北京现货Southern专用DNA Marker(生物素标记

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货Southern专用DNA Marker(生物素标记)折扣价，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货Southern专用DNA Marker(生物素标记)折扣价
编号：BTN120654A
规格：20次
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
本产品是用生物素标记的lambda/Hind Ⅲ DNA Marker，可以用做Southern杂交的Marker，便于准确确定杂交片段的大小。

产品特点：
1. 即开即用，非常方便。
2. 每个DNA片段显色强度均匀。
3. 如果探针用生物素标记，则必须用生物素标记的DNA Marker。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 按常规方法制备琼脂糖胶和酶切基因组DNA。
2.上样。在胶的两侧的加样孔中各加入10μL本产品。
3. 按常规方法电泳。
4. EB或其他染料染色后UV 观察结果。
5.转膜。
6. 按常规的方法杂交和检测生物素的方法检测。

更多有关北京现货Southern专用DNA Marker(生物素标记)折扣价的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·TRIzol试剂伴侣
编号：BTN81027
英文名称：TRIzol-Mate
规格：50次
TRIzol是用于总RNA提取(主要是动物总RNA提取)的著名产品，具有广大的客户群。但其缺点之一是一直没有柱式升级产品，客户仍然要使用既繁琐又费事的非柱式操作(另一缺点是不能用于富含多糖和多酚的材料)为解决此问题，我们特推出本产品，其操作流程如下：


产品特点：
1. RNA 质量更好，因为操作简短减少了RNA在提取过程中的降解。
2. RNA 纯度更高，OD260/OD280一般在 1.9以上，比经典 TRIzol法得到的更纯。
3. 专门的洗涤条件能有效去除基因组 DNA，进一步减少其对 RNA的污染。
4.适用于其他基于酸酚/ 异硫*酸胍提取原理的RNA提取产品，包括TRIzol、TRIzol LS、TRI Reagent等。
5.可以省略*仿处理步骤，避免接触有毒试剂(但效果稍差)。
6.跟TRIzol 结合使用，把经典操作变成了柱式操作，简化了实验流程，用户可以节约30分钟的时间。

产品组成：

 

成分	规格
溶液A	50ml
硅胶膜离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用及效果：


使用方法：
1. 按 TRIzol的使用说明书进行总 RNA提取到加*仿之前一步。
2. 如果需要加*仿，则继续按TRIzol的使用说明书操作，用*仿处理裂解液离心后得到上清液。如果省略*仿处理步骤，则需要将裂解物直接离心。
3. 将经过*仿处理得到的上清液或没有经过*仿处理直接离心得到的裂解液转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意：如果是经过*仿处理，则离心后，下层有机相和中间层将含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μl上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
4. 加入等体积的溶液A，颠倒混匀 30秒。
5. 根据混合物的多少，一次或分两次转移到离心吸附柱中。
6. 每次转移后，需要13000-15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
7. 加0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品OD260/280 比值不高，可以再用0.3mL 通用洗柱液重复此步一次。
8.室温离心半分钟。此步对去除残留通用洗柱液十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的质量和使用。
9. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入50-100μl RNA 洗脱液。
10.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
11. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
12. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
13. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如我公司的RNAload)。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的说明书进行操作。


北京现货Southern专用DNA Marker(生物素标记)折扣价关键词：Southern专用DNA Marker(生物素标记),BTN120654A,Southern DNA Marker(Labeled by Biotin)


·一站式TA克隆试剂盒
编号：BTN90801A
英文名称：One-Stop TA Cloning Kit(A)
规格：20次
TA克隆就是利用T载体两个3´端各带有一个T突出，而PCR扩增产物两个3´端各带有一个A突出的特点，在DNA连接酶的作用下，将PCR产物克隆到T载体中的过程，它是克隆PCR扩增产物的主要手段。

