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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
399
- 英文名:
Snail enzyme,powder
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
低温运输
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
蜗牛酶干粉特价优惠由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于生化科研试验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多蜗牛酶干粉等DNA纯化产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:蜗牛酶干粉特价优惠
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
规格:5g
编号:BTN100917
本品是从蜗牛(Helix pomatia)的嗦囊和消化道中制备的混合酶,它含有β-glucoronidase、endo-β-glucanase、arylsulphatase、纤维素酶,果胶酶,淀粉酶,蛋白酶等20多种酶,呈褐色结晶粉末。可以用于真菌细胞核酸和蛋白质制备、原生质球制备等。
储存条件:低温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:(处理酵母细胞举例)
1.配制山梨醇缓冲液(10mL):1.82g山梨醇、0.042g柠檬酸*,用10mL pH5.8的磷酸*缓冲液溶解,涡旋震荡混匀,超净台中,滤器过滤除菌。
2.取5mL 山梨醇缓冲液加入到装有1g蜗牛酶的棕色瓶中,轻轻摇动混匀,务必使蜗牛酶完全溶解,使用之前用枪头挑一下瓶底,看是否有未溶解的酶,若有沉淀,则继续摇动或用枪头吹吸,使其溶解,得到的溶液为浓度是200mg/mL的蜗牛酶溶液。
3.取3-5mL酵母细胞,200μL无菌水洗涤菌体(吹吸重悬),室温10000rpm离心1min,弃上清。重复洗涤2-3次。
4.将酵母细胞重悬于300-500μL巯基化合物中,32℃水浴15-30min。期间轻轻颠倒离心管两三次。
5.室温10000rpm离心1min,弃上清。将沉淀重悬浮于500μl山梨醇缓冲液中。
6.按照每克细胞30-40mg蜗牛酶的比例,加适量体积的第2步配制的蜗牛酶溶液到酵母细胞溶液中,37℃保温1小时。(破壁率一般达90%以上。)
7.4℃保存或直接用于核酸、蛋白质提取制备。
附:巯基化合物配制方法
巯基化合物(0.04M EDTA和0.14M β-巯基乙醇)(30mL):
| 试剂 | 剂量 |
| 0.5M EDTA | 2.4ml |
| 巯基乙醇(分析纯ρ=1.11439g/mL) | 294μl |
| 无菌水 | 27.3ml |
蜗牛酶干粉特价优惠极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(高pH)
编号:BTN81212A
英文名称:One-Stop Protein Native PAGE Pack(A)
规格:30次
非变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(Native PAGE)是目前电泳法分离活性蛋白的主要方法之一,跟SDS-PAGE根据分子量大小分离蛋白质不同,它是根据蛋白质分子大小、形状、电荷密度三个主要参数分离蛋白质。由于蛋白质的pI各不相同,所以对不同蛋白质需要选用具有不同pH的电泳体系。单独配制不同pH的Native PAGE电泳胶十分繁琐,为此本公司开发了本产品。
产品特点:
1.即开即用,不需单独准备各种成分,十分方便。还免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺
2.非变性,电泳过程中蛋白质保持天然的构象和亚基之间的相互作用,得到的蛋白质一般都具有生物活性(而SDS-PAGE得到的蛋白没有活性)。
3.可用于分析蛋白质和DNA或RNA的相互作用、蛋白修饰、蛋白构型改变、回收有活性蛋白质等试验。
4.电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
5.提供具有3种不同pH的缓冲液套装,便于客户选择最适合的缓冲液体系。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 丙*(代"烯")酰胺干粉 | 60g |
| 甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉 | 3g |
| TEMED | 1.5ml |
| 过硫*(代"酸")铵干粉 | 1g |
| 高中低缓冲液套装选一 | ABC之一(见下) |
| 说明书 | 1份 |
| 高pH缓冲液套装(只有BTN81212A有此成分) | |
| 高pH浓缩胶配胶液(pH6.7),4× | 100ml |
| 高pH分离胶配胶液(pH8.9),4× | 200ml |
| 高pH电泳液(pH8.3) | 10L(干粉) |
| 高pH上样液,5× | 1ml |
| 中pH缓冲液套装(只有BTN81212B有此成分) | |
| 中pH浓缩胶配胶液(pH5.5),4× | 100ml |
| 中pH分离胶配胶液(pH7.5),4× | 200ml |
| 中pH电泳液(pH7.0)干粉A | 55.2g |
| 中pH电泳液(pH7.0)干粉B | 10g |
| 中pH上样液,5× | 1ml |
| 低pH缓冲液套装(只有BTN81212C有此成分) | |
| 低pH浓缩胶配胶液(pH6.7),4× | 100ml |
| 低pH分离胶配胶液(pH4.3),4× | 200ml |
| 低pH电泳液(pH4.5) | 10L(干粉) |
| 低pH上样液,5× | 1ml |
注:高、中和低pH缓冲液套装里面均含100mL浓缩胶配胶液、200mL分离胶配胶液、10 L电泳液(干粉)和1mL上样液,只是pH不同。
储存条件:常温运输和保存(上样液需-20℃保存),保存期为一年。
使用方法:
如何选择缓冲液?
