BTN140382型农杆菌AGL1化学感受态细胞大量库存促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应BTN140382型农杆菌AGL1化学感受态细胞大量库存促销，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：BTN140382型农杆菌AGL1化学感受态细胞大量库存促销
品牌：百奥莱博
英文名：E.coli AGL1 Chemical Competent Cell
产地：国产|进口
编号：BTN140382
 AGL1菌株为C58，RecA型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif和羧苄青霉素抗性基因carb，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒 pTiBo542DT-DNA，此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA 顺利转移)。

 本产品为AGL1 农杆菌化学感受态细胞，适用于水稻、杨树、拟南芥等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率高达103cfu/μg。

基因型：C58 RecA(rifr/carbr)Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期一年。

自备试剂：质粒DNA、液氮等

使用方法：

转化前准备
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2. 无菌条件下，向刚刚融化的感受态细胞悬液中加入需要转化的质粒，每100μL感受态细胞加1μg(体积不大于10μl)质粒DNA，轻柔混匀。冰水浴中静置5分钟。
3. 将离心管置于液氮中速冻5分钟(注：也可以用干冰和无水乙醇混合物替代液氮)。
4. 迅速将离心管置于37℃水浴静置中5分钟，不要晃动水面。然后快速转至冰水浴中静置5分钟。
5. 加入800μl 无抗生素的2×YT或LB液体培养基，28-30℃振荡培养2～3小时。使菌体复苏，表达抗性。
6. 5000rpm离心1分钟收菌，保留100μl左右上清，轻轻吹打重悬菌体，均匀涂布到含有相应抗生素的LB 固体培养基平板上，待平板中的液体完全吸收后，倒置平板，28-30℃培养48-72小时。(注：当平板只含有50μg/mLkan时，28℃培养48小时即可；平板中同时加入50μg/mL kan，20μg/mL rif时，需28℃培养60小时；如果使用的平板含有50μg/mL rif 则需要28℃培养72-90小时)。

除BTN140382型农杆菌AGL1化学感受态细胞大量库存促销外，我公司正在打折促销以下产品：
CYB162022 兔抗猴IgG(抗血清) 0.5ml
CYB164005 羊抗人白蛋白-HRP
琼脂糖凝胶6FF X-GalNAc
ARB12692 大鼠凝血因子Ⅻ(FⅫ)检测服务 Rat coagulation factor Ⅻ,fⅫ ELISA KIT
凝血酶 SMZ 9002-04-4
ARB11218 人细胞角蛋白18-M30(CK 18-M30)elisa检测 Human cytokeRatin 18-m30,ck 18-m30 ELISA KIT
血红蛋白检测试剂盒(微板法)   100T
ARB11824 人褪黑素(MT)血清中含量检测 Human melatonin,mt ELISA KIT
ARB13945 猪促胃液素受体(GsAR)Elisa定量检测 Porcine gastrin receptor,gsar ELISA KIT
D-天冬酰胺一水物 Chlorosulphonphenol S 2058-58-4或5794-24-1
7725-54-0 过硫*(代"酸")胺 Ammonium Persulfate
BTN130660 ATP硫*(代"酸")化酶 ATP Sulfurylase
ARB11144 人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)免费代测 Human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 3,traIL-r3 ELISA KIT
邻*酚红指示剂   100ml
肌醇 Rose Bengal 87-89-8
BL0883 兔抗狗IgG免疫血清
85-86-9 Sundan  苏丹Ⅲ
HotMaster DNA polymerase 
ARB10107 人His-tag elisa检测 
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·PAGE胶DNA柱式回收试剂盒
编号：BTN80202
英文名称：DNA column recovery kit for PAGE gel
规格：50次
聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(PAGE)是目前分离小片段DNA的主要方法，但是目前市场上没有专门的产品用于从聚丙*(代"烯")酰胺凝胶中回收DNA片段，本产品就是百奥莱博专门为此用途而开发的、从PAGE凝胶中回收DNA片段的试剂盒。

产品特点：
1.高效，采用高效的溶液使DNA快速从PAGE中扩散出来，使回收效率50-90%(跟片段大小和胶浓度等因素有关)。
2.可回收50bp－500bp的DNA片段(如果片段长度超过5100bp，建议使用琼脂糖分离回收方法)。本产品也能回收单链DNA。
3. 操作简单，整个过程只需要离心机，不需要其他设备。
4. 纯度高，采用能专一结合DNA的硅胶膜是杂质和DNA分离，回收的DNA可直接用于酶切、连接、PCR登等多种分子生物学实验。
5. 储存方便，试剂盒可以在室温放置数月，不影响其质量。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	25ml
溶液B	25ml
通用溶胶液	50ml
通用洗柱液	50ml
离心吸附柱	50套
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存(长期)或室温保存(短期)，有效期一年。

