- ¥300 - 550
- 上海雅吉生物科技有限公司
- 6个月
- 上海
- G020-1
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
上海雅吉生物科技有限公司
- 检测范围：
6个月
- 检测方法：
分光光度法
- 应用：
通用型
- 适应物种：
血清，血浆
- 标记物：
CD26, CD27, CD28, CD30
- 样本：
动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织
- 规格：
500T/1000T
| 规格： | 500T | 产品价格： | ¥300.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 1000T | 产品价格： | ¥550.0 |
【所属类别】：仅供科研
【规格】：50T 20T
【检测方法】：分光光度法
【保存方法】：4℃保存6个月；避免反复冻融
定义：Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用。在正常状态下， Caspase家族都以无活性的酶原(30～50kD)形式表达，当细胞发生凋亡时Caspase可以被蛋白酶裂解，大亚基和小亚基形成活化的Caspase 。一些Caspase活化后可以次序激活其他Caspase形成Caspase级联反应，促发细胞凋亡。在目前已知的14种Caspase中，Caspase-3、8和9与凋亡的关系最为密切，在细胞凋亡中起执行凋亡的作用。将Caspase序列特异性的多肽偶联至发色基团，当该底物被特定的caspase剪切后，发色基团即游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm 或400nm）测定其吸光值，考察caspase的活化程度。
MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 （微板比色法）操作步骤
（1） 使用前低速离心，以免液体积存管盖和管壁；
（2） 本试剂只适用于实验，不适用于临床检测；
（3） PI（propidium iodide，溴化丙锭）有毒性，能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用，使用时需戴手套；
（4） Annexin V-FITC 和 PI 是光敏物质，在操作时请注意避光。在处理和标记时，尽可能在暗处进行。在孵育阶段，用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后，在暗室内用显微镜观察；
（5） 整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在 4℃下操作，以免影响细胞状态。
（6） 在细胞洗涤的最后一步，请尽量将上清弃净，以免 PBS 残留，有可能会影响实验结果。
（7） 为防止荧光衰变，宜在 1 小时内进行流式检测。
（8） PI 染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行Annexin V-FITC 染色，最短可在上机前 5 分钟再加入 PI 染色。
MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 （微板比色法）相关产品如下：
| G002-2 | TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒 （荧光及显色法，石蜡切片） |
20T | 1800元 |
| 50T | 2800元 | ||
| G002-3 | TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒 （荧光及显色法，冰冻切片） |
20T | 1800元 |
| 50T | 2800元 | ||
| G002-4 | TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒 （荧光及显色法，细胞样本） |
20T | 1800元 |
| 50T | 2800元 | ||
| G003-1 | Annexin V-FITC/PI双染 细胞凋亡检测试剂盒 |
10T | 380元 |
| G003-2 | 20T | 600元 | |
| G003-3 | 50T | 980元 | |
| G004-1 | Annexin V-EGFP/PI双染 细胞凋亡检测试剂盒 |
10T | 380元 |
| G004-2 | 20T | 600元 | |
| G004-3 | 50T | 980元 | |
| G005-1 | Annexin V-PE 细胞凋亡检测试剂盒 |
10T | 600元 |
| G005-2 | 20T | 900元 | |
| G005-3 | 50T | 1600元 | |
| G006 | 线粒体提取试剂盒 | 50T | 800元 |
| G007 | 线粒体/细胞核提取试剂盒 | 50T | 800元 |
| G008-1 | 线粒体蛋白提取试剂盒 | 50T | 980元 |
| G008-2 | 100T | 1680元 | |
| G009-1 | 线粒体膜电位检测试剂盒 （JC-1法） |
10T | 680元 |
| G009-2 | 20T | 980元 | |
| G009-3 | 50T | 1680元 |
一、匀浆介质
