通用型RT-LAMP恒温扩增试剂盒(国产,进口)

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

通用型RT-LAMP恒温扩增试剂盒(国产,进口)由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多通用型RT-LAMP恒温扩增试剂盒等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。

名称：通用型RT-LAMP恒温扩增试剂盒(国产,进口)
产地：国产|进口
编号：BTN101114
品牌：百奥莱博
规格：50次
本试剂盒可以用于RT-LAMP等温扩增，RT-LAMP即逆转录和Loop-Mediated Isothermal Amplification(环介导等温扩增)的结合，专门用于快速扩增RNA。LAMP是2000年才出现的一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用4或6条模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA聚合酶，在等温条件下(63℃左右)30－60分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于RT-PCR技术，同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，不依赖任何专门的仪器设备。目前已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。

产品特点：
1.高特异性，由于同时使用4-6条特异引物，所以特异性比RT-PCR更高。
2.高扩增效率，扩增效率可达到10E9-10E10，比PCR灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的RNA分子
3. 65℃左右完成RT和LAMP扩增，不需要贵重的热循环仪。
4. 即开即用，包含了除引物和模板RNA外的所有成份，十分方便。
5. 肉眼检测扩增结果，不需要昂贵的电泳、荧光PCR等仪器。
6. 提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。

试剂盒组成：

 

成分	规格
RT-LAMP Mix(2×)	0.5ml
AMV-Bst混合液	75μl
对照引物混合物	40μl
对照模板	5μl
MgCl2(25mM)	0.2ml
RNase-free水	1ml
说明书	1份

注：RT-LAMP Mix(2×)稀释到1×时，已经有8mM Mg2+，本试剂盒提供的MgCl2(25mM)用于用户优化条件用。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在冰上溶解除酶外的各种组份，混匀，稍离心。在反应管中加入以下组份：

成份	样品管	阴性对照
RT-LAMP Mix(2×)	10μl	10μl
自备FIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
自备BIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
自备F3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
自备B3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
自备Loop F引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
自备Loop B引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
自备模板 RNA	1-100ng	不加
AMV-Bst 混合液	1.5μl	1.5μl
补水到	20μl	20μl

 注：如在反应管中加入本公司PCR级绿如蓝染料1μL(水则少加1μL)，则可直接在荧光定量PCR仪中进行荧光定量检测。
2. 混匀，置于60-65℃保温30-120分钟。注意：如果不使用Loop引物，则最好保温120分钟；如果使用Loop引物，则最好保温30分钟。
3. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶。此酶有外切酶活性，所以必须灭活。
4.产物置于-20℃备用或立即用于下游检测。扩增产物可选下列方法之一检测:
a)琼脂糖凝胶电泳。取扩增产物5μL，1-2%的琼脂糖凝胶电泳，可见LAMP特征性电泳图谱；
b)向扩增产物中直接加入本公司PCR级绿如蓝染料(另售)1μL，混匀，稍离心。将反应管置于紫外透射仪或凝胶成像系统中，紫外灯下可见绿色荧光产生；
c)荧光定量检测。
5. 结果分析：
a)如果没有扩增，则需要用本试剂提供的阳性对照进行扩增。本试剂盒提供阳性对照，反应按下表设置：

成份	阳性对照管
RT-LAMP Mix(2×)	10μl
对照引物混合物	4.0μl
对照模板	1μl
AMV-Bst 混合液	1.5μl
水	3.5μl

 混匀后，置于60℃保温120分钟，其余操作同上。注意：本对照引物中没有Loop引物，所以最好保温120分钟。
b)如果阳性对照能够扩增出，则说明试剂盒没有问题，可能是模板或引物的问题。如果阳性对照没有扩增出条带，则是试剂盒的问题，请跟厂家联系。

注意事项：
1.引物设计对成功扩增十分关键。除用于SNP分型外，尽量以保守区设计引物。
2.引物至少包括F3/B3和FIP/BIP，加入环状引物F loop/B loop可以使反应速度大大提高。
3. 应优化引物序列、GC含量和尽量避免二级结构。
4.反应中各个引物的浓度及比例对扩增效果有一定的影响。
5. 建议先将所有引物混合在一起，配制成10.浓度以方便使用。
6. LAMP扩增具有特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备等优点。但太高的灵敏度使得其比普通PCR扩增更加容易污染导致假阳性。因此，必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严格的实验分区、添加UNG和dUTP(可能导致反应效率下降)、使用荧光定量等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染，所有相关试剂必须全部更换，必要时还得更换实验室。
7. 要确证扩增的为目标基因，可以使用特定的限制性酶切和/或Southern杂交。
8. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品等用途。

