5´末端同位素标记试剂盒现货

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百奥莱博专业生产供应5´末端同位素标记试剂盒现货，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：5´末端同位素标记试剂盒现货
规格：20次
英文名：DNA 5´End-Labeling Kit
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：BTN131036
本产品为DNA 5´末端标记系统，利用T4 Polynucleotide Kinase(T4多聚核苷酸激酶)和［γ-32P］ATP 对粘性末端或平末端的DNA或RNA的5´末端进行高效标记反应。原理如下：


产品特点：
1. 使用本试剂盒之前，不需要对 5´末端的磷酸基团进行去磷酸化处理，因为使用的kinase 能使5´末端的磷酸与[γ-32P]ATP的γ-磷酸进行交换。
2. 合成的单链或双寡核苷酸的5´末端游离的OH基团都能通过Kinase反应被标记(或者只是简单的磷酸化)。
3. 提供的两种反应液使交换反应和磷酸化反应都能高效进行，均能得到大于106 cpm/pmol(5´-end)的比活性。

试剂盒组份：

 

成分	规格
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	20μl
5×交换反应缓冲液	100μl
10×磷酸缓冲液	50μl
Control DNA	20μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、交换反应
1. 实验前需自备的试剂：7 M 醋酸铵、100%乙醇、70%乙醇等
2.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的5´磷酸化DNA片段	14μL(≤5 pmoles的5´末端)
5×交换反应缓冲液	5μL
[γ-32P]ATP	5μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

注：5 pmoles的5´末端约等于0.17μg的长100bp的双链DNA。
3. 37℃反应30分钟。
4. 70℃加热5～10分钟使酶失活。
5. 加入10μl的7 M CH3COONH4(pH4.5)。如使用CH3COONa做乙醇沉淀时使其终浓度达300mM。
6. 加入87.5μl(2.5倍)的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。
7.离心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。
8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。
注：通过第5～8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP，如要完全将其除去时，乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*酚抽提除去蛋白质时，请在第8 步之后进行。

二、磷酸化反应标记

A. 去磷酸化反应
1. 实验前需自备的试剂：TE 饱和酚/*仿、3 M NaCl 、100%乙醇、70%乙醇、牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)等
2.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的DNA片段	133μL(≤10μg)
1M Tris-HCl，pH8.0	15μL
牛小肠碱性磷酸酶(CIAP，10～20U/μL)	2μl
灭菌的超纯水	补足到150μL

3. 50℃反应30分钟。
4. 加入150μl的TE 饱和酚/*仿/异戊醇(25：24：1)，充分混匀。
5.离心，取上层(水层)移到另一个微量离心管中。
6. 重复操作 4～5。
7. 加入7.5μl的3 M NaCl(最终浓度150mM)。
8. 加入375μl(2.5倍量)的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。
9.离心回收沉淀，用 1mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。
10. 使用 20μl的TE Buffer 溶解沉淀。

B. 磷酸化反应(前反应)
1.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的DNA片段	20.5μL(≤5 pmoles的5´末端)
10×磷酸缓冲液	2.5μL
[γ-32P]ATP	1μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

2. 37℃反应30分钟。
3.下面的操作与交换反应的第4-8 步操作相同。

三、合成DNA 寡核苷酸的标记
1.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
Oligonucleotide DNA with free 5´-OH(5～10 pmoles)	≤3μL
10×磷酸缓冲液	2.5μL
[γ-32P]ATP	1μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

2. 37℃反应30分钟。
3.下面的操作与交换反应的第4-8 步操作相同。

四、合成DNA 寡核苷酸的标记
当掺入水平很低的时候，需要使用本步骤，即通过体积排阻色谱或过滤试剂盒除去未反应的标记。Sephadex G-50 层析柱(需另购)对于去除未掺入的dNTPs效果很好，它还能大幅减少小于20个碱基的DNA 寡核苷酸和小于20bp的双链DNA的量。使用之前需要在70℃加热5～10分钟以使T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 层析柱可以用来纯化长度不小于10个碱基的寡核苷酸。

注意事项：
1.缓冲液可在室温融解。融解后立即置于冰中，使用前充分混匀。
2. 5×交换反应缓冲液于-20℃冻结保存时会有白色浑浊出现，但不影响反应效果。
3.酶切得到的DNA片段需经乙醇沉淀等方法纯化。
4. 当用于交换反应的DNA在5 pmoles以上(约1,000bp以上)时，标记效率有时会低于106 cpm/pmol。
5. 如果交换反应所用 DNA低于500bp时，标记效率有时会有所降低。
6. 若不进行放射线标记，仅使用本试剂盒做5´末端磷酸化反应时，反应体系中的［γ-32P］ATP可用5μl的10mM ATP 代替。
7. 磷酸化反应时的［γ-32P］ATP可用［γ-35S］ATP 替代。

使用举例：
按照使用方法中交换反应和合成DNA 寡核苷酸的标记的实验操作，取λ-BstP I，λ-Hpa I，λ-EcoT22 I 各3 pmols，用［γ-32 P］ATP 通过正向磷酸化反应或交换反应标记。各DNA片段的放射自显影结果如下所示：


欲咨询购买5´末端同位素标记试剂盒现货，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·电泳级MOPS(3-N吗啉代丙磺酸)
编号：BTN100933
英文名称：3-(morpholino)propanesulfonic acid
规格：100g
MOPS的全名是3-(N-吗啉代)丙磺酸，分子式为C7H15NO4S，pKa=7.2，分子量为209.27。CAS号为1132-61-2。本品为白色粉末；主要用于配制RNA电泳和转膜缓冲液，也可作为二维凝胶电泳中等电聚焦电泳(IEF)的电解质系统成分。

