北京Vent DNA聚合酶现货

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北京Vent DNA聚合酶现货由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多Vent DNA聚合酶等工具酶产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：北京Vent DNA聚合酶现货
品牌：百奥莱博
编号：BTN130602
产地：国产|进口
Vent DNA聚合酶是一种高保真的耐热DNA聚合酶，其保真度比Taq DNA聚合酶高5倍。该酶具有高保真性的原因，部分是由于其自身具有3´→5´核酸外切酶校读活性。在 95℃温育1小时后，仍具有90%以上的聚合酶活性。Vent(exo-)DNA聚合酶是Vent DNA聚合酶经基因工程改造而得，去除了3´→5´核酸外切酶校读活性，它是应用于高产量PCR的首选酶，其保真度有所降低，大约比Taq DNA聚合酶高2倍。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

更多有关北京Vent DNA聚合酶现货的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·核酸外切酶T
编号：BTN130627
英文名称：Exonulease T
规格：250U
核酸外切酶T(Exo T)又称核糖核酸酶T(RNase T)，沿 3´→5´方向特异性作用于单链RNA或DNA的3´突出末端。核酸外切酶T作用于3´突出末端，产生RNA或DNA分子的平末端。

产品特点：
➤特异地作用于单链DNA或RNA；
➤ 使DNA或RNA的3´突出端变为平齐末端；
➤ 无核酸内切酶和外切酶污染。

产品组成：

 

成分	规格
核酸外切酶(5000U/mL)	50μL
10×Buffer	1ml
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期半年。

热失活：65℃ 加热 20分钟。

活性定义：1单位指 100μl反应体系中，25℃条件下，30分钟从1nmol[³H]-标记的多聚胸腺嘧啶生成0.1nmol TCA可溶性DNA所需要的酶量。

·Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒
编号：BTN131083
英文名称：Ribo-SPIA RNA Amplification Kit
规格：20次
血液样品和各种临床样品(包括组织检查、FFPE切片或少量细胞样品)都是基因表达分析和诊断的常见材料，但这些样品通常数量有限，质量不高，还没法进行第二次取样。所以得到足够RNA量供后续试验是一个非常棘手的瓶颈。为解决这一问题，本公司根据Ribo-SPIA技术，开发了本产品。Ribo-SPIA技术的核心是利用DNA/RNA嵌合引物，以带polyA尾巴的mRNA为模板进行逆转录并得到双链cDNA、RNase H不间断地在cDNA第1链中的RNA部分产生裂口，DNA聚合酶以此裂口为基础进行链取代聚合反应，产生cDNA单链。

产品特点：
1.高效，能线性扩增1000-10000倍，能用5-100 ng总RNA模板扩增得到5μg左右的单链cDNA(扩增的cDNA主要来源于总RNA中的mRNA)。
2. 步骤简单方便，扩增在恒温进行，只需要4个小时，不需要特殊仪器设备。
3. 保真性好，保持RNA样品中各分子的相对丰度。
4. 尤其适用于RNA产量和质量都不高的样品。
5.扩增得到的单链cDNA能直接用于各种后续试验，包括qPCR、芯片分析、杂交反应等。
6. 本产品足够做10次双链cDNA的合成，20次SPIA扩增。

试剂盒组成：

成分	规格
cDNA一链合成缓冲液	40μl
MMLV逆转录酶	10μl
cDNA二链合成缓冲液，5×	160μl
cDNA二链合成酶混合液20×	40μl
SPIA RT引物	40μl
SPIA反应液，5×	320μl
SPIA扩增引物	320μl
SPIA酶混合液	120μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为1年。

使用方法：

一：样品RNA的制备
本产品不含RNA相关试剂，用于Ribo-SPIA扩增的每个批次的RNA样品最好先做一个预实验。总RNA样品的浓度必须在1-20ng/μL，一次RIBO-SPIA所需总RNA的量为1ug。也可以使用mRNA，一次Ribo-SPIA所需总mRNA的量为5-100 ng。过低则需要浓缩，过高则需要用无RNase的水稀释。RNA必须经过DNase处理，不能含DNA污染。微量提取时不能使用核酸类的助沉剂。注意：本产品只能扩增含带polyA尾巴的RNA，不能扩增DNA和不含polyA尾巴的RNA。

