His标记蛋白质微量纯化套装价格厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")His标记蛋白质微量纯化套装价格厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：His标记蛋白质微量纯化套装价格厂家
编号：BTN100102A
品牌：百奥莱博
英文名：One-Stop His-Tagged Protein Miniprep Pack(A)
规格：2mL
产地：国产|进口
本产品基于His-Ni亲和层析的蛋白质纯化方法是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法，本产品就是专门用于上述实验的一站式产品。

产品特点：
1.一站式套装，含所需的介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达His蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的His-标记蛋白。
3.变性和非变性条件均可使用，也适用于纯化包涵体中的His标记蛋白。
4. 每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供4mL浓度为50%的Ni-Agarose介质，其最大载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质。
6. 介质为CL-6B琼脂糖，含四个Ni离子螯合基团，比只有四个Ni离子螯合基团的Ni-IDA更有效。
7. 本介质可以反复使用多次。
试剂盒组成：

 

成份	规格
Ni-Agarose介质，50%	4mL
1M咪唑溶液	25mL
1M Tris-HCl pH7.9	25mL
5M NaCl溶液	25mL
溶菌酶(20 KU/mg)	30mg(A型无)
Benzonase(2U/μL)	20μL(A型无)
盐*(代"酸")胍	6g
尿素	20g
PMSF(10mg/mL)	0.5mL
亲和层析柱，6mL	1套
使用手册	1份

储存条件：常温运输和保存，但介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF需-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：去离子水、20%乙醇、0.45μm滤膜

使用方法：
1．将Ni-Agarose介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据His蛋白产量决定，其最大载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质，请根据实验需要取适量的Ni-Agarose介质加入层析柱)。
2．用5倍柱体积(指填料的体积，下同)自备去离子水洗柱，共三次。
3．用5倍柱体积的新配结合液洗柱(配方如下，以10mL为例)，共三次：

成分	用量	在结合缓冲液中浓度
1M Tri-HCl(pH7.9)	0.2mL	20mM
1M咪唑溶液	0.1mL	10mM
5M NaCl溶液	1mL	500mM
自备去离子水	8.7mL	-

4．室温5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清，沉淀(约100mg)放冰上待用或放-80℃保存。最好用不加诱导物的菌液做对照样。
5．如果用本产品A型：加入1mL冰浴的结合液(1mL菌液需要用50μL结合液)，再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。如果用本产品B型：加入1mL冰浴的含溶菌酶的结合液(先取20mL结合液，加入所有30mg溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，剩余的-20℃放置)，再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液和1μL Benzonase，冰上放置30分钟。
6．4℃下13000-15000g离心10分钟，去除残留细胞和细胞碎片以防堵柱，收集上清，留样做SDS-PAGE电泳对照。如果要纯化裂解液中可溶部分的His标记蛋白，则直接进入第7步；如果要纯化裂解液中包涵体(沉淀部分)中的His标记蛋白，则直接进入第12步。

A、纯化细胞裂解液中可溶部分的His标记蛋白
7．将上步得到的上清液上柱，让重力使裂解液自然流出。如要提高His标记蛋白与介质的结合效率，可用试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。
8．用10倍柱体积结合液洗柱(配方见上表)，收集并保存穿透液(含杂质或没被吸附的His标记蛋白，可做SDS-PAGE电泳的对照)。
9．如果用一步式洗脱法(适合已经找到最佳咪唑浓度的情况)，则直接用适量的新鲜配制的洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含His标记蛋白)。洗脱液的配方如下(以1mL体积和最佳咪唑浓度是500mM为例)：

成分	用量	在洗脱液中的浓度
1M Tri-HCl(pH7.9)	20μL	20mM
1M咪唑溶液	500μL	500mM
5M NaCl溶液	100μL	500mM
自备去离子水	380μL	-

10．如果用多步式洗脱(适合不知道最佳咪唑浓度或一步式洗脱杂质多的情况)，则按上表配制一系列咪唑浓度不同(如40、60、100、200、300和500mM)，其他成分浓度不变的洗液，按从低到高的顺序洗涤并收集样品，SDS-PAGE电泳检测His标记蛋白所在的区域。
11．洗脱后，依次使用10倍柱体积的去离子水洗涤柱子，再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没)，最后堵住层析柱下端的漏口，4℃保存待下次使用。

B、纯化包涵体中His标记蛋白
12．将第6步离心得到的包涵体沉淀重悬于1-3mL含盐*(代"酸")胍结合液中或1-3mL含尿素结合液中(建议优先使用尿素做变性剂，因为得到的洗脱液可以直接跑SDS-PAGE，而用盐*(代"酸")胍的洗脱液需先除盐后才能电泳)。冰浴1小时以使包涵体溶解，期间可轻柔摇晃几次。含变性剂的结合液配方如下(以10mL为例)：

成分	含盐*(代"酸")胍结合液	含尿素结合液
1M Tri-HCl(pH7.9)	200μL	200μL
5M NaCl溶液	1mL	1mL
盐*(代"酸")胍(MW=95.6)	5.7g	无
尿素(MW=60.1)	无	4.8g
自备去离子水	加水到10mL	加水到10mL

