BTN131181型EDTA溶液说明书

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")BTN131181型EDTA溶液说明书，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：BTN131181型EDTA溶液说明书
规格：1mL
编号：BTN131181
品牌：百奥莱博
英文名：EDTA Solution
本产品是0.2M EDTA溶液，专用于终止各种需要*离子的酶反应。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

关于BTN131181型EDTA溶液说明书的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·EDTA溶液(0.5M，蛋白级)
编号：BTN100837
英文名称：EDTA Solution
规格：10mL
本产品为无色液体，浓度为0.5mol/L，pH8.0。工作浓度为0.5～1.5mmol/L(0.2～0.5mg/mL)。EDTA是一种常用的螯合剂，可以螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，可以抑制金属蛋白水解酶和DNase。


储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

·免DNA提取PCR试剂盒(细胞组织裂解物直接PCR试剂盒)
编号：BTN130985
英文名称：Cell Lysate PCR Mix
规格：100次
本产品是可以直接用新鲜的动物、植物、细菌样品的裂解液进行PCR扩增的试剂盒。

产品特点：
1. 操作简单，免去DNA提取、蛋白去除、RNA去除等步骤，5分钟即得用于PCR的模板。
2. 兼容性广，可以用于几乎所有的分子生物学样品，包括细菌、昆虫、真菌、各种植物、各种动物、法医样品(包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛发、组织样品、口腔细胞和FTA卡)、石蜡组织切片等。
3. 提供离心管专用研磨杵，便于处理棘手样品。
4. 环保健康，不使用任何有毒有害的试剂。
5. 尤其适用于大规模育种筛选和临床筛选。
6. 本试剂盒可以处理100份不同的样品，足够100次PCR实验。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	12ml
溶液B	12ml
PCR MagicMix 3.0	1ml
研磨杵	100只
说明书	1份

储存条件：溶液A、溶液B和离心管专用研磨杵可以常温和放置，PCR MagicMix 3.0需要低温运输、-20℃保存。有效期一年。

使用方法：
1. 首次使用本产品时需要详细检查溶液A和溶液B是否有结晶析出。如果有需要37℃溶解后摇晃均匀待用。未用完部分可以放常温保存。
2. 根据材料不同参考下表取少量样品到1.5mL塑料离心管中。

样品种类	取样量
动物组织	1-5mg
鼠尾	2mm长
血液样品	不超过20μl
植物叶片	1-5mg
植物种子(去皮)	1-5mg
酵母培养物	0.2-0.5mL培养物沉淀
细菌培养物	0.2-0.5mL培养物沉淀

注意：未列出样品，用户需要自己摸索最佳用量。对富含多醌多酚的植物材料(如棉花)，组织使用量最好不要超过0.5mg。
3. 加入100μl溶液，确保溶液A完全将样品淹埋。
4. 用研磨杵小心将样品在离心管内捣碎。血液一般情况捣碎30秒即可；实体组织需要捣碎到溶液的颜色变浑浊(植物叶片的话，溶液的颜色将变成绿色)。如需更多研磨杵，可从我司另购。对棘手的样品，还可以增加95℃保温10-60分钟一步，待温度冷却到室温后再进入下一步。残留的实体组织碎片不会影响后续试验。
5. 加入100μL溶液B，震荡10秒混匀。
6. 常温12000rpm离心2分钟。
7. 将上清液转移到一个干净的1.5mL离心管中。如果不用，可以放-80℃长期保存。如果用于后续PCR，请直接进入下步。
8. 直接用裂解液作为模板设置30μl体系的PCR反应体系如下：

成分	用量
PCR MagicMix 3.0	15μl
细胞裂解液(来于上步)	1-5μl
自备PCR引物1(10uM)	1μl
自备PCR引物2(10uM)	1μl
补水到	30μl

注意：裂解液体积最好不要超过PCR体积的1/10。如果需要增加模板的加入量，则PCR体系应该相应的增加。如果加入5μL裂解液，则可以使用50μL的PCR体系。
9. 放入PCR仪中进行PCR,PCR参数需要根据引物Tm值和靶分子长度等参数设置。一般不低于35次循环。
10. PCR结束后取5-10μL直接上样电泳(本产品不需要上样液)，红色染料电泳速度相当于50bp DNA片段。

注意事项：
1．如果反应体系不是30μl，各成分需要等按比例增加或减少。
2．如果细胞裂解液中有不明PCR抑制物(植物、土壤和血液等DNA样品常含此类抑制物)，可以在PCR体系中加入1/10的PCR抑制物清除剂(BTN60804，30μL体系中加3μL)，可能会对PCR有帮助。


