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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
488
- 英文名:
Ultra Pure Total RNA Fast Extraction Kit
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
室温
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")超纯总RNA提取试剂盒(TRIzol法)价格,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:超纯总RNA提取试剂盒(TRIzol法)价格
英文名:Ultra Pure Total RNA Fast Extraction Kit
品牌:百奥莱博
规格:20次|50次
产地:国产|进口
本试剂盒适用于动植物组织、动植物培养细胞的总RNA提取,采用改进的异硫*酸胍/酚一步法(TRIzol法)裂解细胞和灭活RNA酶,然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.结合了异硫*酸胍/酚一步法试剂稳定性好,纯度高和离心柱方便快捷的优点,不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程,RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。
3.独特的RL裂解液配方,可以有效的消除基因组污染。
4.多次漂洗去蛋白过程,提取RNA纯度更高。
5.有效的去除了5S在总RNA中含量,提高了纯度。
试剂盒组份:
| 组份 | 20次 | 50次 |
| 裂解液RL | 20ml | 50ml |
| 去蛋白液RE | 15ml | 25ml |
| 漂洗液RW | 5ml | 10ml |
| RNase-free H2O | 10ml | 10ml |
| 吸附柱和收集管 | 20套 | 50套 |
储存条件:室温,有效期一年。(裂解液RL需4℃避光保存)
注意事项:
1. 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
2. 本试剂盒抑制RNA酶效果极佳,所有离心步骤如未加说明,均可在常温进行。
3. 裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 考虑到环保问题,本试剂盒不含有实验室常用试剂*仿,使用前需要自备*仿。
5. 常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带,分别为~5Kb(28S),~2Kb(18S),条带亮度比值约为2:1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S,tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4,5条带也属于正常现象,如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。
6. 检测OD260/OD280吸光度比值时,如需稀释RNA样品应该用TE(PH 8),如果用水稀释后检测,由于一般水离子强度和PH值低,会使OD280升高,从而使比值降低。
7. 加入裂解液RL匀浆后,加*仿前,样品可在–60℃~70℃ 保存一个月以上。
8. 若提取细菌RNA,推荐细菌RNA提取试剂盒(目录号:ALH027和ALH029)。
操作步骤(实验前请先阅读注意事项)
提示:第一次使用前请先在漂洗液RW 瓶中加入指定量无水乙醇!
1. 匀浆处理
a. 组织
将组织在液氮中磨碎,每50~100mg组织加1ml的裂解液RL后匀浆。组织样品容积不能超过RL容积的10%。
b. 单层生长的细胞
直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml的RL溶解细胞,并用移液枪轻轻吹打混匀。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的RL量(每10cm2加1ml)。一般情况下,普通大小的细胞培养瓶,加入1ml的RL, 迅速轻摇使RL充分和瓶底所有细胞接触裂解细胞并灭活RNA酶,轻轻用移液枪反复吹打混匀。当RL量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。
c. 悬浮生长的细胞
通过离心来沉淀细胞,小心弃上清。每5~10×106的动物细胞或植物细胞加1ml的RL。在RL试剂中用移液枪反复吹打来裂解细胞。在加入RL前应避免洗涤细胞,否则会增加mRNA降解的可能性。
2. 将匀浆样品剧烈震荡混匀,在15~30℃条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。
3. 可选步骤:4℃的条件下12,000rpm 离心10分钟,小心取上清转入一个新的RNase free的离心管中。当样品富含蛋白质、脂肪、多糖或是细胞外物质例如肌肉、脂肪组织或植物的块茎部分时可能需要一额外的分离步骤。匀浆化后在2~8℃的条件下以12,000rpm离心10分钟,移除匀浆中不溶解的物质,余下的沉淀中包含有细胞外膜、多糖、以及高分子量DNA,而上层的超浮游物含有RNA。
4. 每1ml RL加0.2ml*仿。盖紧样品管盖,剧烈振荡15秒并将其在室温下孵育3分钟。
5. 于4℃12,000rpm 离心10分钟,样品会分成三层:下层有机相,中间层和上层无色的水相,RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加RL体积的50%,把水相小心转移到新管中(不要触碰中间层),记录水相体积。
6. 加入水相体积一半也就是0.5倍体积的无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀)。得到的溶液和可能沉淀一起转入吸附柱中(吸附柱套在收集管内,若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱中,请分两次转入吸附柱中。) ,12,000rpm离心45秒,弃废液,将吸附柱重新套回收集管。
7. 加500μl 去蛋白液RE,12000rpm 离心45 秒,弃废液。
8. 加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12000rpm 离心45秒,弃废液。
9. 重复步骤8一次。
10. 将吸附柱放回空收集管中,13000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
11. 取出吸附柱,放入一个RNase free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加50-80μl RNase free water,室温放置2分钟,12000rpm 离心1分钟。如果需要较多RNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心1分钟,或者另外再加30μl RNase free water,离心1分钟,合并两次洗脱液。洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要RNA 浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积最好不少于30μl,体积过小降低RNA 洗脱效率,减少RNA产量。
本品别名:超纯总RNA提取试剂盒(TRIzol法)|超纯RNA提取试剂盒|RNA快速提取试剂盒|总RNA快速提取试剂盒|植物RNA提取试剂盒|动物RNA提取试剂盒|培养细胞RNA提取试剂盒
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