二：一管式双链cDNA的合成
1.在0.5mL PCR管中，按下表配制双链cDNA合成反应。
注意：最好每次实验设置一个阴性对照组，在此对照中用超纯水替代自备的mRNA或总RNA:

成分	用量
自备mRNA或总RNA	4μL mRNA(5-100ng)或4μL总RNA(1ug)
SPIA RT引物MTA3 20uM	1μl
65℃，5分钟后室温放置2分钟，短暂离心后放4℃
cDNA一链合成缓冲液	4μl
MMLV逆转录酶	1μl
轻柔吹打混匀后得到10μL的反应体系。42℃保温90分钟合成第一链cDNA。结束后70℃保温15分使酶变性，最后4℃放置，然后加入下列成分，得到80μL反应体系。
超纯水	50μl
cDNA二链合成缓冲液	16μl
cDNA二链合成酶混合液	4μl
轻柔吹打混匀后，短暂离心，16℃保温2小时合成cDNA第二链，然后75℃ 15分灭活酶，最后4℃放置待用

三：SPIA扩增
2.在0.5mL PCR管中，按下表配制20μL的SPIA反应体系。注意：最好设置两个阴性对照组，在此两个对照中分别用超纯水替代SPIA引物和cDNA双链反应液。

成分	用量
cDNA双链反应产物	40μL(来于上步)
SPIA扩增引物10uM	16μl
SPIA反应液，5×	16μl
超纯水	42μl
94℃20秒后50℃放置复性待用
SPIA酶混合液	6μl
轻柔吹打混匀后得到120μL反应体系，50℃扩增60分钟，最后4℃放置

四：SPIA扩增产物的检测
3. 取5μL SPIA扩增产物进行PAGE电泳检测。标准的反应结果是产生长度在200-2000bp之间的产物。
4. 如果产物将用于PCR定量，则可以不经过纯化直接使用，如果需要用于芯片杂交和浓度测定，则需要按常规的方法纯化cDNA以便去除残留的dNTP和引物。
5. OD检测纯度和浓度。在OD260的波长下测样品你给的光吸收。由于扩增产物是单链DNA，故1OD260=33ug/mL。
6. 所得DNA可以放-20℃长期放置。


北京Vent DNA聚合酶现货关键词：Vent DNA聚合酶,BTN130602,Vent DNA Polymerase

ARB12696 大鼠凝溶胶蛋白(GelsolIn)检测服务 Rat gelsolin ELISA KIT
ARB10720 人军团菌抗体IgG(LP Ab-IgG)ELISA代测服务 Human legionella antibody igg,lp ab-igG ELISA KIT
ARB10982 人免疫球蛋白样转录体受体(ILTsR/LIR/CD85)Elisa定量检测 Human ig-like transcripts receptor,iltsr ELISA KIT
ARB10567 人过氧化脂质/乳过氧化物酶(LPO)含量测试 Human lipid peroxlde,lpo ELISA KIT
多聚甲醛-戊二醛混合固定液(2%/2.5%)   500ml
F030111 HRP标记羊抗乙肝核心抗原抗体 HRP*Polyclonal Goat Anti-HBcAg
硫*(代"脲") Malachite green oxalate 62-56-*(代"6")
BL1273 *仿：异戊醇＝24：1
ARB13842 猪二胺氧化酶(DAO)Elisa分析 Porcine diamine oxidase,dao ELISA KIT
002002 无菌脱纤维兔血
ARB14070 甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)ELISA检测服务 
BFD073 H9亚型禽流感抗原快速检测卡
F030807 BIOTIN标记山羊抗小鼠IgG2b抗体 Goat Anti-Mouse IgG2b*BIOTIN
SJ0706 IPTG 200mg/ml
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液体样本蛋白提取试剂盒 Liquid sample protein extraction kit  50T|100T
37348-90-4 两性电解质4-6
ARB11498 人脂质运载蛋白2(LCN2)血清中含量检测 Human lipocalin 2,lcn2 ELISA KIT
BTN60905 MMLV逆转录酶 MMLV Reverse Transcriptase
Acr-Bis(30%:0.8%)   500ml
北京Vent DNA聚合酶现货关键词：Vent DNA聚合酶,BTN130602,Vent DNA Polymerase