高pH浓缩胶,高pH分离胶,高pH电泳液和高pH上样液一定要配套使用。中pH和低pH系列也是如此,绝不能高pH的成分跟其他pH的交叉使用。选择适当pH的缓冲液(包括上样液,电泳液,配胶液等)对蛋白质非变性PAGE非常重要,缓冲液的最佳pH又跟目的蛋白质的pI值密切相关。如果pH远离pI,则蛋白质分子带电多(电荷密度大),电泳速度快,分辨率高。但过酸过碱又容易使蛋白质结构变性,失去活性,所以最佳pH条件就是在电泳分辨率和维持活性之间寻找平衡,需要针对每种蛋白质进行摸索或通过滴定曲线来确定,没有通用的电泳缓冲体系。由于有近半数的蛋白质pI在4-6.5,所以在不知道目标蛋白的pI时,可以先选用高pH缓冲系统。
一、配制分离胶
1.确定浓度。对分子量在100Kd以上的蛋白质,可选用3-5%的胶;对分子量在20-150KD之间的蛋白质,可选用5-10%的胶;对分子量在10-80KD之间的蛋白质,可选用10-15%的胶。对未知样品,建议使用7.5%的胶。
2.配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵):按每0.1克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL去离子水的比例配制10%的APS溶液,该溶液可以在4℃存放一周。
3.配制30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液:在本产品提供的装有60克丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和3g甲叉双丙*(代"烯")酰胺,充分摇晃直到溶解(约需10-20分钟)即得200mL 30%丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液。此溶液最好在一个月内用完,必须4℃避光保存。
4.配10mL分离胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中,先加入4.2mL去离子水、3.3mL 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液和2.5mL 4×分离胶配胶液。
5.摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应,不去除的话将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
6.加入50μL新配制的10%APS和10μL TEMED(这是配制10mL胶的用量,配制更大体积的胶则按比例增加),迅速摇匀后倒胶。注意:如果购买的是低pH缓冲系统,由于在低pH缓冲液中PAGE聚合速度降低,所以需要增加上述两成分的用量。
7.在胶面距离顶部1-1.5 cm的时候停止灌胶。然后覆盖一层1-5 mm厚的水,使胶顶部液面平整。由于比重不同,水和丙*(代"烯")酰胺溶液不会混合。
8.室温聚合30-60分钟后,用1×分离胶配胶液洗涤凝固的胶的顶部,待用。
二、配制浓缩胶(浓缩胶可以提高分辨率,适合于成分复杂的样品,一般使用浓度为4%。使用浓缩胶时蛋白质泳动速度主要跟其尺寸和形状相关。因浓缩胶pH跟分离胶pH不同,蛋白质可能会发生聚合和沉淀。对成分单一的样品,可以不用浓缩胶,此时蛋白的泳动速度主要跟其电荷密度,尺寸和形状相关。)
1.配10mL浓缩胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中,先加入6.2mL去离子水、1.3mL 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液和2.5mL 4×浓缩配胶液。
2.摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应,不去除将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
