KOD DNA聚合酶优惠促销

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KOD DNA聚合酶优惠促销是高品质的工具酶产品，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多KOD DNA聚合酶等工具酶产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：KOD DNA聚合酶优惠促销
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：BTN101002
规格：250U
KOD DNA Polymerase是从克隆有Thermococcus Kodakaraensis DNA聚合酶基因的质粒在大肠杆菌中经诱导表达分离纯化而来。该酶所具有的超强3´→ 5´外切酶活性使得其扩增保真性比Pfu DNA Polymerase更高，保真性是Taq的约50倍，同时具有合成速度快的特点，聚合速度约为普通Pfu DNA Polymerase的5倍，Taq DNA Polymerase的2倍，达到100-138bp/秒，可以在短时间内获得高产量的扩增产物，特别适合于高保真地扩增6 kb以内的PCR产物，扩增所得的DNA为平末端，可用于基因克隆、表达及突变分析等分子生物学实验。

产品组成：

 

成分	规格
KOD DNA聚合酶(5U/μL)	5μl
10×KOD DNA聚合酶缓冲液	1ml
dNTP mix(10mM Each)	0.1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存、有效期一年。

活性定义：1U指75℃条件下，30分钟内使10nmoles的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

使用方法：
一、建议PCR条件(以50μl反应体系为例)

成分	体积	终浓度
模板	-	＜0.5μg
正向引物(10μM)	1μl	0.2μM
反向引物(10μM)	1μl	0.2μM
10×KOD DNA聚合酶缓冲液	5μL	1×
dNTPs(10mM each)	1μL	0.2mM
KOD DNA聚合酶	0.25-0.5μL(1.25-2.5U)	-
超纯水	补足到50μL	-

注：实际操作中计算好需补加水的量后，建议先加水，然后按上述顺序添加其它成分，最后添加KOD DNA聚合酶。最好在冰浴上混合PCR各种成分，防止KOD DNA聚合酶降解引物和模板。待各成分充分混匀后，离心数秒，使反应混合物沉到管底。然后将反应管置于PCR仪中进行扩增。

二、关于
PCR条件的优化
1.质粒或者噬菌体模板(模板量5-20ng，循环参数如下表)

循环参数	目标DNA<1kb	目标DNA<2kb	目标DNA3-4kb	目标DNA5-6kb
Step 1	94℃ 2分钟	94℃ 2分钟	94℃ 2分钟	94℃ 2分钟
Step 2	94℃ 20秒	94℃ 20秒	94℃ 20秒	94℃ 30秒
Step 3	Ta 20秒	Ta 20秒	Ta 20秒	Ta 30秒
Step 4	72℃ 20秒	72℃ 30秒	72℃ 40秒	72℃ 60秒
Step 5	72℃ 5分钟	72℃ 5分钟	72℃ 5分钟	72℃ 5分钟
Repeat step 2-4 for 30-35个循环
Ta=Tm－5℃

2.基因组DNA和cDNA模板(基因组DNA模板量为50-100 ng，1-2μl cDNA(起始转录用的RNA为500 ng)，循环参数如下表)

循环参数	目标DNA<2kb
Step 1	94℃ 2分钟
Step 2	94℃ 20-30秒
Step 3	Ta 15-20秒
Step 4	72℃ 20-60秒
Step 5	72℃ 5分钟
Repeat step 2-4 for 30-35个循环
Ta= Tm - 5℃

关于KOD DNA聚合酶优惠促销的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：
增强革兰氏染色液   4×10ml|4×100ml|4×250ml
依来铬*蓝R D-Prolinamide 3564-18-9
*丙*(代"酮")酸* 5′-UDP,2Na 114-76-1
ARB12080 大鼠内毒素(ET)定量分析 Rat endotoxin,et ELISA KIT
ARB13019 小鼠低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)酶联免疫定量检测 
4-甲基伞形酮酰-β-D-吡喃葡糖酸苷 Ceftazidime 18997-57-4
ARB11074 人软骨糖蛋白39(HC gp-39)elisa检测说明书 Human cartilage glycoprotein 39,hc gp-39 ELISA KIT
ARB10502 人白细胞介素11(IL-11)尿液中含量检测 Human interleukin 11,IL-11ELISA KIT
BL0946 生物素化兔抗鸡IgG抗体
黑色素清除液   2×100ml
四盐*(代"酸")精胺 DL3000 DNA Marker 306-67-2
氧化金 Alu-Gln 1303-58-8
磷钨酸* GAPDH 51312-42-6
PY08-064  脑心浸出液肉汤(BHI)  5ml  10支/盒，用于链球菌及其他对营养苛求菌的培养
KOD DNA聚合酶优惠促销关键词：KOD DNA聚合酶,BTN101002,KOD DNA Polymerase

F030208 HRP标记山羊抗小鼠IgG1抗体 Goat Anti-Mouse IgG1*HRP
137-08-6 D-泛酸* D-Pantothenic acid(Vitamin B5)
PY01-117  琼脂粉  日本进分  100克  
ARB11654 人蛋白酪*酸磷酸酶(PTP/PTPAse/CD148)ELISA检测服务 Human protein tyrosine phosphatase,ptp/ptpase ELISA KIT
ARB12921 小鼠白细胞介素5(IL-5)酶免分析 Mouse interleukin 5,IL-5 ELISA KIT
D0202 脱纤维山羊血(无菌 袋装)
ARB11614 人麻疹病毒IgM(MV IgM)ELISA代测服务 Human measlesvirus igm,mv igM ELISA KIT
BTN131155 山羊抗小鼠IgG,荧光素555标记 Goat Anti-Rabbit IgG ,IF555 Conjugate
F020230 山羊抗猪IgG抗体 Goat Anti-Pig IgG
对甲*甲*(代"酸") TRIS-HC1 99-94-5
ARB11439 人真胰岛素(TI)酶免分析 Human true insulin,ti ELISA KIT
PY02-016  霉菌培养基  250克  
ARB11399 人神经细胞粘附分子配体1(NCAM-L1/CD171)ELISA检测服务 Human neural cell adhesion molecule ligand 1,ncam-l1 ELISA KIT
J0301 兔抗人IgG(H+L)抗血清 1ml/10ml
ARB13013 小鼠抗凝血酶受体(ATR)Elisa分析 Mouse anti-thrombin receptor,atr ELISA KIT
BTN101113 柱式软体动物RNAOUT Column Mollusk RNAOUT
甘油激酶 Strepomycin sulfate 9030-66-4
KOD DNA聚合酶优惠促销关键词：KOD DNA聚合酶,BTN101002,KOD DNA Polymerase


