柱式藻类RNA大量提取试剂盒 RNA纯化

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百奥莱博专业生产销*(代"售")柱式藻类RNA大量提取试剂盒 RNA纯化，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：柱式藻类RNA大量提取试剂盒 RNA纯化
编号：BTN120504
规格：5次
品牌：百奥莱博
英文名：Algae RNA Column large-scale extraction kit
本试剂盒是在本公司柱式藻类RNA提取试剂盒(BTN120503)的大提升级产品，跟柱式藻类RNA提取试剂盒相比，它具有下列特点：
1.样品处理量大，最多可以处理50mL液体藻类培养物。
2. 操作简单快捷，整个过程只需要约30分钟。
3. RNA 纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Northern杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
4. RNA产量高，一般在20-70μg/mL液体藻类培养物(约2.0×107个细胞)。非酶细胞破裂法，适用于各种形态的藻类和各个种属的藻类。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	150ml
溶液D	50ml
大提离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
RNA 洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将50mL液体藻类培养物在塑料离心管中5000-7,000rpm 4℃离心1分钟，并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。
2. 加入10mL溶液A并充分吹打混匀。注意：溶液A存放时容易产生沉淀，如果有沉淀，用前请置于65℃融化并充分摇晃均匀。
3. 加入10mL溶液B，剧烈振荡30秒。
4. 65℃保温5分钟。注意：不要超过5分钟，否则RNA 容易降解。
5. 5000-7,000rpm 4℃离心3～5分钟，转移上清到一自备的、干净的50mL塑料离心管中。
6.在上清液中加入2mL自备的*仿，充分振荡30秒混匀。
7. 4℃ 5000-7,000rpm离心3～5分钟，转移上清液到一自备的、干净的50mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清液(约10mL左右)3倍体积的溶液C和1倍体积的溶液D，充分混匀。如果上清为10mL，则加入30mL溶液C和10mL溶液D。
9. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次转移后需要室温放置2-3分钟以让RNA跟吸附膜充分结合，然后5000-7,000rpm室温离心30-60秒，弃收集管中的穿透液，然后再加入后一批混合液，重复操作，直到混合液全部挂柱。
10. 第一次洗涤：将10mL 通用洗柱液加到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 第二次洗涤：一次洗涤一般足够去除杂质，但如果样品OD260/280 比值不高，可以再用10mL 通用洗柱液重复上步洗涤一次。
12.室温离心空柱子(带收集管)半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 50mL塑料离心管中，加入1mL RNA 洗脱液。
14.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA完整性的电泳检测：
注意：普通DNA上样液不含变性剂，更没经过去RNase处理，所以最好不要用于RNA电泳。
16. RNA产量和纯度产率测定：
将5-10μL RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA 稀释在DEPC 水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%；也不要稀释过度，使OD读数在仪器的有效范围之外，这样得到的OD 比值没有意义。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA 吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液RNAload可以使RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，最好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用5分钟柱式DNA 清除剂、非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。

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细胞线粒体分离试剂盒   50T
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脂肪氧化酶 Stearic Acid 9029-60-1
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·TCEP盐*(代"酸")膦
编号：BTN131055
英文名称：TCEP·HCl
规格：1g
本产品全名是Tris[2-carboxyethyl]phosphine hydrochloride)，中文名是Tris[2-羧乙基]盐*(代"酸")膦，它是高效、水溶性、无味的还原剂，其特点是选择性并彻底地还原最稳定的、水溶性的烷基二硫键。在室温、pH5.0的条件下，在五分钟内高效地还原。水溶性为310克/升。抵抗空气氧化；非挥发性并且对于蛋白中的其它基团无反应活性。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·酵母产孢培养基
编号：BTN130902
英文名称：Sporulation Medium
规格：250mL
本产品由1% KOAc和2%的琼脂组成，用于MATa/MATa二倍体细胞不经过营养生长的过程直接在18-24小时后产孢。如果二倍体细胞是营养缺陷性，则还需要补充加入营养成分。

储存条件：常温运输及保存，有效期两年。

·非冻型血液DNA保存液
编号：BTN60910
英文名称：DNAhold Blood RNA non-freezing preservation
规格：250mL
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。

产品特点：
1. 保存时间长，可常温保存血液DNA 长达六个月，尤其适合于野外血液样品采集。
2. DNA 完整性好，纯化后长度在20-50 Kb之间。
3. DNA 无化学修饰，提得的DNA可用于酶切、电泳、Southern杂交和PCR等分子生物学实验。
4.适用于各种动物血液(包括禽类血液)。
5. 安全可靠，本产品无毒无害。
6. 使用简单，直接把新鲜的血液样品与本产品混合即可。

储存条件：室温运输及保存，有效期两年。

使用方法：

一: 哺乳动物血液(包括人血液)
1. 将抗凝血(1-10mL)加入到适当容量的塑料离心管中。
2. 加入等体积的血液DNAhold，充分振荡混合均匀。
3. 常温闭光保存直到使用。
4. 提取DNA时，可以取出部分液体，用自备的蛋白酶K(终浓度为0.1mg/mL)37℃处理过夜，然后再用经典的酚/*仿抽提+乙醇沉淀方法得到DNA。

二: 禽类血液
由于禽类血液有核细胞量远高于哺乳动物，血液的使用量很少，一般只有哺乳动物血液用量的1/100 到1/1000，所以需先用等体积的水将血液DNAhold稀释，然后直接将禽类血液加入。其余操作同上。


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