- ¥1000
- 联迈生物
- LM1013
- 美国/中国
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
RosettaBlue(DE3)
- 保质期：
有效期一年
- 供应商：
上海联迈生物工程有限公司
- 保存条件：
低温运输，-80℃保存
- 规格：
500ul甘油菌
| 菌株类型: | E.coli |
|---|---|
| 培养基: | LB培养基 |
| 生长条件: | 37 ℃, 有氧 |
| 基因型: |  |
| 抗性: | 氯霉素，四环素 |
| 质粒转化条件: | 42 ℃热激 |
| 应用: | 蛋白表达 |
| 诱导方法: | IPTG |
订购信息
| 产品编号 | 产品名称 | 规格 | 价格 |
|---|---|---|---|
| LM1013 | RosettaBlue(DE3) | 500ul甘油菌 |
¥1000.00 |
菌株特点
RosettaBlue系列菌株衍生于NovaBlue系列感受态细胞，该菌株既具有很高的转化效率，又具有recA endA lacIq基因突变。对于包含有稀有密码子的真核蛋白，是加强型的蛋白表达菌株。
RosettaBlue(DE3)感受态细胞通过细胞内一个兼容的具有氯霉素抗性的质粒，补充提供了AGG, AGA, AUA, CUA, CCC 和GGA这些大肠杆菌中真核细胞的稀有密码子的tRNA。这对于表达含有稀有密码子的真核细胞蛋白具有很大的促进作用。
RosettaBlue(DE3)感受态细胞无法使用蓝白斑筛选，因为在细胞中的DE3溶源噬菌体DNA序列上上含有LacZ的α肽段编码序列。
菌株是recA-, endA-, lacIq, 具有很高的质粒转化效率。
RosettaBlue(DE3)制作程序：
使用说明：
联迈生物的各批次质粒菌株发货前均经过严格的多重验证，如存在质量问题，请在收到产品三个月内通知我司。收到甘油菌后，请及时在固体平板上划线培养，挑取单菌落接种到液体培养基中，震荡培养后使用并保存甘油菌。如需获取其他详细信息请登录我司官网联系QQ客服查询。
RosettaBlue(DE3)的培养方法：
菌种制作菌液的方法（以一瓶为例）1、取10公斤无菌水里面的2公斤烧开，然后加入1公斤的红糖，把红糖充分融化开，便于把红糖里面的有害菌消除。
2、把3公斤的红糖水和剩下的8公斤无菌水装到一个15公斤的容器里，混合均匀，等无菌水冷却到30-40度的时候加菌种1瓶。
3、把菌种和红糖水充分的搅拌均匀，口上盖一层塑料薄膜，要密封发酵，不能漏气。不要装的太满，要预留10-15%的缓冲空间，在发酵过程中会产生气体，装满容易涨破塑料容器。
4、发酵7-12天天左右，温度低要多发酵几天，打开瓶口，有气体产生。闻到酸香味夹杂酒糟味和红糖水的刺激性气味，到就证明发酵成功。（低于15度不能发酵；15-20度发酵20-15天；20-30度，发酵15-10天；30-40度发酵10-6天，发酵时间越长效果越好）；或者用PH试纸测试，PH值显示4-5之间即表明发酵成功。如果温度过低，强烈建议用取暖灯或者火炉等加热设备升温。
5、发酵成功后的菌液如果一次不能大量的使用完，就用小瓶子分装密封保存。使用一瓶打开一瓶。如果没有分装。
保存方法：1、菌液宜在常温下避光保存，底部稍有沉淀或浮有些微白沫均属正常，若气味不酸（PH应在4.5以下）或腐臭即已变质勿用。
2、每次用后盖紧瓶盖。保管得好，一年后无异味仍可使用，只是活性有所降低，需适当加大用量。
注意事项：1、制作菌液最好用深井水，若用自来水应放置24小时后用，水只需烧开1/5能够融化开红糖即可。
2、菌液不要与杀菌剂等药物同时混用，要用此类药物，相隔一天以上时间。
3、红糖用热水溶化后，水温降到30-40度，才能投入农盛乐菌种。过高或者过低均影响发酵效果。
4、制作菌液的过程中，不要频繁打开盖子，以免进入杂菌，影响发酵效果。
5、如若遇到特殊问题，请拨打销售电话详询，不要擅做主张，以免对你造成损失。
RosettaBlue(DE3)注意事项：
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。本产品仅可用于实验室研究，不能用于动物，人体以及作为食品添加剂等用途。
2、使用甘油菌时可不完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂布固体琼脂平板即可，也可完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，菌株的活力会逐渐下降。
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文献和实验Optimizing E. coli-Based Membrane Protein Production Using Lemo21(DE3) and GFP-Fusions
Optimizing the conditions for the overexpression of membrane proteins in E . coli and their subsequent purification is usually a laborious and time-consuming process. Combining the Lemo21(DE3) strain, which conveniently allows to identify
-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
的。每一个宿主细胞都像一个微观的小工厂，按照细胞固有的程序完成“你给它们安排的生产任务”——因为很难亲眼观察微观世界中表达是如何进行的，当出现问题时，我们需要经验判断问题所在。宿主细胞对原核表达可能会产生哪些影响呢？ 知其然还要知其所以然。比如，菌株内源的蛋白酶过多，可能会造成外源表达产物的不稳定，所以一些蛋白酶缺陷型菌株往往成为理想的起始表达菌株。堪称经典的BL21 系列就是lon 和ompT 蛋白酶缺陷型，也是我们非常熟悉的表达菌株。大名鼎鼎的BL21(DE3)融源菌则是添加T7聚合
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