三合一RNA上样液(B型,6X) 核酸电泳和回收

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")三合一RNA上样液(B型,6X) 核酸电泳和回收，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：三合一RNA上样液(B型,6X) 核酸电泳和回收
规格：1.5mL
编号：BTN3130B
英文名：RNA Loading Buffer
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
本品是集RNA变性RNA、上样、RNA染色三种功能于一体的即用型溶液。

产品特点：
1．能提高RNA上样速度，免去繁琐的准备步骤，减少污染。
2．其含有的RNase抑制剂能抑制RNA样品中残留RNase的活性，保证电泳过程中RNA的完整性。
3．所含甘油和染料(仅BTN3130A含EB染料)，便于直接上样和UV观察RNA电泳条带，免去染色和脱色过程。
4．本产品与DNA/RNA两用快速电泳液SuperBuffer-2完全兼容。

产品组成：

 

成分	规格
三合一RNA上样液	1.5ml
说明书	1份

本产品为红色液体，含红色的EB(*化乙锭)，有致癌性，避免用手直接接触。
另一红色电泳示踪剂的电泳速度相当于50nt的RNA。

储存条件：常温运输，4℃(短期)或-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 按1:1-1:3的比例将RNA样品与RNA上样液混合(如5μL RNA+15μL RNA上样液)。
2. 65-85℃水浴保温10分钟,。
3. 冰浴5分钟后即可直接上样电泳。
 注：本产品含EB，所以琼脂糖凝胶中可以不必再加EB。本产品与甲醛琼脂糖变性凝胶或用DNA/RNA两用快速电泳液SuperBuffer-2配制的非变性琼脂糖变性凝胶兼容。
4.电泳完毕后可直接将凝胶放在紫外灯下观察结果，RNA 条带成红色。

疑难解答：
Q：为何RNA样品在甲醛变性胶中的电泳效果比普通非变性胶差?
A：这是因为在非变性胶中，即使内部有切口的RNA分子(实际已经是两条RNA分子)也会通过形成发夹结构而跟完整的分子等速电泳，而在变性胶中，完整RNA分子和内部有切口的RNA分子将以不同的速度泳动，所以变性胶看起来效果不好是反应了真实情况，非变性胶看起来好只是一种假象。要求严格的实验(如CDNA文库构建)最好还是使用甲醛变性胶判断RNA的质量好坏。

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·4%多聚甲醛(RNA专用)
编号：BTN131247
英文名称：Polyoxymethylene
规格：250mL
多聚甲醛是实验室最常用的固定剂之一。该固定剂较为温和，能很好地保存组织的抗原性和细微结构，适于组织标本和细胞片的较长期保存，非常适合组织和细胞的光镜免疫化学研究。

本产品为添加有DEPC的RNA专用4%多聚甲醛固定液，本产品固定的组织既可以用来做免疫组化，也可以用来做原位杂交。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞
编号：BTN140576
英文名称：E.coli DH10Bac Chemical Competent Cell
规格：0.1mL*10
 本产品是采用特殊工艺处理得到的大肠杆菌DH10 Bac感受态细胞，适用于昆虫杆状病毒Bac-to-Bac 系统中同源重组的菌株，用于产生重组Bacmid。使用pUC19质粒检测，本产品转化效率可达107CFU/μg。
 DH10Bac细胞包含亲本Bacmid bMON14272和辅助质粒 pMON7124。亲本Bacmid 包含一个mini-F 复制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位点和lac Zα-互补因子。
 辅助质粒包含tns ABCD 区域，该区域提供了mini-Tn7从供体质粒插入亲本Bacmid 靶位点所需要的转座蛋白。供体如pFastBac 系列质粒(pFastBac1，pFastBacDual等)含有Tn7R和Tn7L 同源重组臂，Tn7R和Tn7L 之间包含庆大霉素抗性基因、昆虫病毒多角体基因启动子、多克隆位点和SV40 病毒的PolyA 加尾信号。当含有靶基因pFastBac的重组质粒转化到DH10Bac细胞后，发生重组后就可产生重组Bacmid，提取纯化重组Bacmid转染昆虫细胞Sf9或Sf21 就可以包装产生昆虫病毒。此外，DH10Bac细胞中的The φ80dlacZDM15基因的产物可以实现β-半乳糖苷酶的α-互补现象，用于重组bacmid的蓝白斑筛选。
 菌株基因型为：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ-rpsL nupG/pMON14272/pMON7124。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，避免反复冻融，有效期半年。

