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大量
- 英文名:
Pichia pastoris Strain GS115
- 保质期:
有效期一年
- 供应商:
上海联迈生物工程有限公司
- 保存条件:
低温运输,-80℃保存
- 规格:
1 mL
| 名称 | 编号 | 规格 | 价格 |
| 毕赤酵母GS115菌种 | LM12-154y | 1 mL | 990元 |
使用说明:
联迈生物的各批次质粒菌株发货前均经过严格的多重验证,如存在质量问题,请在收到产品三个月内通知我司。收到甘油菌后,请及时在固体平板上划线培养,挑取单菌落接种到液体培养基中,震荡培养后使用并保存甘油菌。如需获取其他详细信息请登录我司官网联系QQ客服查询。
毕赤酵母GS115菌种的培养方法:
菌种制作菌液的方法(以一瓶为例)1、取10公斤无菌水里面的2公斤烧开,然后加入1公斤的红糖,把红糖充分融化开,便于把红糖里面的有害菌消除。
2、把3公斤的红糖水和剩下的8公斤无菌水装到一个15公斤的容器里,混合均匀,等无菌水冷却到30-40度的时候加菌种1瓶。
3、把菌种和红糖水充分的搅拌均匀,口上盖一层塑料薄膜,要密封发酵,不能漏气。不要装的太满,要预留10-15%的缓冲空间,在发酵过程中会产生气体,装满容易涨破塑料容器。
4、发酵7-12天天左右,温度低要多发酵几天,打开瓶口,有气体产生。闻到酸香味夹杂酒糟味和红糖水的刺激性气味,到就证明发酵成功。(低于15度不能发酵;15-20度发酵20-15天;20-30度,发酵15-10天;30-40度发酵10-6天,发酵时间越长效果越好);或者用PH试纸测试,PH值显示4-5之间即表明发酵成功。如果温度过低,强烈建议用取暖灯或者火炉等加热设备升温。
5、发酵成功后的菌液如果一次不能大量的使用完,就用小瓶子分装密封保存。使用一瓶打开一瓶。如果没有分装。
保存方法:1、菌液宜在常温下避光保存,底部稍有沉淀或浮有些微白沫均属正常,若气味不酸(PH应在4.5以下)或腐臭即已变质勿用。
2、每次用后盖紧瓶盖。保管得好,一年后无异味仍可使用,只是活性有所降低,需适当加大用量。
注意事项:1、制作菌液最好用深井水,若用自来水应放置24小时后用,水只需烧开1/5能够融化开红糖即可。
2、菌液不要与杀菌剂等药物同时混用,要用此类药物,相隔一天以上时间。
3、红糖用热水溶化后,水温降到30-40度,才能投入农盛乐菌种。过高或者过低均影响发酵效果。
4、制作菌液的过程中,不要频繁打开盖子,以免进入杂菌,影响发酵效果。
5、如若遇到特殊问题,请拨打销售电话详询,不要擅做主张,以免对你造成损失。
毕赤酵母GS115菌种注意事项:
1、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。本产品仅可用于实验室研究,不能用于动物,人体以及作为食品添加剂等用途。
2、使用甘油菌时可不完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂布固体琼脂平板即可,也可完全融解后使用,但随着冻融次数的增加,菌株的活力会逐渐下降。
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文献和实验【原创/分享】GS115毕赤酵母表达外源蛋白较详细步骤!!!(从验证到阳性克隆的筛选)
小弟把最近一个多月来所做的工作,做了个总结,供大家一起分享,希望版主能加分,现在我还是0分,很多帖子不能阅览,希望版主加分,今后我实验有了新的进展,我会把总结发上来,和大家一起分享。我做的是GS115表达VEGF,目前已经做到阳性克隆的筛选这一步。待以后再次做了总结,再与大家分享。希望大家支持,绝对原创!!! 一.实验材料 1.菌珠 E.coli DH5α GS115酵母菌 2.质粒 PIC9K/VEGF165重组质粒 3.试剂 NB酵母氮源 G418 gl2、Not1
属(Hansenula),毕赤酵母属(Pichia),球拟酵母属(Torulopsis)等,能在以甲醇为唯一能源和碳源的培养基上生长,甲醇可以诱导它们表达甲醇代谢所需的酶,如醇氧化酶I(AOX1),二羟丙酮合成酶(DHAS)、甲酸脱氢酶(FMD)等。AOX1的甲醇诱导表达量可占胞内总蛋白质的20%~30%,表明AOX1的合成受转录水平的调控。AOX1启动子(PAox )具有较高的调控功能,可用于外源基因的表达调控。甲醇营养型酵母表达系统以巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统最为常用,它由野生
, (3)电击后复活要快。 不过上面的确麻繁,理解加手熟就能达到,最后效率和菌种有关,一般能达到10的9方,有的能达到10的10方。不过现在我做普通转化就不麻繁,过夜菌彻底用EP管小离心,常温10%甘油洗干净,重悬后做电转,用LB或SOC复活立刻铺盘,只要洗的干净,还没有克隆转不出来的,半h就搞定了,只是每次都要鉴定,因为电转杯是反复用,怕别的残留污染。 7、问:转化了一个基因到毕赤酵母,蛋白有表达,但pcr无论如何也检测不到阳性的特性条带,该如何改进,请指点 参考见解:本人曾经遇到过同样情况,后来
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