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·粪便DNA提取试剂盒
编号：BTN70601
英文名称：Stool DNA extraction kit
规格：100次
本试剂盒是专门用于从各种动物粪便中提取高质量的DNA的试剂。动物粪便中夹杂着许多脱落的肠道上皮细胞和肠道病原菌，因此通过PCR 对粪便DNA进行分析是诊断肠道遗传病(如大肠癌等)和传染病的重要材料，具有比常规的结肠镜检测和大便隐血实验更高的特异性和灵敏度。通过PCR 对粪便DNA进行分析还可以对濒危物种进行遗传分析。但粪便中成分复杂多变，常含有对PCR等后续反应有极大的抑制作用的不明成分，所以从粪便中提取高纯度的DNA十分棘手。

产品特点：
1. DNA 纯净，OD260/280一般都在1.8以上，得到的DNA样品原液或稀释液可以直接用于PCR等后续反应。
2. 每次微量提取可以处理100-300mg左右的样品，能得到5μg左右DNA，片段长度在30Kb左右。
3.可以同时提取到肠道上皮细胞和肠道病原菌的DNA。
4. 操作过程简单快速，只需要30分钟。
5.扩容性好，既可以在1.5mL离心管中微量提取，也可以在50mL离心管中进行大规模制备。
6. 试剂无毒无害，环保。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
说明书	1份

注：溶液A和溶液B均为无色液体，溶液A 4℃保存时会产生沉淀，用前需要65℃溶化并混匀。

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步骤为1.5mL塑料离心管中进行的微量提取。如果样品用量增加，需要使用大的离心管，各提取试剂的用量也需要按比例增加。

1. 65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后，充分混匀，然后取0.5mL 加入到1.5mL塑料离心管中并放置于65℃待用。最好使用螺旋盖离心管。
2. 取0.1-0.3 g的新鲜或冷冻的动物粪便，加入到含预热溶液A的离心管中，震荡器上剧烈震荡5-10分钟。注意:一定要让管底的样品充分震荡起来。
3. 将离心管置于65℃水浴中保温至少5分钟。
4. 13000-15000g室温离心3分钟，将上清转移到一新的1.5mL塑料离心管中。
5.在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒使之充分混匀，溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
6. 将离心管冰浴至少5分钟。
7. 13000-15000g室温离心3分钟，转移上清到新的1.5mL塑料离心管中。
8. 加入0.2mL的*仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。
9. 13000-15000g室温离心3分钟，小心转移上清到新的1.5mL塑料离心管中。
10. 重复第8 步和第9 步一次。
11. 将上清转移到新的1.5mL离心管时，不要超过0.5mL，否则没有空间加两倍体积的乙醇。如果有多余的可以弃之不用。
12. 加入2倍体积的乙醇(自备)，上下颠倒30秒混匀，15000g离心5-10分钟，弃上清，管底将有微小DNA沉淀。注意：最好不要用异丙醇代替乙醇，否则不容易去除带色素的杂质。
13. 加入1mL 75%乙醇(自备)，震荡数秒，13000-15000g室温离心3分钟，弃上清。
14. 重复上步清洗一次。注意：75%乙醇洗两次有助于去除PCR 抑制物。
15. 短暂离心，吸弃残留的75%乙醇(约50μL)，室温晾干。注意：一定要去除残留的75%乙醇，否则会影响后续反应和电泳上样(样品会飘走)。
16. 加入30μl TE缓冲液溶解沉淀。注意：不知道样品DNA产率前最好不要加过多TE。如果DNA浓度高，可以再加TE 稀释。如果DNA 有颜色,可以使用柱式腐殖酸清除剂(BTN60801)纯化一次。
17. DNA 即可用于电泳、酶切和PCR等反应。最好用原液和稀释液对照做PCR，最好按PCR 终体积的1/10 加入随赠的PCR 抑制物清除剂(BTN60804)。


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·细菌RNA提取试剂盒
编号：BTN51102
英文名称：Bacterial RNA extraction kit
规格：100次
本试剂盒是在动物RNA提取试剂盒基础上根据细菌提取的具体情况改良而得。它基于异硫*酸胍/酚/*仿提取RNA原理，可用于包括E.coli、Campylobacter fetus、Pseudomonas aeruginosa、Rhodobacter sphaeroides等各种常见的革氏阴性细菌。如果需要提革氏阳性细菌(如Bacillus subtilis、Staphylococcus aureus等)的RNA，可以选择真菌RNA提取试剂盒。

