北京现货甲基化专一性PCR试剂盒销售

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京现货甲基化专一性PCR试剂盒销*(代"售")的品牌：百奥莱博，是优质的基因结构和功能产品，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多甲基化专一性PCR试剂盒等基因结构和功能产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：北京现货甲基化专一性PCR试剂盒销*(代"售")
英文名：Methylation Specific PCR Kit
产地：国产|进口
规格：50次
编号：BTN100923
本产品是基于PCR的甲基化DNA检测试剂盒(即MSP试剂盒)。它由两个成分组成，一个是亚硫*(代"酸")*盐试剂盒，用于将DNA中所有没有甲基化的C转化成U，而甲基化的C不变。二是优化的PCR试剂盒，利用客户自备的专一性引物，根据PCR来检测甲基化位点的位置。

产品特点：
1．本产品是亚硫*(代"酸")盐修饰试剂盒和即用型PCR 3.0的整合，即开即用，非常方便。
2．柱式DNA回收方法极大提高亚硫*(代"酸")盐修饰后DNA的回收率。
3．优化的PCR mix，含有PCR所需要的所有成分，减少了操作误差。
4．PCR结束后可以直接上样电泳，非常方便。
5．用户需要自备MSP专一性引物。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	5ml
溶液B成分一(干粉)	2.3g×5瓶
溶液B成分二(干粉)	110mg×5瓶
通用溶胶液	50mL×2
离心吸附柱	50套×2
通用洗柱液	100mL
DNA洗脱液	10mL
PCR MagicMix 3.0	1.5mL
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存(PCR MagicMix 3.0要低温运输，-20℃保存)，有效期一年。

自备试剂：超纯水、MSP引物、对照DNA模板和引物。
 注：严格的实验一般要求下列5种对照DNA模板和相应的引物对，用户可以根据自身实验的要求只做其中的部分。

对照名称	起始DNA	处理
未修饰未甲基化DNA对照	未甲基化DNA (无甲基化宿主菌或体外扩增而得)	未经过亚硫*(代"酸")*盐修饰
已修饰未甲基化DNA对照	未甲基化DNA(同上)	经过亚硫*(代"酸")*盐修饰
未修饰甲基化DNA对照	甲基化DNA (用甲基化酶修饰未甲基化DNA而得)	未经过亚硫*(代"酸")*盐修饰
已修饰甲基化DNA对照	甲基化DNA(同上)	经过亚硫*(代"酸")*盐修饰
未修饰样品DNA对照	样品DNA	未经过亚硫*(代"酸")*盐修饰

使用方法：

Ⅰ．亚硫*(代"酸")*盐修饰
一、准备试剂
1．配制溶液B成分一溶液：加5.0mL超纯水和27μl溶液A到装有溶液B成分一干粉的棕色塑料瓶中，轻柔摇晃至溶(尽量少的剧烈摇晃，约需要5分钟)，总体积约5.5mL。
2．配制溶液B成分二溶液：加10mL超纯水到装有溶液B成分二干粉的棕色塑料瓶中，轻柔摇晃混匀(尽量少的剧烈摇晃)。
3．配制溶液B工作液：将55μL溶液B成分二溶液加入到溶液B成分一溶液中，轻柔颠倒混匀即可使用。一瓶溶液B工作液可以用10次。
二、DNA变性处理
1．将5μL溶液A加入到45μL DNA溶液中并吹打混匀(总体积没有45μL需要用水补足到45μL，DNA总量在0.2-5μg之间，不能超过 5μg，一般使用2μg DNA即可)。 注意：DNA必须是线状的，长度最好在20-50 Kb左右。基因组DNA可以预先用酶切处理(酶的位点不得在研究的DNA序列之内)，也可以用机械打断法处理(得到的DNA一般在20-50 Kb左右)。
2．37℃放置15分钟使DNA充分变性。
3．立即在DNA溶液中加入500μl溶液B工作液，轻柔颠倒混匀。
4．55℃避光保温8-16小时。如果使用水浴或没有热盖的PCR仪器保温，最好加50-100μL石蜡油，避免水分蒸发。
 注意：必须避光保温。55℃处理8小时足以使95%的C变成U，保温时间过长会引起DNA的断裂。如果有的区域的C难以转化成U，可以改用两步式PCR处理(每55℃保温3小时后95℃变性处理5分钟，共5-10个循环)，效果会更佳。
5．冰浴10分钟。
6．加入1mL的通用溶胶液，颠倒混匀后取一半溶液上柱。单链DNA会结合在离心吸附柱上，亚硫*(代"酸")*盐等将穿透过柱。
7．12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
8．取另一半溶液再上柱，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。单链DNA会结合在离心吸附柱上，亚硫*(代"酸")*盐等将穿透过柱。
9．加入0.7mL通用洗柱液，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以洗涤残留的亚硫*(代"酸")*盐。
10．干甩半分钟后，将离心吸附柱转移到一个新的离心管中，加入50μl新鲜配制的溶液A稀释液(5μl的溶液A原液与45μl的超纯水混合而得)，室温放置2分钟后离心半分钟。
11．将洗脱下来的DNA溶液放置在37℃保温15分钟。
12．加入0.7mL的通用溶胶液，混匀后上柱。
13．12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。单链DNA会结合在离心吸附柱上，杂质等将穿透过柱。
14．干甩半分钟后，将离心吸附柱转移到一个新的离心管中，加入50μl DNA洗脱液，室温放置2分钟后离心半分钟。
15．所得溶液即为亚硫*(代"酸")*盐修饰的DNA，可以用于下面的甲基化专一PCR。
 说明：此方法的回收率一般为50%，2μg DNA最后可以得到1μg的修饰后的DNA。由于修饰后的DNA呈长短不一的单链，EB染色效果很差，所以不能用灵敏度低的琼脂糖电泳-EB染色的方法检测，但可以用灵敏度更高的PAGE-银染方法检测。

