超级杂交液(原位杂交)厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应超级杂交液(原位杂交)厂家，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：超级杂交液(原位杂交)厂家
编号：BTN130906
规格：10mL
英文名：Super hybrid solution(In situ hybridization)
品牌：百奥莱博
产地：北京
本产品为我司开发的即用型原位杂交专用核酸杂交液。既可以用于RNA原位杂交、DNA原位杂交，也可以用于FISH原位杂交等试验。

原位杂交是在一定生物结构基础之上的核酸杂交。这种结构基础可以是一条染色体；一个细菌；更大结构基础是细胞和组织。基本原理是两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，通过*键结合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA 双键分子，应用带有标记的(有放射性同位素，如3H、35S、32P、荧光素生物素、地高*(代"辛")等非放射性物质)DNA或RNA片段作为核酸探针，与组织切片或细胞内待测核酸(RNA或DNA)片段进行杂交，然后可用放射自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的mRNA或DNA的存在并定位；用原位杂交技术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。此方法有很高的敏感性和特异性，可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

使用方法：(以检测mRNA序列为例)

培养细胞和冰冻切片
1. 玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为DμLbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4. 30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5. 暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片加20μL预杂交液(提前加入鲑鱼精DNA，终浓度为100μg/ml)。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
 注：靶DNA的变性，DNA-DNA杂交检测中，在杂交前需要增加靶DNA的变性步骤(对mRNA的原位杂交无需此步)。样品DNA的变性可能会造成样品形态学的部分破坏，此步是实验中需要优化的一个步骤。实验时可以摸索变性时间、变性温度等参数以获得最佳条件。可以将探针的变性和样品DNA变性同步进行：将样品和探针溶液加盖盖玻片，置于烘箱80℃变性 ，处理5-10 min，后冷却至37℃进行杂交。
8.杂交——按每张切片20μL杂交液(探针浓度约为1ng/μL；杂交液提前加入鲑鱼精DNA，终浓度为100μg/ml)，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃ 0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃ 0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃ 30分钟。甩去多余液体，不洗。
11. 根据探针标记物，选择相应显色方法显色、复染，脱水、封片。
12. 结果观察。

石蜡切片
 如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
5.其余步骤和冰冻切片6-11步相同。
6. 结果观察。

关于超级杂交液(原位杂交)厂家的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·一管式病毒DNA提取试剂盒
编号：BTN3674
英文名称：One-tube virus DNA extraction kit
规格：50次
本试剂盒是专门用于从血清(血浆)等液体样品中提取病毒(如HBV)DNA的产品，其原理是异硫*酸胍/LiCl溶液即能裂解病毒，又能沉淀DNA。本产品灵敏度高，稳定性好，使用简单快捷，尤其适合于整合到临床PCR 检测试剂盒中。

试剂盒特点：
1. 回收率高，可以达到90%以上，高于绝大部分基于离心柱的提取方法。
2. 灵敏度高，通过PCR 检测到的最终灵敏度可以达到30-50 拷贝/mL。
3.一管式操作，不使用离心柱，整个操作过程均在室温下完成。
4. 安全无毒，不需要使用*酚和*仿等有机溶液。
5.处理量大，如果加上病毒离心富集步骤，最多可以处理1.5mL液体病毒样品。
6.与PCR和荧光PCR 兼容。

试剂盒组成：

 

成分	规格
病毒DNA提取试剂	30ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1.在1.5mL 螺旋盖塑料离心管(最好不要使用压盖式塑料离心管)中加入0.1-0.2mL液体样品。如果病毒需要富集，可以将1.5mL液体在4℃ 24,000g 冷冻离心60分钟，移弃1.3mL后继续操作。
2. 加入0.6mL 病毒DNA提取试剂盒溶液，振荡30秒混匀后室温放置10分钟。
3. 振荡30秒混匀后加入0.7mL 异丙醇，振荡30秒混匀后，15000g室温离心15分钟。
4. 移弃上清，注意不要触及管底的DNA沉淀，加入1.0mL 70% 乙醇，振荡数秒后 15000g室温离心5分钟。
5. 移弃上清，注意不要触及管底的DNA沉淀。再短暂离心数秒，移弃残留上清(残留的乙醇会影响后续反应)。此时离心面的管壁上将有可见的膜状沉淀,加入200μl超纯水，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁的膜状沉淀，使其溶解。溶解液混浊或有少量不溶物是正常现象，如果溶于200μL 水而样品使用量不超过PCR 体系的1/2时，不溶物一般不会影响后续PCR反应。不要离心只取上清使用，因为不溶沉淀物中含有DNA，必须取混合液使用(哪怕很浑浊)。
6.样品可以直接取适量用于PCR，也可保存于-20℃长期保存。