13．室温10000×g离心20分钟，沉淀为未溶解的包涵体。将上清(含溶解后的His标记蛋白)以自备的0.45μm滤膜过滤。
14．将滤过液上柱，后续纯化步骤同第7-第11步。只是所用结合液和洗脱液均含变性剂，含变性剂的洗脱液配方见下表(以1mL为例)：

成分	含盐*(代"酸")胍洗脱液	含尿素洗脱液
1M Tri-HCl(pH7.9)	20μL	20μL
1M咪唑溶液	500μL	500μL
5M　NaCl溶液	100μL	100μL
盐*(代"酸")胍(MW=95.6)	0.57g	无
尿素(MW=60.1)	无	0.48g
自备去离子水	补水到1mL	补水到1mL

注意事项：整个实验需避免含巯基乙醇、DTT和EDTA等成分。若洗脱液不能将His标记蛋白洗脱下来，可改用pH6.5- 4.5的pH递减的Tris-HCl洗脱。

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HC0167 (方孔)冻存盒
没食子酸甲酯 Trimethoprim 99-24-1
即用型细菌冻存液   50ml
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4-*-1-*酚 Lincomycin hydrochloride 604-44-4
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·YPDG液体培养基
编号：BTN130897
英文名称：YPDG Liquid Medium
规格：250mL
YPDG培养基为YPD和YPG培养基的混合培养基。可用来区分+和-菌落。

储存条件：常温运输及保存，有效期两年。


·一步式细菌DNA提取试剂盒
编号：BTN60806
英文名称：One-step Bacteria DNA extraction kit
规格：50次
本试剂盒是在一步裂解式超快细菌基因组DNA提取试剂，其最大特点是快速，可以用于绝大多数革氏阳性和阴性细菌基因组DNA的快速提取。

试剂盒特点：
1. 操作简单，整个过程不到10分钟(对一个样品而言)。
2.产率一般在3-10μg/mL过液培养细菌。
3. OD260/280一般在1.8以上。
4. DNA片段长度一般在40-50 Kb左右。
5.适用范围广，可以使用于绝大多数细菌。
6. 也可以使用过夜培养细菌和菌落。
7. 得到的DNA可以直接用于PCR，酶切或其他分子生物学实验。

试剂盒组成：

成分	规格
溶菌酶	600mg
一步式细菌裂解液	25ml
专用上柱液	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存(溶菌酶需要冰袋运输，-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：

一: 对革氏阴性细菌
1. 如果一步式裂解液产生沉淀，需要65℃预热直到沉淀溶解，摇匀待用。
2. 将0.1-1.5mL过夜培养的菌液转移到1.5mL塑料离心中，室温12000rpm离心1分钟沉淀细菌，弃上清。
3. 加入0.5mL一步式细菌裂解液到离心管中，吹打混匀。
4. 加入0.5mL专用上柱液到裂解液中，颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中，室温放置至少2分钟。
5. 12000rpm室温离心1分钟，DNA将吸附在离心吸附柱的膜上，倒弃收集管中的穿透液。
6. 将0.5mL通用洗柱液加入离心柱中，12000rpm室温离心1分钟，弃穿透液。
7. 重复第6步操作一次。
8. 空甩半分钟，将离心吸附柱转移到新的离心管中。
9. 加50-100μL DNA洗脱液，室温放置3～5分钟。
10. 12000rpm室温离心1分钟即得DNA溶液。

二: 对革氏阳性细菌
1. 将0.1-1.5mL过夜培养的细菌离心1分钟后，重悬于0.6mL溶菌液中(60mL自备超纯水+600mg溶菌酶)，颠倒混匀5-10次后37℃保温30分钟(有的菌种可能需更长时间，需要自己根据细菌不同而决定)。
2. 12000rpm离心10分钟，小心弃上清。
3.后续处理接革氏阳性细菌处理的第3步。


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·鲑鱼精DNA溶液
编号：BTN100604
英文名称：Salmon Sperm DNA Solution
规格：1mL
本产品是浓度为10mg/mL的、经过热变性处理的单链鲑鱼精DNA溶液，可以用于Southern、Northern预杂交，还可以用于酵母化学转化和电转化。本产品即开即用，非常方便。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·强RIPA裂解液
编号：BTN131006
英文名称：RIPA Lysis Buffer(Strong)
规格：250mL
RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等实验。本产品裂解强度较强，对膜蛋白、胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子均有很好的效果，本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂，能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。我公司各种RIPA裂解液产品特点见下表：

产品名称	RIPA裂解液(强)	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)
有效裂解成分	1% Triton X-100,1% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.5% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.25% deoxycholate
裂解强度	强	中	温和
对膜蛋白的提取	很好	较好	一般
对胞浆蛋白的提取	很好	很好	很好
对核蛋白的提取	很好	较好	较好
胞浆磷酸化蛋白提取	很好	很好	很好
细胞核转录因子提取	很好	很好	很好
含蛋白酶抑制剂	是	是	是
含磷酸酯酶抑制剂	是	是	是
主要用途	WB,IP	WB,IP	WB,IP,co-IP

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

对于培养细胞样品：
1. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 裂解细胞
2.1 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
2.2 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。

对于组织样品：
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注意：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

备注：
1.为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2.裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3.用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，建议使用BCA蛋白浓度测定试剂盒，不建议使用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

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