一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS),客户可根据样本及测定指标的情况自行设定浓度,目的是保持样本的等渗环境。
二、细胞样本的前处理:
1、细胞沉淀的收集：
① 悬浮细胞: 对于悬浮培养的细胞，直接通过离心收集细胞沉淀，将培养液在室温条件下1000转/分,离心10分钟，弃上清留细胞沉淀。
② 贴壁细胞: 对于贴壁培养的细胞，用胰酶将细胞消化下来，或用细胞刮将细胞刮下来，将培养液在室温条件下1000转/分,离心10分钟，弃上清留细胞沉淀。
我们一般建议客户，细胞密度最好不要小于一百万个/ml。
2、细胞沉淀的洗涤：
在细胞沉淀中加入0.5-1ml的PBS （等渗）， 轻轻颠倒混匀，将培养液在室温条件下1000转/分,离心10分钟，弃上清留细胞沉淀。
重复上述操作反复洗涤1～2次。
3、匀浆的方式：手工匀浆，超声破碎,裂解液裂解,反复冻融。
① 手工匀浆：在细胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根据所测指标的不同而有所改变，一般加入0.5ml，细胞密度不小于一百万个/ml），混匀，将细胞悬浮于PBS中，用移液器将细胞悬浮液移至玻璃匀浆管中（2ml玻璃匀浆管），将玻璃匀浆管置于冰水混合物中，手动匀浆3分钟，然后取破碎好的细胞悬浮液进行测定。
② 超声破碎:
在细胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根据所测指标的不同而有所改变，一般加入0.5ml，细胞密度不小于一百万个/ml），混匀，将细胞悬浮于PBS中，在冰水浴条件下进行如下操作:
a、用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用400安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。
b、用超声细胞破碎仪，300W功率，每次超声3～5秒，间隔30秒，重复4～5次。
③ 裂解液裂解
常用裂解液有SDS、NP-40、TritonX-100,这三种去垢剂的作用是不同的，或者说作用力量强弱不同。
1、SDS属于离子型去垢剂，最厉害，基本可以把细胞完全破掉，DNA会释放出来，裂解液变得很粘稠。
2、NP-40是很温和的去垢剂，1%浓度的基本可以破坏掉胞膜，而对核膜破坏的作用弱，结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。
3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之间，偏向于NP40，也是常用的细胞裂解液成分之一，在保护蛋白活性方面有一定作用（SDS基本会使蛋白变性失活）。
去垢剂属性只是一方面，buffer、配比、浓度、提取方法和材料处理也都是关键因素
由于很多裂解液都是蛋白变性剂,对酶活力的测定有一定的影响,一般不推荐用裂解液进行裂解。
④ 反复冻融:
在细胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根据所测指标的不同而有所改变，一般加入0.5ml，细胞密度不小于一百万个/ml），混匀，将细胞悬浮于PBS中，放低温冰箱中结冰，溶解，再结冰，再溶解，反复3次左右）。
由于反复冻融对酶活力影响较大,一般不推荐使用
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文献和实验简介 细胞增殖/细胞毒性测定是涉及培养细胞的研究中最常用的测试之一。 其是检查用于治疗的药物浓度的基本初步测试，也是确定各种研究领域（如肿瘤学和细胞死亡）药物疗效和安全性的非常重要的测试。 传统上，WST-8 或 ATP 检测（使用代谢活性作为指标）和 BrdU 或胸腺嘧啶核苷检测（使用 DNA 合成水平作为指标）已用于细胞生长特性的定量评估。 尽管这些检测由于其简易性和吞吐量而对我们有益，但这些检测都是间接评估方法，因此结果可能与实际细胞数无关。 在许多情况下，这些检测是终点评估，有时会
是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法,可替代传统的MTT法。 二、用途 药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验等。 三、优点 使用方便，无需洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂； CCK-8法能快速检测； CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度； CCK-8法的重复性优于MTT 法，产生的formazan 是水溶性的，减少因洗涤和溶解带来的误差； CCK-8法对细胞毒性小，可以多次测定选取最佳测定时间，与MTT 方法
多功能微板生物活性测试系统（POLARstar OPTIMA）使用程序
1、双击桌面上的图标，打开主屏幕：2、点击上图的屏幕变为：3、输入ADMIN的Password即BMG，点击使用者名字后再Run或双击使用者的名字，屏幕下面的变为。点击主屏幕上面的图标， 4、点击一个已经存在的可以对已有的Protocol进行修改，或直接利用。点击New建立一个新的Protocol，这时主屏左下面出现： 5、根据实验要求，选择Plate mode or Well mode。 6、据实验需要填写相应参数，依次点击下列图框，设定相应参数。 7、当所有参数设定完
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