·10%Sarkosyl溶液(DNA级)
编号：BTN100914
规格：250mL

·一管式琼脂糖凝胶DNA回收试剂
编号：BTN60706
英文名称：One-tube DNA agarose gel recovery reagent
规格：30次
本产品可以直接从溶化的琼脂糖凝胶中沉淀回收单双链DNA的产品，也堪称最快速的胶回收试剂,操作时间只有玻璃奶式和柱式胶回收方法的1/3左右。本产品也可以用于单双链RNA胶回收。

产品特点：
1.超快，整个过程不到15分钟(对一个样品而言)，由溶胶(3分钟)，放置(2分钟)，沉淀(5分钟)和两次洗涤(各1-2分钟)几步组成。
2. 纯度高，回收产物可以直接用于连接、酶切、PCR、测序等各种反应，不影响后续酶反应。
3. 回收率高，一般大于50%。
4.适用范围广，可用于回收普通琼脂糖凝胶能够分离的DNA片段(一般在100bp-50 Kb 之间)，而柱式同类产品几乎都不能回收50 Kb的超大片段。
5.一管式操作，不需要任何样品转移步骤，使大片段DNA 保持完整，同时减少了污染的可能。
6. 既可用于回收单双链DNA，又可用于回收单双链RNA。
7.扩容性好，可以在一个离心管中(包括15mL或50mL离心管)进行大规模回收，没有最大吸附量的限制；而柱式胶回收试剂都受最大吸附量的限制。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	9ml
溶液B	3ml
溶液C	30ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。
  溶液A呈淡黄色，溶液B呈红色，如果颜色发生变化，则表示pH已经改变，请弃之不用。溶液C为无色液体，会在瓶底产生少量晶体状产生沉淀，用前无需溶化，避开沉淀直接取上清液使用)。

使用方法：
1.从琼脂凝胶上切下目的DNA片段，放入1.5mL离心管中。尽可能多地去掉不含DNA的胶。如果方便最好称重以便估计需要的溶胶液(空的1.5mL离心管EP 约0.9 克，一片普通胶片的重量在0.05-0.1 克左右)。
2. 按0.1 克胶加300μL溶液A的比例加入溶液A，65℃保温3分钟使胶融化。其间可用摇晃几次以促进凝胶融化。如果放量使用，溶化胶的时间可能需要延长。
3. 待胶完全溶化后，按0.1 克胶加100μL溶液B的比例加入溶液B，充分混匀。如果回收20 Kb以上的DNA片段，混匀时需要温和震荡；对20 Kb以下的DNA片段，可以剧烈震荡。
4.室温静置至少2分钟，此时管内将出现大量红色颗粒状沉淀。此步十分关键，不能省略而直接离心。
5. 13000 g室温离心5分钟后，小心吸弃上清，管底将有黄豆大小的红色沉淀。
6. 加入0.8mL溶液C，充分震荡混匀。注意：溶液C瓶底有晶体状沉淀，用前无需溶解，但取用溶液C时需要避开沉淀。
7. 13000 g室温离心2分钟，小心吸弃上清，管底将有芝麻大小的白色沉淀。
8. 再用0.2mL溶液C重复第6-7 步一次，管底还有芝麻大小的白色沉淀。
9.小心吸弃上清后即得纯化的DNA沉淀，加入少量TE或水，充分吹打溶解。最后还会有少量白色不溶沉淀，属于正常现象。

疑难解答：
Q：电泳为何不能检测到回收的DNA？
A：最可能原因是各步加入溶液后没有充分震荡混匀，其次是沉淀在各步吸弃上清时候不小心吸走而丢失，三是溶液A和溶液B的pH发生改变。
Q：电泳时为何有残留荧光物在加样孔中？
A：可能是琼脂糖凝胶中的杂质吸附的DNA，吸取DNA样品时最好短暂离心，只取上清液。这些不溶杂质一般不影响后续反应。使用高纯度的琼脂糖可以减少杂杂质的污染。我们一般使用OXOID的琼脂糖，得到的DNA可以用于常见的分子生物学后续反应。

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