配0.9mm 针头) 注射器抽打裂解物10次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30 秒) ，可以剪切DNA，降低粘稠度防堵塞柱子和提高产量。
c. 将匀浆后裂解物13，000rpm 离心3 分钟,沉淀可能存在的裂解困难的碎片或者不溶物，将裂解物上清全部加到DNA 吸附柱上（吸附柱放在收集管内）。
d. 接操作步骤项下3。

3. 13000rpm 离心30 秒，保留滤过液（miRNA/RNA 在滤过液中）。DNA 吸附柱子（膜上吸附有基因组DNA）短时间可存放4℃度备用。确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。

以下步骤为提取RNA 步骤：
4. 用微量移液器较精确估计滤过液体积（350μl 或者600μl 左右，滤过时候损失体积应该减去），加入1.25 倍体积的无水乙醇，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
5. 立刻将混合物(每次小于700μl，多可以分两次加入)加入一个RNA 吸附柱 中，（吸附柱放入收集管中）13000rpm 离心30 秒，弃掉废液。装滤过液体和乙醇混合物的DNA 吸附柱的收集管（混合物转入RNA 吸附柱后剩下的空收集管）需要保留，将DNA 吸附柱放回此收集管保留在4℃，备用于步骤11 开始的基因组DNA提取。
6. 加700μl Wash Solution 1（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
7. 加入500μl Wash Solution 2/3（请先检查是否已加入无水乙醇!），12000rpm 离心30 秒，弃掉废液。加入500μl Wash Solution 2/3，重复一遍。
8. 将吸附柱 放回空收集管中，13000rpm 离心2 分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
9. 取出吸附柱，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟。
10. 如得到的RNA 可以立即用于下游反应或者尽快置于低温保存。

以下步骤为提取DNA 步骤：
11. 在步骤3 的DNA 吸附柱上加入500μl 抑制物去除液IR，12,000rpm 离心30 秒，弃废液。
12. 加入700μl 漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30 秒，弃掉废液。
13. 加入500μl 漂洗液WB，12,000rpm 离心30 秒，弃掉废液。
14. 将DNA 吸附柱放回空收集管中，13,000rpm 离心2 分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
15. 取出DNA 吸附柱，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μl 洗脱缓冲液EB （洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好）， 室温放置3-5分钟，12,000rpm 离心1 分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2 分钟，12,000rpm 离心1 分钟。洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于50μl，体积过小降低DNA 洗脱效率，减少DNA 产量。
16. DNA 可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。


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