除通用型RT-LAMP恒温扩增试剂盒(国产,进口)外，我公司正在打折促销以下产品：

·一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(高pH)
编号：BTN81212A
英文名称：One-Stop Protein Native PAGE Pack(A)
规格：30次
非变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(Native PAGE)是目前电泳法分离活性蛋白的主要方法之一，跟SDS-PAGE根据分子量大小分离蛋白质不同，它是根据蛋白质分子大小、形状、电荷密度三个主要参数分离蛋白质。由于蛋白质的pI各不相同，所以对不同蛋白质需要选用具有不同pH的电泳体系。单独配制不同pH的Native PAGE电泳胶十分繁琐，为此本公司开发了本产品。

产品特点：
1．即开即用，不需单独准备各种成分，十分方便。还免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺
2．非变性，电泳过程中蛋白质保持天然的构象和亚基之间的相互作用，得到的蛋白质一般都具有生物活性(而SDS-PAGE得到的蛋白没有活性)。
3．可用于分析蛋白质和DNA或RNA的相互作用、蛋白修饰、蛋白构型改变、回收有活性蛋白质等试验。
4．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
5．提供具有3种不同pH的缓冲液套装，便于客户选择最适合的缓冲液体系。

产品组成：

成分	规格
丙*(代"烯")酰胺干粉	60g
甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉	3g
TEMED	1.5ml
过硫*(代"酸")铵干粉	1g
高中低缓冲液套装选一	ABC之一(见下)
说明书	1份
高pH缓冲液套装(只有BTN81212A有此成分)
高pH浓缩胶配胶液(pH6.7)，4×	100ml
高pH分离胶配胶液(pH8.9)，4×	200ml
高pH电泳液(pH8.3)	10L(干粉)
高pH上样液，5×	1ml
中pH缓冲液套装(只有BTN81212B有此成分)
中pH浓缩胶配胶液(pH5.5)，4×	100ml
中pH分离胶配胶液(pH7.5)，4×	200ml
中pH电泳液(pH7.0)干粉A	55.2g
中pH电泳液(pH7.0)干粉B	10g
中pH上样液，5×	1ml
低pH缓冲液套装(只有BTN81212C有此成分)
低pH浓缩胶配胶液(pH6.7)，4×	100ml
低pH分离胶配胶液(pH4.3)，4×	200ml
低pH电泳液(pH4.5)	10L(干粉)
低pH上样液，5×	1ml

注：高、中和低pH缓冲液套装里面均含100mL浓缩胶配胶液、200mL分离胶配胶液、10 L电泳液(干粉)和1mL上样液，只是pH不同。

储存条件：常温运输和保存(上样液需-20℃保存)，保存期为一年。

使用方法：
如何选择缓冲液?
高pH浓缩胶，高pH分离胶，高pH电泳液和高pH上样液一定要配套使用。中pH和低pH系列也是如此，绝不能高pH的成分跟其他pH的交叉使用。选择适当pH的缓冲液(包括上样液，电泳液，配胶液等)对蛋白质非变性PAGE非常重要，缓冲液的最佳pH又跟目的蛋白质的pI值密切相关。如果pH远离pI，则蛋白质分子带电多(电荷密度大)，电泳速度快，分辨率高。但过酸过碱又容易使蛋白质结构变性，失去活性，所以最佳pH条件就是在电泳分辨率和维持活性之间寻找平衡，需要针对每种蛋白质进行摸索或通过滴定曲线来确定，没有通用的电泳缓冲体系。由于有近半数的蛋白质pI在4-6.5，所以在不知道目标蛋白的pI时，可以先选用高pH缓冲系统。