Ⅱ．甲基化专一性PCR(以60μL的标准PCR反应体系为例)
1．在一干净的PCR管中，加入下列成分(冰上操作)：

成分	样品管	对照管
PCR MagicMix 3.0	30μl	30μl
亚硫*(代"酸")*盐修饰的DNA模板	100-500ng	无
对照DNA模板	无	100-500ng
自备MSP引物F	25pmol	无
自备MSP引物R	25pmol	无
对照模板专一性PCR引物F	无	25pmol
对照模板专一性PCR引物R	无	25pmol
补水到	60μl	60μl

 注：有5种对照DNA模板可以供用户根据自身需要选择，详见自备试剂栏。
2．将混合物混匀，放入PCR仪中进行热启动PCR，结束后取5-10μL PCR产品直接进行琼脂糖电泳。

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微丝染色液(R250法)   5×20ml|5×50ml
F030306 胶体金标记兔抗牛酪蛋白抗体 Rabbit Anti-casein*GOLD
ARB12927 小鼠半胱*酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)elisa检测 Mouse cystatin c,cys-c ELISA KIT
ARB13207 小鼠高灵敏度促甲状腺激素(U-TSH)Elisa方法检测 Mouse ultrasensitive thyroid-stimulating hormone,u-tsh ELISA KIT
ARB10138 人Podo*(代"c")in ELISA检测服务 Human podo*(代"c")in ELISA KIT
A0301 优级新生牛血清(无菌采制)
BL1294 考马斯亮蓝染色套装(染色液+脱色液)
HC0157 离心管盒(100孔)
槲皮素 L-phenylglycine ethyl ester?HCl 6151-25-3
ARB13281 小鼠睾酮(T)检测服务 Mouse testoterone,t ELISA KIT
ARB10794 人抗风疹病毒IgM抗体(Anti-RV IgM)ELISA代测服务 Human anti-rubella virus igM antibody,anti-rv igM ELISA KIT
SJ0197 DEAE Sepharose CL-6B
*化底醚翁 Glycerol phosphate calcium salt 518-67-2?
BTN131225 Carnoy固定液 Carnoy Solution
F050311 小鼠IgM抗体 Mouse IgM
4-甲氧基酚 Blue Sepharose 6FF 150-76-5
PY01-187  鸡肉浸粉  250克|1公斤  
3-硝基*(代"*")甲醛 Trimethylamin*(代"e") hydrochloride 99-61-6
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BL0878 兔抗人IgM免疫血清
**尼考 Papain 73231-34-2
环偶氮脒类引发剂VA-044 Dexamethasone 27776-21-2
磷酸*二*-磷酸二**缓冲液(pH4.92-9.18)  1/15mol/L 500ml
多聚半乳糖醛酸* Sulforhodamine B 9049-37-0
ARB11058 人松弛肽/松弛素(RLN)酶免分析 Human relaxin,rln ELISA KIT
ARB10853 人抗*蛋白酶抑素抗体(ACAST-DⅣ)酶标法分析 Human autoantibodies against the c-terminal domain Ⅳ,acast-dⅣ ELISA KIT
ARB12778 小鼠α1微球蛋白(α1-MG)含量测试 Mouse α1-microglobulin,α1-mg ELISA KIT
胰蛋白酶抑制剂混合物 Trypsin inhibitor mixture  1ml
BL0833 HRP标记亲和素
BL1096 通用细胞冻存液
ARB12160 大鼠白介素21(IL-21)尿液中含量检测 Rat interleukin 21,IL-21 ELISA KIT
丽春红S染色液(1×Ponceau S)   100ml|500ml
F030103 HRP标记小鼠抗乙肝表面抗原抗体 Monoclonal Mouse Anti-HBsAg*HRP
SJ0486 PHA-P  植物血球凝集素P
ARB12827 小鼠小肠结肠炎耶尔森菌抗体(YersInIA enterocolItIcA Ab)含量分析 
碱式乙酸铝 BBD 142-03-0
巴氏染色液(EA36) Papanicolaou EA36  4×100ml|4×500ml
F020101 兔抗人血清白蛋白抗体 Rabbit Anti-HSA
ARB12869 小鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)elisa检测 Mouse soluble cluster of differentiation 86,scd86 ELISA KIT
ARB12066 大鼠巨噬细胞炎症蛋白5(MIP-5)Elisa方法检测 Rat macrophage inflammatory protein 5,mip-5 ELISA KIT
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·GpC甲基转移酶(M.CviPI)
编号：BTN130653
英文名称：GpC Methyltranferase(M.CviPI)
规格：200U
该GpC甲基转移酶(M.CviPI)能将双链二核苷酸识别序列中所有胞嘧啶残基(C5)甲基化。

产品特点：
1．阻止限制性内切酶的切割；
2．改变DNA的物理特性；
3．对DNA统一进行[3H]标记。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1酶活单位定义为在 20μl反应体系中，37℃条件下，1小时能保护1μg λDNA不被HaeIII限制性核酸内切酶切割所需要的酶量。

热失活：65℃ 20分钟。

备注：
胞嘧啶残基被甲基化后，可影响DNA的物理特性，如：降低Z-DNA形成的自由能，增加DNA的螺旋程度，改变DNA十字形突出的动力学特性。由于在化学测序过程中联*的反应性降低，5-甲基胞嘧啶的位置易于确定下来。

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