使用效果：

图注：用本产品和市场上某同类产品分别提取0.2mL HBV 阳性血浆(含1000 拷贝/mL HBV)，DNA 溶于200μl 水中，取5μl进行荧光PCR(使用MJResearch的CHROMO4荧光PCR 仪)。红和绿线表示本产品，蓝线表示市场上某同类产品。


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·10×TBE电泳液
编号：BTN90313
规格：250mL

·TdT加尾法DNA地高*(代"辛")标记试剂盒
编号：BTN90605C
英文名称：TdT-Tailing DNA Labeling Kit
规格：5次
本试剂盒是基于TdT末端转移酶能够在DNA的3´端添加dNTP尾巴的原理而设计，该反应的示意图如下：


产品特点：
1.快速，15分钟即可完成标记反应。
2. 不但可用于单链DNA和DNA Oligo标记，还可用于3´突出的双链DNA标记，但后者标记效率稍低。
3.可用同位素底物和非同位素底物(生物素和地高*(代"辛")标记的核苷酸等)。
4. 提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带地高*(代"辛")标记核苷酸三种选择。
5. 同时提供非标记的dATP，用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺入比例。
6. 标记的探针可用于电泳迁移率实验(EMSA)、原位杂交(ISH)、Northern Blot(不推荐用于低丰度RNA检测)、小RNA Northern、Southern Blot(不推荐用于单拷贝基因检测)、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。

试剂盒组成：

成分	规格
TdT缓冲液，5×	20μl
TdT(末端转移酶，10U/μL)	10μl
dATP，2mM	5μl
标记核苷酸	(A、B、C不同，见注)
超纯水	1ml
说明书	1份

注：A型用于自选标记，用户需自备标记核苷酸，本产品不提供标记核苷酸；B型提供5μl Biotin-11-dUTP；C型提供含5μl DIG-11-dUTP。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在0.2mL微量离心管中按下表设置一个20μl体系的标记反应(如果需要标记更多探针，请增加标记体积而不要增加探针DNA的浓度)：

成份	用量
探针DNA	100-200 pmol
TdT Buffer，5×	4μl
标记核苷酸，1mM (A型需自备标记核苷酸)	1μl
dATP，2mM	(见下注)
TdT末端转移酶(10U/μL)	2μl
超纯水	补到20μl

注：dATP可以不加，但这样得到的加尾全部是标记核苷酸，由于空间阻碍，灵敏度不一定最佳。如果杂交效果不好，掺入一定比例的dATP到标记核苷酸中，以控制标记的密度，提高比活。具体比例如何可以自己优化。
2. 37℃反应15分钟，延长到30分钟也可以。如果没有非标记核苷酸存在，一般可以加尾3-5个Biotin或DIG标记的核苷酸(标记物空间阻碍抑制延长)；如果有在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸dATP(其他dNTP也可，只是本试剂盒只提供dATP而已)，每条探针上可加上约100个核苷酸，平均含5个标记核苷酸
3. 70℃ 10分钟灭活TdT酶。
4. 如果需要，可以PAGE电泳+银染(相关试剂需要另购)检测标记效率，带标记的探针泳动速度将低于没标记的探针。
5. 如果是非同位素标记，探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针，请不要酚/*仿抽提，因为非同位素标记物一般会使探针DNA进入有机相而丢失。
6. 使用时需将探针以1-8 ng/μL的终浓度加入到杂交液中(如果探针是双链DNA，加入前还需热变性)。如果不立即使用，非同位素标记的探针DNA可-20℃长期放置一年，同位素标记的探针DNA不能放置。


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·PMSF溶液(10mg/mL)
编号：BTN100833
英文名称：PMSF Solution
规格：5mL
本产品为溶于异丙醇中的浓度为10mg/mL的PMSF溶液，其工作浓度为17-174μg/mL(0.1-1.0mmol/L)。PMSF在水液体溶液中不稳定，半衰期为110分钟(pH7.0)或35分钟(pH8.0)，所以在每一步骤中都必须新鲜加入本产品。本产品作用是抑制丝*酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶)。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：临用前室温融解本产品，混匀，按照合适比例加入到组织细胞裂解液中，一般建议工作浓度为0.1-1.0mmol/L。

注意事项：
1．PMSF 剧毒，严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。
2．PMSF在水溶液中不稳定，应在使用前从贮存液中现用现加入裂解液中。

·RNAse-free水
编号：BTN80403
英文名称：RNase-free Water
规格：1mL
本产品就是DEPC处理过的水，但是经过RNase-free质检，所以没有RNase污染。可以用于与RNA相关的实验。

储存条件：常温运输及保存、有效期一年。

我公司生产供应销*(代"售")的探针标记及检测产品正全系列现货促销，满分期待您的垂询选购超级杂交液(原位杂交)厂家。