3.按上表用量加入50μL 10%APS和15μL TEMED(这是配制10mL胶的用量,配制更大体积的胶则用量需按比例增加),迅速摇匀后在已经凝固的分离胶上倒胶。
4.在液面达到顶部时停止灌胶,插入梳子。
5.室温聚合30-60分钟,拔出梳子,用1×电泳液冲洗加样孔。
三、电泳
1.将凝胶板固定在电泳装置上,往上槽和下槽加入足够1×电泳液。注:本产品提供10升的三种不同pH的电泳液干粉中的一种,低PH和高PH值电泳液用前需将所有干粉溶解在1 L水中得10×电泳液,可以室温放置,用时再稀释成1×电泳液。一般不需要再调节pH,但保险起见,可以用pH试纸测试一下1×电泳液。高中低pH电泳缓冲液的pH分别是8.3,7.0和4.5。
注意:中pH值的电泳液干粉只能配1x电泳液,否则不溶解。称取中pH电泳液(pH7.0)干粉A,5.52g,中pH电泳液(pH7.0)干粉B 1g混匀,加去离子水至彻底溶解,调PH7.0,定容至1L。客户根据可实际需要量按比例增减。
2.连接电极。如果浓缩胶和分离胶的pH高于目标蛋白pI,目标蛋白将带负电荷并向阳极移动,可以按标准的SDS-PAGE方法接通电极(上阴极下阳极);如果浓缩胶和分离胶pH低于目标蛋白pI,目标蛋白将带正电荷并向阴级移动,此时应该下阴极上阳极。
3.300V预电泳直到电流不再降低(约需要30分钟)以去除残留过硫*(代"酸")铵。
4.换电泳液。
5.在液体蛋白质样品中加入5×上样液(16μl液体样品加4μL上样液)后上样。0.75 mm厚的胶可以上10μl,1.5 mm厚的胶可以上20μl。在未用加样孔中也要加1×上样液以防有样品的空道的样品扩散。注意:如果用考染检测,每个孔的蛋白最好在50-100μg总蛋白,如果银染则只需要1ug即可。样品如果是蛋白质沉淀,可用1×上样液直接溶解蛋白质沉淀后再上样。蛋白质溶液或沉淀中不能含有能够改变上样液pH的残留成分(如蛋白质沉淀剂TCA),用前最好用pH试纸测试一下,不在上样液的pH范围时就用酸或碱调到正常范围。大量样品可用透析法调pH。
6.上样自备的天然PAGE蛋白质标准或等电电泳的标准品(如果有的话)。
7.用15 mA(对0.75 mm厚的胶)或30mM(对1.5mm厚的胶)的电流电泳直到染料移动到分离胶底部。微型胶一般需要1-2小时。注意:电泳过程最好在冷室或有冷却系统,以免电泳产热使蛋白质变性。
8.终止电泳,取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或酶活性检测)。
蜗牛酶干粉特价优惠关键词:Snail enzyme,powder,蜗牛酶干粉,BTN100917
溶菌酶 1ml
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抗酸染色液(金胺O-罗丹明荧光法) 4×100ml
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的时候别怪我没提醒你哦:)设计好了引物就要让公司合成,这时候别忘了谈价格:)现在竞争很厉害,价格已经挺便宜了,注意两个参数:一个是OD 值,如果公司说1OD 能比2OD 优惠,那通常1OD 足够了。第二是纯度,是HPLC 的还是OPC 的,事先要说好,建议看看这里(唉,不是我给他们做广告,只是他们的说明书写得真不错):http://www.takara.com.cn/product/cs/c_3.htm#1引物设计方面还有很多话题可说,比如如何利用引物搭桥将两个片段通过PCR 而不是酶连
,较大的蛋白如抗体可能需要5小时。如果需要可以在温育3小时后补加完全培养基。检测前用无血清培养基或者PBS洗涤细胞以除去未转染的蛋白,防止影响结果分析,然后就可以分析结果了。 注意事项当然是需要考究蛋白质的浓度和纯度(幸好越来越多的蛋白样本制备工具使得蛋白样本处理变得简单高效了,比如Merck自己的蛋白样品制备系列就有很多选择,现在还有75折特价呢),转染过程中要避免血清的干扰,最后检测前要彻底洗掉残留的蛋白。至于效果如何?厂家提供的图片相当漂亮。 价格和用量:好东西不便
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