自备试剂：重组质粒、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 制备含有如下抗生素的LB 固体平板：50 μ g/mL Kanamycin，7 μ g/mL gentamicin，10μg/mL tetracycline，100μg/mL X-gal，40μg/mL IPTG。
2. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
3. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入1-10 ng 重组质粒，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
4. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
5. 每个离心管中加入900μl 无菌的SOC(不含抗生素)，混匀后置于37℃ 摇床，200rpm 振荡培养4小时。
6. 用 SOC培养基进行10倍梯度稀释，如分成3个稀释梯度10-1,10-2,10-3。
7. 取 100μl的各个梯度的培养物用于涂布。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板，37℃培养24-48小时。
8. 保留剩余的菌液保存于4℃，视平板上菌落生长情况决定去留。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。


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·非变性法蛋白沉淀试剂盒
编号：BTN81029
英文名称：Non-Denaturing Protein Precipitation Kit
规格：10次
本产品是基于蛋白质盐析和透析原理开发的非变性蛋白质浓缩产品。其原理是将大量具有很强水化能力的硫*(代"酸")铵加到蛋白质溶液中，夺取蛋白质分子的水化层(尤其是蛋白质表面非极性区的水化层)，使之“失水”，于是蛋白质分子间的非极性基团将互相结合，使蛋白质形成沉淀，离心分离沉淀后，再用透析方法将蛋白质中的盐除去，即得浓缩的蛋白质。

产品特点：
1.适合于浓缩各种蛋白质粗提液，一次可以处理50mL蛋白质溶液。
2. 非变性法，不会破坏蛋白质的天然结构和活性，尤其是适用于对变性敏感的酶溶液。
3. 得到的蛋白质结构稳定，适合于长期保存。
4.可以在透析是进行缓冲液的调换。
5.一站式，带有盐析和透析所需的物品。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml×10
无菌水	50ml
EDTA溶液(0.5M)	0.5ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
注意：除对温度敏感的蛋白质样品需在4℃环境下(如冷室)操作外，一般可在室温中操作，操作者整个操作须戴好手套。

盐析沉淀
1．测量待浓缩蛋白质样品的体积，并将其转移到容积至少是样品体积两到三倍的无菌烧杯或玻璃三角瓶中。注意：需要处理的蛋白质样品最好溶解在pH为中性的缓冲液中(如50mM的Tris-HCl)，浓度最好在1mg/mL以上。
2．将一个无菌的磁力搅拌子放入三角瓶中，再将三角瓶放置在磁力搅拌器上，打开开关后缓慢搅拌。注意：搅拌过程中不能产生泡沫。
3．如果待浓缩蛋白容易被金属离子失活或抑制，则最好加入EDTA溶液，使其终浓度为10mM，否则此步可省略。
4．根据所需硫*(代"酸")铵的饱和度计算需要加入的溶液A的体积，溶液A的硫*(代"酸")铵饱和度是100%。一般50%的硫*(代"酸")铵饱和度就可以沉淀绝大部分蛋白，超过此饱和度溶液比重很大，难以通过离心收集蛋白质沉淀。
5．小心缓慢加入所需的溶液A(用前需要摇匀)。注意：最好每次少量加入，切莫一下倒入，否则蛋白质容易变性。混合过程中，蛋白质沉淀可能会使溶液呈牛奶状，属于正常现象。
6．将所需溶液A全部加入后，冰上放置60分钟或过夜让蛋白质充分沉淀。
 注意：血红蛋白、肌红蛋白和清蛋白等在较高的温度25℃比在0℃度时溶解度低，更容易盐析，所以浓缩这些样品时冰浴放置可以改为室温放置。有的蛋白质15-20分钟就可以完全沉淀，有的则需要数小时。
7．将溶液轻移到旋盖塑料离心管或离心瓶中，在平衡条件下15000×g 4℃离心15分钟。
 注意：溶液比重很大，一定要重量上平衡而非体积平衡。
8．小心弃上清，得到蛋白质沉淀。此沉淀可以在4℃放置数月。
9．将尽可能少的无菌水或其他缓冲液加入蛋白质沉淀中使之溶解，所加体积一般是沉淀物体积的1-2倍。如果沉淀溶解后非常粘稠，可以适当补加无菌水使其变得不粘稠。此沉淀可以在4℃放置几天。
10．如果溶液中有不溶物(主要是变性的蛋白质)，可以15000×g 4℃离心15分钟，留上清。
11．上清液可以用于SDS-PAGE电泳检测或UV法蛋白质浓度测定。
12．如果后续纯化方法是疏水层析或排阻层析，则不需要将溶液中残留的盐去掉，可以直接使用。如果后续纯化是离子交换层析，则需要将溶液中残留的盐去掉，一般采用透析法，具体操作见附一。