一、配制分离胶
1．确定浓度。对分子量在100Kd以上的蛋白质，可选用3-5%的胶；对分子量在20-150KD之间的蛋白质，可选用5-10%的胶；对分子量在10-80KD之间的蛋白质，可选用10-15%的胶。对未知样品，建议使用7.5%的胶。
2．配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵)：按每0.1克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL去离子水的比例配制10%的APS溶液，该溶液可以在4℃存放一周。
3．配制30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液:在本产品提供的装有60克丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和3g甲叉双丙*(代"烯")酰胺,充分摇晃直到溶解(约需10-20分钟)即得200mL 30%丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液。此溶液最好在一个月内用完，必须4℃避光保存。
4．配10mL分离胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中，先加入4.2mL去离子水、3.3mL 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×分离胶配胶液。
5．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应，不去除的话将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
6．加入50μL新配制的10%APS和10μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则按比例增加)，迅速摇匀后倒胶。注意：如果购买的是低pH缓冲系统，由于在低pH缓冲液中PAGE聚合速度降低，所以需要增加上述两成分的用量。
7．在胶面距离顶部1-1.5 cm的时候停止灌胶。然后覆盖一层1-5 mm厚的水，使胶顶部液面平整。由于比重不同，水和丙*(代"烯")酰胺溶液不会混合。
8．室温聚合30-60分钟后，用1×分离胶配胶液洗涤凝固的胶的顶部，待用。

二、配制浓缩胶(浓缩胶可以提高分辨率，适合于成分复杂的样品，一般使用浓度为4%。使用浓缩胶时蛋白质泳动速度主要跟其尺寸和形状相关。因浓缩胶pH跟分离胶pH不同，蛋白质可能会发生聚合和沉淀。对成分单一的样品，可以不用浓缩胶，此时蛋白的泳动速度主要跟其电荷密度，尺寸和形状相关。)
1．配10mL浓缩胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中，先加入6.2mL去离子水、1.3mL 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×浓缩配胶液。
2．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应，不去除将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
3．按上表用量加入50μL 10%APS和15μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则用量需按比例增加)，迅速摇匀后在已经凝固的分离胶上倒胶。
4．在液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
5．室温聚合30-60分钟，拔出梳子，用1×电泳液冲洗加样孔。

三、电泳
1．将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够1×电泳液。注：本产品提供10升的三种不同pH的电泳液干粉中的一种，低PH和高PH值电泳液用前需将所有干粉溶解在1 L水中得10×电泳液，可以室温放置，用时再稀释成1×电泳液。一般不需要再调节pH，但保险起见，可以用pH试纸测试一下1×电泳液。高中低pH电泳缓冲液的pH分别是8.3，7.0和4.5。
 注意：中pH值的电泳液干粉只能配1x电泳液，否则不溶解。称取中pH电泳液(pH7.0)干粉A，5.52g,中pH电泳液(pH7.0)干粉B 1g混匀，加去离子水至彻底溶解，调PH7.0，定容至1L。客户根据可实际需要量按比例增减。
2．连接电极。如果浓缩胶和分离胶的pH高于目标蛋白pI，目标蛋白将带负电荷并向阳极移动，可以按标准的SDS-PAGE方法接通电极(上阴极下阳极)；如果浓缩胶和分离胶pH低于目标蛋白pI，目标蛋白将带正电荷并向阴级移动，此时应该下阴极上阳极。
3．300V预电泳直到电流不再降低(约需要30分钟)以去除残留过硫*(代"酸")铵。
4．换电泳液。
5．在液体蛋白质样品中加入5×上样液(16μl液体样品加4μL上样液)后上样。0.75 mm厚的胶可以上10μl，1.5 mm厚的胶可以上20μl。在未用加样孔中也要加1×上样液以防有样品的空道的样品扩散。注意：如果用考染检测，每个孔的蛋白最好在50-100μg总蛋白，如果银染则只需要1ug即可。样品如果是蛋白质沉淀，可用1×上样液直接溶解蛋白质沉淀后再上样。蛋白质溶液或沉淀中不能含有能够改变上样液pH的残留成分(如蛋白质沉淀剂TCA)，用前最好用pH试纸测试一下，不在上样液的pH范围时就用酸或碱调到正常范围。大量样品可用透析法调pH。
6．上样自备的天然PAGE蛋白质标准或等电电泳的标准品(如果有的话)。
7．用15 mA(对0.75 mm厚的胶)或30mM(对1.5mm厚的胶)的电流电泳直到染料移动到分离胶底部。微型胶一般需要1-2小时。注意：电泳过程最好在冷室或有冷却系统，以免电泳产热使蛋白质变性。
8．终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或酶活性检测)。


通用型RT-LAMP恒温扩增试剂盒(国产,进口)关键词：Universal Reverse Transcription Loop-Mediated Isot,BTN101114,通用型RT-LAMP恒温扩增试剂盒