产品特点：
1.一站式，用户只需要准备PCR产物即可进行TA克隆。
2. T载体由Xcm I酶切方法制备，两个5´端100%含T突出，自连率几乎为零。
3. 克隆效率高，一次TA克隆实验一般能得到上百个重组子。
4. 阳性率高，一般能到90%以上，大大缩短了筛选工作。
5. 提供供两次实验用的对照插入片段，方便分析实验数据。
6. 插入位点两侧有对称的常见酶切位点(如EcoR I)，便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。
7. 克隆位点两侧分别有T3和T7 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。
8.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
9. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
10.含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。
 

成分	规格
即用型蓝白T载体(50ng/μL)	20μl
对照插入片段(50ng/μL)	5μl
T4快速连接缓冲液，2×	100μl
T4 DNA连接酶(5U/μL)	30μl
超纯水	1ml
高效感受态细胞	100μL×10只(只B型有)
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。感受态细胞需要干冰运输，-70℃保存，有效期6个月。

自备试剂：插入片段。

使用方法：

一：PCR产物的纯化和定量注意事项
1. 由于PCR体系中有大量会抑制DNA连接反应的dATP、还有一些可能在电泳胶上不一定会显示出来的非特异性扩增产物和引物二聚体，所以PCR产物必须用胶回收方法制备才能用于本试剂盒的连接。可以分别使用本公司柱式DNArc(BTN60202)和PAGE DNArc(包括柱式PAGE DNArc)从琼脂糖胶和PAGE胶上纯化回收PCR片段。具体操作见相关产品使用手册。
2. 琼脂糖胶回收的电泳缓冲液最好不要使用TBE缓冲液，因为它会影响DNA的胶回收效率。
3. 为避免UV对DNA的伤害，切胶最好在日光下进行(使用百奥莱博的绿如蓝染料的话，可以直接在黑色背景下看见DNA条带，不需要紫外光)。如果使用EB或其他染料，必须在紫外下切胶时，最好选择长波(360nm)紫外灯并以最快速度切胶，文献报道短波UV(300nm和240nm)会使DNA连接效率降低400多倍。使用短波UV时，可以使用百奥莱博的DNA防护剂UV Scavenger(BTN60601)减少伤害。
4. PCR片段的体积越小越便于后续操作。洗脱PCR片段时，用最少量的洗脱液洗脱。
 本试剂盒要求PCR回收片段的浓度最好为50ng/μL。如果浓度不够，最好用醇沉淀法沉淀后直接在管内设置连接反应，也可以使用本公司的核酸浓缩剂(BTN110801)直接浓缩。
5. 为准确定量回收的PCR产物同时又节约样品，最好使用微量分光光度计(只需用1μL样品测量)。如果分光光度计需要大量样品，建议使用电泳法定量：将回收的PCR片段与浓度已知的DNA Marker在含EB或绿如蓝染料的琼脂糖凝胶中电泳，通过比较DNA条带的相对荧光强度而估测PCR产物的浓度。

二：连接反应
1. 短暂离心装有蓝白T载体、连接缓冲液和T4连接酶的离心管。
2.在三个离心管中加入下列成分(注意，对照可以不做，在出现问题时再做)：

成份	样品管	阳性对照管	自连对照管
T4快速连接缓冲液，2×	5μl	5μl	5μl
蓝白T载体(50 ng/μL)(=0.03 pmol/μL)	1μl	1μl	1μl
自备PCR 纯化产物(0.03-0.1 pmol/μL)	Xμl(见注)	不加	不加
对照插入片段(50ng/μL)(=0.06 pmol/μL)	不加	1.5μl	不加
T4 DNA连接酶(5U/μL)	1-1.5μL	1-1.5μL	1-1.5μL
超纯水	补到10μL	补到10μL	补到10μL

注: 如何根据T载体的用量计算PCR纯化片段的最佳用量？
第一：确定插入片段与载体的最佳摩尔比，在本产品的T载体的长度固定(3Kb)时，最佳摩尔比跟插入片段的长度关系如下：