使用方法：
1. 切取含DNA片段的PAGE凝胶(100mg左右，尽可能多地把多余的胶切除，否则会影响回收效率)，放入1.5mL离心管中，用移液枪头尽可能捣碎(最好先在酒精灯上将枪头的口烧密闭再用于捣碎)，捣得越细越好。
2. 按重量比为1：2的比例加入溶液A(100mg PAGE凝胶需要加入200μL溶液A)。
3. 将离心管水平放置并室温摇晃1-10个小时以让DNA从PAGE凝胶中扩散出来。如果DNA片段超过500bp，摇晃时间应适当延长。提高温度到45-65℃，DNA扩散速度会增加。
4. 12000～15000g室温离心2分钟，将含DNA的上清液转移到新的离心管中。
5. 再用100μL的溶液A洗涤凝胶一次并与上步得到的上清合并。
6. 加入900μL通用溶胶液和0.3mL溶液B，混合均匀后将离心管中的溶液分两次转移到离心吸附柱中，每次转移后都先静置3分钟，然后再12000～15000g离心1分钟，倒掉收集管中的液体。
7. 加入600-800μL通用洗柱液于离心柱中。
8. 12000～15000g离心1分钟，倒弃收集管中的废液。
9. 12000～15000g离心半分钟以去除离心吸附柱中的残留液体。
10. 将离心吸附柱置于一新的干净的离心管(自备)中，加入25-50μL通用洗脱液，静置3分钟。
11. 12000～15000g离心1分钟，离心管底部所得溶液即为纯化的DNA溶液，可立即用于后续实验或者放冰箱长期保存。


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·单细胞RNA扩增试剂盒
编号：BTN130551
英文名称：Single Cell RNA Amplification Kit
规格：80次
一个哺乳动物单细胞一般只有约10pg的总RNA，其中的mRNA 只有1-5%(约10E5-10E6个分子),因此直接用单细胞进行mRNA扩增具有极大的技术难度。本公司进过精心研究，整合最新技术，开发出了可以直接用单个细胞进行mRNA扩增的试剂盒，其原理如下(仅以扩增mRNA 链为例)：


产品特点：
1. 双向，既可用于制备正义的mRNA，也可用于制备反义的aRNA(antisense RNA)或cRNA(complimenary RNA)。
2. 直接用单细胞裂解液进行反应，免RNA提取，整个过程只需要半天。
3.适用于多种单细胞，包括卵细胞、干细胞、FACS分离细胞等单细胞，还可用于培养细胞和胚胎等实体租组织(需要单细胞化)，也可以使用10pg-10ng 纯化的总RNA作为模板。
4. 假阴性和假阳性率均小于6%，RNA扩增成功率为90%。
5. 所得mRNA或aRNA(cRNA)可以直接用于后续的RT-PCR、芯片杂交、表达谱分析等实验。
6. 本试剂盒足够对80个单细胞进行单细胞RNA扩增。
 

成分	规格
P1(cDNA一链合成引物)	360μl
P2(cDNA 二链合成引物)	360μl
P3(T7-cDNA 二链合成引物)	100μl
溶液A(4×细胞裂解液)	100μl
溶液B(RI)	10μl
溶液C(逆转录酶)	40μl
溶液D	10μl
溶液E	10μl
溶液F	150μl
溶液G(TdT)	60μl
超纯水	10μl
PCR 3.0	9ml
转录预配液，2×	500μl
T7 RNA聚合酶	50μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
强烈建议首次使用本产品前，先预实验，用纯化好的任何总RNA 10倍系列稀释，直到浓度为25pg/μL，然后用0.4μL(即10pg RNA，相当于单个细胞的总RNA量)按本操作说明书进行扩增，一次需平行做4-10个重复。
下列步骤仅用于制备mRNA，如果需要制备aRNA(cRNA)，则需要把P1和P2引物对换，其他成分不需要做任何改动。

一：新鲜准备工作液
见手册左侧各表，据此配制的的各工作液足够扩增10个单细胞用。如果一次实验没有10个细胞，工作液的量仍需按10个细胞的用量新鲜配制，冰上放置时间不能超过1小时。

二：准备单细胞悬液
如何制备单个细胞取决于实验样品和所能使用的仪器设备，此处所列步骤仅供分离单个培养细胞的参考，本试剂盒不提供相关试剂。对其他材料(如干细胞克隆、2-8细胞胚胎、胚囊、胚胎组织等)用户需自行选用合适的制备单细胞的方法。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞(如FACS分离细胞、卵细胞等)，则可以跳过此步直接进入下步操作)：
1. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织，将细胞重悬于培养基中并计数。
2.转移100-4000个细胞到离心管中，400g离心4分钟，弃上清。
3. 将细胞沉淀重悬于50μL自备PBS中，使其终浓度为2-80个细胞/μL，所得细胞悬液可直接用于下面的反应。本方法一个管中可以处理1-40个细胞，但这些细胞必须是先分离成独立细胞的，不能是未分离的细胞团。