·5´RACE试剂盒
编号：BTN101105
英文名称：5´-RACE Kit
规格：10次
研究真核基因的最基础的工作之一就是确定其转录终止位点，目前最通用的方法是5´-RACE法，RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)是Frohman发明的、通过PCR快速克隆cDNA末端的技术，它在不建立cDNA文库的前提下，利用已知cDNA序列设计引物，通过往两端延伸和扩增获得其5´-端序列。本试剂盒就是根据5´-RACE原理而开发。RACE的原理如下图：


产品特点：
1. 即开即用，客户不需要单独准备各种材料。
2.反应条件经过精心优化，包括使用无RNase H活性的MMLV和优化的引物。

试剂盒组成：

成分	规格
MMLV逆转录酶-RI混合液(RNase H-，200U/μL)	10μl
MMLV Buffer-dNTP混合液	60μl
微量核酸沉淀剂	400μl
TdT(末端转移酶)	10μl
2×TdT Buffer(含dATP)	100μl
PCR MagicMix 3.0	1.5ml
5´-RACE引物A-引物B混合液	100μl
5´-RACE引物C	100μl
RNase-Free水	1ml

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

使用方法：

1.变性模板RNA：将1μg mRNA或5μg总RNA加入到一个RNase-free的PCR管中，补RNase-Free水到9μL，65℃保温5分钟后短暂离心，立即放冰上待用。如果RNA浓度偏低，体积超过9μl,可以使用本公司的核酸浓缩剂(需另购,产品编号为BTN110801)浓缩到所需的体积。
2. 设置RT反应(用户可以根据需要设阴性对照)：在上步的含变性后的RNA模板的PCR管中，按顺序加入：

成分	用量
自备的基因专一性引物A(10μM)	4μl
MMLV Buffer-dNTP混合液	6μl
MMLV逆转录酶-RI混合液	1μl
合计	20μl

3. 37℃保温60分钟，42℃保温30分钟，50℃保温10分钟，最后75℃保温10分钟使逆转录酶变性。
4. 短暂离心5秒后待用。
5.在PCR管中加入40μl微量核酸沉淀剂(本产品含不溶的核酸助沉剂，用前需要充分摇匀再取用)，震荡混匀。
6.室温12000rpm离心15分钟，小心吸弃上清。
7. 加入1mL自备75%乙醇，室温12000rpm离心5分钟，小心吸弃上清。
8. 短暂离心数秒，小心吸弃残留液体后，稍微晾干后加入10μL RNase-free水，充分吹打溶解，得到cDNA溶液。注意：为保证加尾效率，溶解cDNA的RNase-free水最好不要超过10μl。
9. 加尾反应：在10μL cDNA溶液中加10μL 2×TdT Buffer(含dATP)和1μL TdT酶，轻柔吹打混匀。
10. 37℃保温15分钟进行加尾反应，然后75℃保温3分钟灭活末端转移酶。
11. 加入0.5mL RNase-free水稀释加尾反应体系。此稀释液将作为PCR的模板。
12. 第一轮PCR：用不同量的稀释后的加尾反应液设置PCR反应(样品组最好设用量梯度，单位：μL)。

成分	梯度1	梯度2	梯度3	梯度4
PCR MagicMix 3.0	25	25	25	25
自备基因专一性引物B(10μM)	2.5	2.5	2.5	2.5
5´RACE引物 A-引物B混合液	2.5	2.5	2.5	2.5
稀释后的加尾反应液	1	5	10	15
RNase-free 水	19	15	10	5
合计	50	50	50	50

13. 按下列条件进行 PCR(注：应根据实际情况选择适当的退火温度)。
 第1次循环：94℃ 5分，48-52℃ 2分，72℃ 4分
 第2-30次循环：94℃ 40秒，52-60℃ 1分，72℃ 3分
 最后延伸：72℃ 15分
14. 取10-20μL PCR产物进行琼脂糖电泳电泳检查PCR结果，如果一条清晰的条带，则可以不做后续的第二轮PCR，而直接进行 DNA 测序或TA克隆。
15. 第二轮PCR：如果第一轮PCR没有一条清晰的条，则带从4管PCR产物中各取1μL分别加入到20μL RNase-free水中进行稀释，然后各取1μL分别作为4管第二轮PCR的模板：

成分	用量
第一轮 PCR产物的稀释液	1μl
PCR MagicMix 3.0	25μl
5´RACE引物 C	2.5μl
自备基因专一性引物 C(10μm)	2.5μl
RNase-free 水	补水至50μl
合计	50μl

16. 按下列条件进行 PCR：第 1-30次循环(94℃ 40秒，52-60℃ 1 分，72℃ 3分)，最后延伸：72℃ 15分
17. 取10-20μL第二轮 PCR产物进行琼脂糖电泳，一般都会有一个样品有清晰的条带出现，则可以直接进行DNA测序或TA克隆。

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