插入片段长度	与载体的摩尔比
1Kb以下	2:1或3:1
跟T载体接近(±1Kb)	1:1
比T载体长1Kb或更多	1:2或1:3

第二：根据选定的最佳摩尔比按下面方程式计算用量：

本产品提供的T载体长度为3 Kb，推荐用量为50ng，如果PCR片段长度为0.5 Kb，最佳摩尔比设定为3:1，则其用量为:

3. 用移液器吹打连接反应液使之混匀，然后放置在16℃孵育30分钟-过夜。
4. 65℃5分钟灭活连接酶后直接用于转化或-20℃保存。

三：细菌转化及筛选(仅供参考，本产品不提供相关试剂)
1. 将100μl转化效率在1×108 cfu/μg以上的感受态细胞于冰上解冻。
2. 取5-10μl连接产物加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物。
3.在冰上放置30分钟。
4. 将离心管放42℃热休克90秒，然后快速将其转移到冰浴中放置1～2分钟。
5. 每管中加900μl LB培养基，37℃振荡培养1小时复苏细胞。
6. 将100μL复苏涂布到含Amp的LB琼脂平板上(也可加上X-gal和IPTG)。
7.室温4,000rpm离心剩余的900μl复苏细胞5分钟，弃去800μl上清，用剩余100μL培养基重悬细胞并涂布到含Amp的LB琼脂平板上(可加X-gal、IPTG)。
8. 将平板置于室温直至液体被吸收。此步非常重要，否则培养板将在37℃排除水分，细菌将随水在培养基上到处游动，不能形成单个菌落。
9. 倒置平皿，于37℃培养，12～16小时后可出现菌落。一般情况下阳性对照组总共会有上千个菌落(100μl转化液产生的菌落数×10)，自联对照只有少数几个菌落，样品组的菌落数取决于PCR回收片段的质量。
10. 按常规方法筛选重组子。

MCS位点：



北京现货Southern专用DNA Marker(生物素标记)折扣价关键词：Southern专用DNA Marker(生物素标记),BTN120654A,Southern DNA Marker(Labeled by Biotin)

BL1067 蛋黄粉
BTN70701 柱式病毒DNAOUT Column Viral DNAOUT
BTN130824 冷启动核酸酶 Cold-active Nuclease
ARB11252 人胃泌素(GAs)Elisa分析 Human gastrin,gas ELISA KIT
ARB12575 大鼠高铁血红蛋白(MHB)酶联免疫定量检测 Rat methemoglobin,mhb ELISA KIT
Tris平衡酚(pH＞7.8)   100ml
FMOC-L-亮*酸 D-Prolinol 35661-60-0
BL1105 3M 乙酸*(PH5.2)
硬脂酸* Potassium titanyl oxalate dihydrate 822-16-2
N-乙酰-L-酪*酸 HCTU 537-55-3
L-缬*酸 o-Vanillin 72-18-4
ARB13164 小鼠热休克因子1(HSF1)含量分析 Mouse heat shock factor 1,hsf1 ELISA KIT
D-脯*酸甲酯盐*(代"酸")盐 MUD 65365-28-8
秋水仙碱溶液(10mg/ml) Colchicine 10mg/ml 5ml
苏丹红7B Methyl α-D-mannopyranoside 6368-72-5
红藻*酸 Januˊs green B 58002-62-3
CYB166024-D 兔抗鸡IgG-GOLD
BL1258 MarkerⅡDNA Ladder
ARB11660 人蛋白激酶C(PKC)代做ELISA实验 Human protein kinase c,pkc ELISA KIT
002010 EDTA抗凝马血 100ml|500ml
PY01-019A  猪胆酸  25克  
ARB10543 人半乳糖凝集素3(GAlectIn-3)含量测试 Human galectin 3 (Galectin-3) ELISA KIT

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