储存条件：常温运输及保存，有效期两年。

·葡激酶
编号：BTN130875
英文名称：Staphylokinase
规格：100μL
葡激酶，又称金葡菌激酶或SAK，是从金黄色葡萄球菌中分离出来的一种能够特异性溶解血栓的酶类物质。葡激酶与血栓中的纤维蛋白有较高的亲和力，它能在血栓的部位与纤溶酶原结合，此结合物能够激活纤溶酶原转变为纤溶酶，从而溶解血栓。免疫原性较streptokinase强。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。


·植物专用蛋白酶抑制剂
编号：BTN130528
英文名称：Protease Inhibitor for Plant
规格：1mL
本产品为植物蛋白酶抑制混合液，溶剂为DMSO。组织/细胞裂解时会释放出大量的内源性蛋白酶，引起蛋白质的降解，影响试验结果。加入外源性蛋白酶抑制剂，抑制蛋白酶的活性，防止蛋白降解，已经成为蛋白质研究的常规操作。

产品特点：
1. 即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。
2.含有AEBSF、bestatin、E64、leupeptin、pepstatin A、0-phenanthroline等蛋白抑制剂。
3. 入到植物裂解液中，能特异性抑制丝*酸蛋白酶 、半胱*酸蛋白酶、天门冬*酸蛋白酶、金属蛋白酶和*基肽酶的活性，维持蛋白的完整性。
4.与各种植物细胞裂解液兼容。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
临用前震荡混匀植物专用蛋白酶抑制剂(100×)，按照1mL本产品：30g植物细胞所得的裂解液的比例，将本产品加入到植物细胞裂解液中，混匀，裂解植物细胞，并继续后续的实验操作。


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·miRNA分离纯化试剂盒(凝胶法)
编号：BTN130972
英文名称：miRNA isolation Kit(Gel method)
规格：50次

·Western印迹膜封膜液(尼龙膜)
编号：BTN100878
英文名称：Western Blot Blocking Buffer
规格：250mL
Western Blot实验中，为防止印迹膜与检测系统中的蛋白成分(如抗体IgG等)发生非特异性吸附，导致实验结果不清晰，在进行一抗孵育前需预先对印迹膜上的非特异结合位点进行封闭。无蛋白封闭液可最大限度减少交叉反应引起的非特异性背景。本产品可快速高效地封闭膜上多余的结合部位，减少非特异结合情况的产生，降低背景，适用于各种转印膜的封闭。

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。

·硅胶膜离心吸附柱系列(小量提取)
编号：BTN60911
英文名称：Silica Spin Column for Miniprep
规格：50套
硅胶膜离心吸附柱目前广泛用于基因组DNA提取、总RNA提取、DNA反应纯化、DNA胶回收和质粒DNA制备等分子生物学实验，但是由于硅胶膜吸附核酸的能力千差万别(详细分析见百奥莱博综述Silica-DNA结合原理及影响因素)，使得市场上相关产品的质量也良莠不齐。百奥莱博经过精心研究，找到特殊的化学修饰方法，使普通硅胶膜吸附核酸的能力大为增加，好于市场上绝大多数产品。本产品就是基于化学修饰硅胶膜的微型离心吸附柱。

产品特点：
1.高载量，在同等上样条件下吸附能力比同类产品高1-2倍左右。
2.上样体积为0.7mL。
3.与各种常用的，基于Silica-DNA结合原理的上柱液和洗柱液兼容。
4.可以再生使用(需要百奥莱博的离心吸附柱再生液)。
5. 结合DNA的性能不会随放置的时间变化。

储存条件：常温运输及保存，有效期两年。

使用效果：

图注: 本产品(T)和国内杭州V公司离心吸附柱(V)用于从1.5mL E.coli菌液中提取pGEM3质粒DNA(使用百奥莱博柱式质粒DNA提取试剂盒试剂)，最后用100μl TE洗脱质粒DNA，5μl用于电泳。

图注: 本产品(左)和上海S公司离心吸附柱(右)用于从玉米叶片中提取总RNA。洗脱量为100μl，10μl用于甲醛胶变性电泳。


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002005 草酸*抗凝羊血 100ml|500ml
SJ0695 D15000 plus
ARB13975 猪脂联素(ADP)含量测试 Porcine adiponectin,adp ELISA KIT
巴氏染色液(EA50) Papanicolaou EA50  4×100ml|4×500ml
BL0991 多价胨
BTN131102 生物素化兔IgG Biotin-Rabbit IgG
BTN60201 非酶DNA清除剂 DNA Erasol
BFD074 鸡新城疫抗体快速检测卡
对甲*亚磺酸* p-Phthalaldehyde 824-79-3
*化乙锭清除液   50T|100T
ARB10238 人ω干扰素(IFN-ω)Elisa分析 Human interferon ω,ifn-ω ELISA KIT
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鲁哥氏染色液(Lugol"s碘液,5%)   100ml
ARB12564 大鼠胸腺基质淋巴生成素(TSLP)ELISA代测服务 Rat thymic stromal lymphopoietin，tslp ELISA KIT
ARB10457 人生长调节致癌基因γ(GRO-γ)酶联免疫定量检测 Human growth-regulated oncogeneγ,gro-γ ELISA KIT

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