附一：透析脱盐
1．将蛋白溶液转移到一端已经封口的透析袋内，预留一些液体膨胀的空间，然后将另一端封口。注意：用户需要预处理透析袋，预处理的方法是将透析袋在含2%(W/V)碳酸**和1mM EDTA的溶液中煮沸10分钟，用蒸馏水彻底清洗透析袋，然后放在1mM EDTA的溶液中煮沸10分钟并浸没在此溶液中冷却，最后放4℃保存待用。取用时必须要戴手套。
2．将透析袋放置在装有透析液的容器中，透析液的体积必须是蛋白质溶液的20-100倍，溶液最好处于搅拌状态。用户可以用适合后续实验的任何缓冲液作为透析液。每次透析3-4小时，共透析2-3次。可以用自备的*氏试剂检测透析袋外面溶液是否还有残留的铵离子来检测透析是否完成。
3．将透析后的溶液全部转移到离心管中，15000×g 4℃离心15分钟，上清液即为浓缩后的蛋白溶液。可以放-80℃冰箱保存或立即用于后续的实验。
4．如果需要快速测定蛋白质的浓度，可取少许样品作适当倍数稀释后，用紫外分光光计测280nm和260nm的光吸收，再计算其浓度，计算公式为：蛋白浓度(mg/mL)＝(1.45×OD280-0.74×OD260)×样品稀释度。

附二：多克隆抗体的浓缩
1．将待处理的血清样品在4℃或室温20000×g离心30分钟，收集上清。
2．取上清20mL与等体积的自备生理盐水混合后，于搅拌下缓慢滴加40mL溶液A。
 注：加等量生理盐水的目的是将蛋白质含量降低到2.5-3.0%，否则其他蛋白质会跟抗体一起共沉淀。
3．冰上放置30分钟以上或过夜，使蛋白质充分沉淀。
4．将溶液转移到旋盖塑料离心管中，15000×g 4℃离心10分钟，弃上清。
5．用12mL自备生理盐水溶解蛋白质沉淀。
6．于搅拌下缓慢滴加8mL溶液A，冰上放置1小时使蛋白充分沉淀。
7．将溶液转移到旋盖塑料离心管中，15000×g 4℃离心10分钟，弃上清。
8．用13.3mL 生理盐水溶解蛋白质沉淀。
9．于搅拌下缓慢滴加6.6mL溶液A，冰上放置1小时使蛋白充分沉淀。
10．将溶液轻移到旋盖塑料离心管中，15000×g 4℃离心10分钟，弃上清。
11．用少许生理盐水溶解蛋白质沉淀，并转移到透析袋中。
12．用大于20-100倍体积的PBS 于4℃对蛋白质溶液进行透析，更换透析液数次，然后让蛋白质溶液置-80℃保存或用其他方法进一步纯化。

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