三：cDNA 合成和PCR扩增
4. 标记10个0.5mL PCR管(10 号设为阴性对照)，按下表加入各成分：

成分	1-10 号样品管
RT工作液(按下表1 配)	每管加4.0μL，共10管
细胞样品(来于第3 步)或10pg-10ng/μL纯化的RNA	1-19号加0.5μL样品(1-40个细胞)，10号用0.5μL水代替
·70℃水浴90秒，转冰上放置1分，短暂离心
溶液C(试剂盒提供)	每管加0.5μL，共10管
·总反应体系为5μL，37℃水浴90m，70℃水浴10m，冰上放置1分钟，短暂离心
Tailing预处理液(按下表2 配)	每管加1μL，共10管
·短暂离心后PCR 仪上37℃ 30m，再80℃ 25m，离心后放冰上1m
Tailing工作液(按下表3配)	每管加6μL，共10管
·短暂离心后37℃15分钟，70℃10分钟，放冰上1分钟
·上步反应管中每个取3μL分别加入2个新PCR管做模板，共分得20个PCR管。每个反应管中剩约6μL，作未PCR对照放-20℃待用。
引物+水混合液(按下表4 配)	每个PCR管加12μL，共20管
PCR Mix 3.0	每管加15μL，共20管
·按(95℃3分，50℃2分，72℃3分)参数循环1次，冰上放1分
P2	每管加1.5μL，共20管
自备PCR级石蜡油	若PCR 仪无热盖，则每管加50μL
·(95℃30秒，67℃1分，72℃3分，每次循环后在72℃的时间增加6秒)循环20次，4℃放置

5. 将模板来于一个样的2 管PCR产物汇集，20 管汇集后将得10 管(对应于10个样)，每管30μL。只有循环数在24次以上时电泳才能检测到PCR产物，故此步不需要电泳检测。
6. 用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物，去除残留的引物，50μl 洗脱DNA，产物放-80C 长期保存。
7. 10个样和其对应的未PCR 对照(共20个样)各取0.5μL 为模板进行PCR或定量PCR分析，判断靶基因在哪个样品中得到了扩增和扩增效率如何。没有靶基因的可以选择看家基因。客户需自备相关引物和试剂。

四：制备含T7启动子的模板(下列操作只针对10个样品中的一个)
8. 选一个靶基因得到扩增的DNA样品(第6 步回收所得)，各取1μl 加到10个PCR 管中，各加29μl 新鲜配制的PCR Mix(按下表5 配)，混匀后按以下参数扩增1次(95℃ 5m30s，64℃ 1m，72℃ 5m18s)，再按以下参数扩增8次(95℃ 30秒，67℃ 1m，72℃ 5m18s，每次循环后将72℃延伸时间增加6秒)，PCR结束后在72℃保温10m。
9. 汇集10 管PCR反应液(共300μl)，用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物，30μl 洗脱。
10. 将30μL洗脱DNA全部上样到琼脂糖胶上进行电泳(只要电泳10分钟即可，否则胶体积太大，回收效率低)，360nm紫外灯下切胶(250bp以上区域)，最后用30-50μL 洗脱。此步所得PCR片段无250bp以下的非特异扩增产物，可直接用于后续体外转录。

五：T7 体外转录：请按该试剂盒的使用说明书操作(本产品含体外转录试剂)。

表1:RT工作液

成分	用量
超纯水	30.8μl
溶液A	11μl
溶液B	1.1μl
P1稀	1.1μl
合计	44μl

注：P1 稀是将1μl P1加入到100μL超纯水新鲜配制后得到，需新鲜配制。用户可在此步加入自备的内参，但超纯水的用量要相应减少。如加入2μL内参，则少加2μL 水。

表2:Tailing预处理液

成分	用量
超纯水	8.8μl
溶液D	1.1μl
溶液E	1.1μl
合计	11μl

表3:Tailing工作液

成分	用量
超纯水	42.9μl
溶液F	16.5μl
溶液G	6.6μl
合计	66μl

表4:引物+水混合液

成分	用量
超纯水	231μl
P1	33μl
合计	254μl

表5:PCR Mix

成分	用量
超纯水	132μl
P1	11μl
P3	11μl
PCR 3	165μl
合计	319μl

我公司生产供应销*(代"售")的克隆与表达正全品类优惠促销，十分期待您的咨询选购BTN140382型农杆菌AGL1化学感受态细胞大量库存促销。