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- 百奥莱博
- JN0059-DVF
- 北京
- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
202
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
冷藏
- 规格：
200U
特别提示：包括UDG酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：UDG酶
产品货号：JN0059
产品规格：200U
UDG酶分子量25KDa，能特异性识别DNA单链或双链中的尿嘧啶残基，并从DNA上水解去除尿嘧啶残基，防止DNA发生突变，是碱基切除 修复过程中的重要组分，对RNA无活性。
产品用途：
UDG酶常被用于消除PCR扩增中的残余污染。在PCR反应液配制时，将dUTP和dTTP 按一定的比例混用，使得扩增产物都含有脱氧尿嘧啶。在进行PCR扩增前，在PCR混合液添加UDG酶，并增加2分钟37℃～50℃的保温步骤即可消除以往PCR产物的残留污染，由于UDG在PCR循环中的94℃dU的PCR产物。
使用建议：
UDG酶在Taq酶反应缓冲液中同样具有活性。在PCR反应液中直接添加UDG酶即可，推荐用量为0.2U每50μl体系，在PCR循环程序前增加2分钟37℃ ～50℃保温及可完全消除多达1ng含UTP模板的污染。
应用示例：
UDG酶特异性降解含UTP的DNA模板
反应体系：
| 加入物 | 加入量 |
| 2×Taq MasterMix | 25μl |
| 500bp模板（含UTP） | 1ng |
| 500bp扩增引物对 | 终浓度0.2μM |
| 250bp模板（无UTP掺入） | 1ng |
| 250bp扩增引物对2 | 终浓度0.2μM |
| dH2O | 至50μl |
对照组未添加UDG酶,实验组每50μl反应体系中添加0.2U UDG酶。
PCR循环程序：
| 50℃ | 2分钟(降解含UTP的 污染模板) |
| 94℃ | 4分钟(灭活UDG酶) |
| 30次循环 | 94℃,30秒 57℃,30秒 72℃,30秒 |
| 72℃ | 5分钟 |
| 4℃ | 保温 |
图例1） 结果显示：UDG酶能特异性降解含UTP的DNA模板并阻止其 PCR扩增，且不影响正常模板的PCR 扩增反应。
泳道M：DL2000 泳道1，2：对照组，未添加UDG酶
泳道3，4：实验组，0.2U UDG酶处理
活性定义：60分钟内催化1nmol尿嘧啶从含尿嘧啶双链DNA上释放所需要的酶量定义为一个单位。
常用PCR残余污染消除体系：
| 加入物 | 加入量 |
| 5×Taq Buffer with Mg2+ | 10μl |
| 上游引物 | 0.2-1.0μM (终浓度) |
| 下游引物 | 0.2-1.0μM (终浓度) |
| dATP, dGTP, dCTP | 各0.2mM(终浓度) |
| dTTP | 0.1mM(终浓度) |
| dUTP | 0.2mM(终浓度) |
| 如全部使用dUTP替代dTTP | 0.4mM(终浓度) |
| 模板 | 1-50ng（质粒） |
| 10ng-1μg(基因组) | |
| Taq | 0.25μl（1.25U ） |
| ddH2O | 至50μl |
| UDG酶 | 0.2U，如残余污染严重可适量增加酶用量 |
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