试剂盒特点：
1. 操作简单快速，只要十分钟左右,可以全在室温下进行。
2. 所得 RNA 质量高,OD260/OD280一般在 1.9，不含基因 DNA污染。
3. 灵敏度高，可以从一个菌落中提取到普通电泳能够检测到的总 RNA。
4. 性价比高于进口同类产品。

试剂盒组成：

成分	规格
细菌RNA提取试剂	100ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在 1.5mL塑料离心管中离心收集0.2-1.5mL 新鲜细菌(注意:由于细菌RNA 半衰期十分短，所以，必须使用最新鲜细菌)，吸尽液体培养基，加入1mL细菌RNA提取试剂盒并用枪充分吹打，确保细菌全部裂解，没有块状物。
 如果使用菌落，则用接种环小心将其转移到装有1mL细菌RNA提取试剂盒的1.5 m塑料离心管中，用移液枪吹打均匀。在细菌数较少时，建议使 用助沉剂 RNApp以提高 RNA 回收率。
2. 加入0.2mL *仿，在振荡器上充分振荡混均 30秒(必须将管底的液体振荡起来，否则不能有效将DNA 打断和去除蛋白质)。
3. 12000～15000g室温离心3分钟。上清液无色，下层液呈篮色，中间为蛋白质。小心将上清液转移到另一干净 1.5ml塑料离心管中，上清液体积约为0.6mL。为避免触及中间层的DNA和蛋白质，建议分小量多次 吸取，并且只取 0.5mL，留 0.1mL左右。当细菌数量较少时，中间层十分松散，上清时很容易吸到下层有机相，需要更加小心。
4.在上清液中加入等体积的异丙醇，振荡器上振荡混均 30秒。
5. 12000～15000室温离心 3-10分钟，RNA 将在管底侧面形成沉淀。
6.小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA沉淀。
7.在离心管中加入1mL 75%乙醇，振荡器上振荡混均 30秒。
8. 12000～15000g室温离心 1分钟。
9.小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA沉淀。
10. 重复第 8 到第 10 步一次。
11. 短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留液(约50μl)。
12. 短暂放 1-2分钟后加入适量 RNA 溶解液使 RNA沉淀溶解，可以立即使用或存放于-80℃长期保存。
13. RNA 完整性的电泳检测：
 如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是简单检测，可以使用TAE或百奥莱博的SuperBuffer-2 DNA/RNA 两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques，9：558，1990)。普通 DNA上样液不含变性剂，也没经过去 RNase处理，所以最好不要使用。 尤其需要注意的是不要使用TBE进行RNA电泳，因为TBE 所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分，硼*(代"酸")通过与RNA 核糖中的羟基发生络合反应，形成RNA分子内或RNA分子间的络合复合物，使同样长度的RNA 具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA 络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关，而RNA样品中污染的其他多糖(如植物中提取的RNA)也会参与此反应，使硼*(代"酸")对RNA电泳的影响更复杂，所以TBE 对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，最好是避免使用。
 由于细菌细胞中70-80%的RNA为rRNA，后者又由23S(约3700nt)，16S(约1700nt)和5S(约100nt)三种组成，所以变性胶电泳后应该在UV下看见三条清晰的rRNA带。由于核酸长度与结合 EB的数量成正比(当然还与RNA的二级结构有关，双链部分结合能力比单链部分强)，所以23S rRNA条带的荧光强度一般比16S rRNA条带的荧光强度强2倍。如果这两条rRNA 带不清晰或比例小于此范围则表示 RNA 有降解(因为大的RNA 被酶降解的可能更大)。
14. RNA产量产率测定：
 将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量和产率。注意不要将RNA 稀释在 DEPC 水中检测 OD260和OD280，否则光吸收比在 TE中测得的低 10%-15%，因为核酸光吸收跟溶液 pH相关，而 DEPC 水中的DEPC高压分解后产生的CO2与水反应生成碳酸，使溶液 pH降低进而降低 RNA的光吸收。
15. RNA 纯度测定：
 无污染的总 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3 之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用百奥莱博的DNAScavenger和PS Scavenger去除。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA吗？
A：不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加 RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液 RNAload可以使 RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，最好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？
A：如果怀疑有 DNA污染，可以用 RNase处理 RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA污染。进一步确认可以使用 PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。

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