一管式定点突变试剂盒 克隆与表达

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北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖一管式定点突变试剂盒 克隆与表达在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：一管式定点突变试剂盒 克隆与表达
品牌：百奥莱博
规格：10次|20次
产地：国产|进口
英文名：One Tube Site-specific Mutagenesis Kit
本试剂盒是基于PCR原理向目的DNA片段（一般为质粒）中引入碱基的点突变，多个邻近密码子的突变，单个或多个邻近密码子的缺失(deletion)或插入(insertion)等。一般宿主菌培养扩增的质粒DNA是甲基化的，PCR扩增新合成的DNA是非甲基化的。首先以待突变的甲基化质粒为模板，利用超快高保真的SuperPfu聚合酶实现突变质粒的合成（非甲基化，包含突变点，且有两个缺刻点nick点），再利用Dpn I酶选择性降解甲基化的模板质粒 ，剩下的新合成非甲基化的突变质粒转入大肠杆菌后，质粒中有两个nick位点可以被大肠杆菌修复，得到的克隆就会含有预期的突变质粒了。一般可以产生大于90%的突变效率。本试剂盒适用于<12kb甲基化质粒中核苷酸的突变。

试剂盒组分(10次)：
SuperPfu DNA polymerase——————5μl
10×SuperPfu Buffer————————100μl
Dpn I——————-——————-——5μl
10mM dNTP Mixture-——————-——25μl

试剂盒特点：
1、简单，一个PCR管中完成所有操作，速度最快。
2、采用部分重叠引物设计，使PCR呈指数扩增，扩增产物凝胶电泳可见增加成功率。
3、效率高，使用Dpn I去除非突变模板，突变效率高达90%；不需要使用特殊感受态细胞降解非突变质粒。
4、采用分子进化改造的SuperPfu可以提供4倍-6倍于pfu的扩增速率提高和3倍于pfu的超高保真性。

储存条件：-20℃，有效期一年。

本品别名：一管式定点突变试剂盒|一管式突变试剂盒

除一管式定点突变试剂盒 克隆与表达外，我公司正在打折促销以下产品：

·高保真快速PCR MasterMix(含红色示踪染料)
编号：ALH609
英文名称：Fast&HiFi PCR MasterMix
规格：1ml|5ml
本品包含快速高保真DNA Polymerase、dNTPs和优化的反应缓冲液，浓度为2×。使用时只需加入模板、引物，并补足水至Mix终浓度为1×即可。所含聚合酶来自于基因工程改造的pfu，大大提高了扩增速度、保真性和产量。本产品是非长片段超保真快速扩增的首选产品。本制品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。

产品特点：
1. 扩增速度快：延伸速度可以达到2～4kb/min，是pfu的4～8倍。
2. 扩增产量高：一般PCR产物量比传统pfu产量高50%-100%
3. 优异保真性：保真度是taq的54倍以上。一般随机挑一个菌测序便是正确无突变落。
4. 扩增长度指标和pfu一致，可以完全替代pfu进行快速高保真扩增，但不建议用于pfu无法扩增的长片段。以复杂基因组DNA为模板适合扩增不超过3kb左右的产物，以简单基因组、质粒和噬菌体DNA为模板适合扩增不超过6kb左右的产物。

注意事项
1.本系统扩增速度快，质粒和简单基因组等简单模版可采用15～20秒/kb,复杂模版如人类基因组可以采用30～45秒/kb。
2.对于GC含量很高的模版，预变性和变性温度可以提高到98℃，本品聚合酶耐热性强，98℃对聚合酶活性无影响。
3.如果扩增模板GC含量高或者模板复杂扩增效果不佳时，可在反应混合物中加入DMSO到终浓度1%～8%，按照1%梯度增加摸索最佳浓度。或者加入甜菜碱至终浓度1～1.7 M。并采用降落PCR(Touchdown PCR)。

储存条件：-20℃，有效期24个月。


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