F020207 山羊抗小鼠IgA抗体 Goat Anti-Mouse IgA
ARB12355 大鼠环孢素A(CsA)Elisa分析 Rat cyclosporine a,csa ELISA KIT
线粒体蛋白提取试剂盒(2D电泳用)   50T|100T
ARB10748 人麦考酚酸(MPA)酶联免疫定量检测 Human mycophenolic acid,mp*(代"a") ELISA KIT
顺式-D-羟脯*酸 D-allo-Isoleucine 2584-71-6
ARB13727 兔热休克蛋白70(HSP-70)含量检测 Rabbit heat shock protein 70,hsp-70 ELISA KIT
ARB10298 人不对称二甲基精*酸(ADMA)酶免分析 Human asymmetrical dimethylarginine,adma ELISA KIT
F040102 鸡卵清蛋白偶联克伦特罗 OVA-CLE
BL1128 ELISA包被液(1x)
过氧化物酶封闭液(H2O2法)   100ml
ARB10228 人β葡萄糖醛酸苷酶(βGD)尿液中含量检测 Human β-glucuronidase,βgd ELISA KIT
ARB13182 小鼠胰岛素(INS)代做ELISA实验 Mouse insulin,ins ELISA KIT
D(-)樟脑磺酸 DL-Glyceraldehyde 3144-16-9
ARB14011 绵羊白介素2受体(IL-2R)Elisa方法检测 Sheep interleukin-2 receptor,IL-2r ELISA KIT
F050306 小鼠IgG抗体 Mouse IgG
七氧化四铽 8-Hydroxyquinoline 12037-01-3
β-淀粉酶(β-AMS)检测试剂盒(硝基水杨酸法)   100T
ARB10460 人生长激素结合蛋白(P)elisa测定使用说明书 Human growth hormone binding protein,p ELISA KIT
PY02-138  *丙*酸脱羧酶培养基  250克  
乳酸脱*酶染色液(四唑盐法)   2×50ml
SJ0694 D15000
DEAE葡聚糖凝胶A-25 AdoMet 12609-80-2
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·5-*-4-*-3-吲哚磷酸(BCIP)
编号：BTN100831
英文名称：5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate
规格：100mg
BCIP分子式为C8H4BrClNO4P·C7H9N，分子量为433.64，CAS号为6578-06-9。本产品为白色结晶，溶解度为20mg/mL。在碱性磷酸酯酶的催化下，BCIP会被水解产生强反应性的产物，该产物会和NBT发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。NBT/BCIP用于蛋白印迹和免疫组化染色等实验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·葡激酶
编号：BTN130875
英文名称：Staphylokinase
规格：100μL
葡激酶，又称金葡菌激酶或SAK，是从金黄色葡萄球菌中分离出来的一种能够特异性溶解血栓的酶类物质。葡激酶与血栓中的纤维蛋白有较高的亲和力，它能在血栓的部位与纤溶酶原结合，此结合物能够激活纤溶酶原转变为纤溶酶，从而溶解血栓。免疫原性较streptokinase强。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。


·昆虫RNA柱式提取试剂盒
编号：BTN81220
英文名称：Insect RNA column Extraction Kit
规格：50次
本试剂盒是专门用于从富含多糖、糖蛋白、粘蛋白的动物样品(尤其是昆虫样品)中提取总RNA的试剂。

试剂盒特点：
1. 操作简单快速，处理一个样品只需要约十分钟。
2. RNA纯度高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数昆虫中的多糖污染。
3.适用于各种昆虫组织，每100mg组织能提取到20-30μg 总RNA。
4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
5.一站式，提供RNase-free的样品收集管。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存(RNA洗脱液最好4℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1. 将50-300mg昆虫组织放入10-15mL塑料离心管中，加入1mL溶液A，然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎昆虫组织，砚磨完后加入1mL溶液A。
注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
2. 将匀浆物或砚磨物转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。
3.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备*仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温12000 rmp离心3～5分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
5. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μl上清液不取。
6. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。
7. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000 rmp室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000 rmp室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 加0.7mL通用洗柱液，室温12000 rmp离心半分钟，弃穿透液。
10. 加0.3mL通用洗柱液，室温12000 rmp离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
11.室温12000 rmp离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
12. 将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入50-100μl RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
13. 12000 rmp室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。注意：大部分昆虫的28S RNA被切割成两个小的片段，彼此用*键相连，所以在甲醛变性胶中，没有28S带出现(文献见：Eva C. Winne*(代"b")eck，Craig D. Millar and Guy R. Warman，Why does insect RNA look degraded? Journal of Insect Science: Vol. 10：1-7)
15. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
16. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

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