北京现货肠出血性大肠杆菌溶血素荧光PCR检测试剂盒(Hly)

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博生产销*(代"售")的北京现货肠出血性大肠杆菌溶血素荧光PCR检测试剂盒(Hly)厂家，是高品质的细菌PCR检测试剂盒产品，欢迎的您垂询订购。

名称：北京现货肠出血性大肠杆菌溶血素荧光PCR检测试剂盒(Hly)厂家
产地：国产|进口
等级：科研试剂
规格：48次/盒
编号：SYA087
本试剂盒适用于检测水样粪便、疑似污染的水、食物等样本中的肠出血性大肠杆菌溶血素基因，用于肠出血性大肠杆菌溶血素基因的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

本试剂盒用一对肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

试剂盒组成：

 

组份	数量	规格
Hly反应液(Hly-qPCR MIX)	1管	960μL/管
核酸提取液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
酶混合物(EnzymHly MIX)	1管	48μL/管
阴性对照(NTC)	1管	250μL/管
Hly阳性对照(Hly-PTC)	1管	50μL/管

储存条件：-20℃以下，有效期6个月。

使用方法：

一、样品采集及处理：
1．水样便取0.5-1mL；疑似污染的食物取1g。
2．水样便13000rpm离心2min，去尽上清；疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；疑似污染的水直接取100μL。

二、DNA提取：
对上述处理好的样本加入等体积的核酸提取液(固体标本加入50uL核酸提取液)，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
DNA的提取也可以采用商业化DNA提取试剂盒。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取4µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

三、检测步骤：
1．试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(Hly-qPCR MIX)、酶混合液(EnzymHlyMIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
荧光PCR反应液	20µL	N×20µL
酶混合液	1µL	N×1µL
总量	21µL	N×21µL

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入21μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(Hly-PTC)4μL，10000rpm瞬时离心10秒。
2．qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：

预变性	1循环	94℃ for 2 min
PCR扩增	40循环	94℃ for 15 sec 55℃ for 30 sec

在55℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX 参比荧光。

四、结果分析：
1．结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
2．试验成立判定
➤阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
➤阳性对照(Hly-PTC)：均产生扩增曲线。
➤以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
3．结果判定
➤在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，且有明显的指数增长曲线，表明肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)核酸阳性。
➤Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)核酸阴性。
➤如果35＜Ct值，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
➤对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)核酸阳性；否则判为样本阴性。

五、注意事项：
➤初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
➤所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
➤PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
➤样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
➤试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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·手足口病肠道病毒(EV71)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA211
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·副溶血弧菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA007
英文名称：Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪乙型脑炎病毒(JEV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA419
英文名称：Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒
一、简介：
该方法采用一步法荧光qRT-PCR，反应在同一管内连续进行，操作简单，并有效防止了污染，能对样品中的猪乙型脑炎病毒进行快速检测,具有特异性高、敏感性强和操作简便的特点。

二、用途：
该试剂盒适合于检测发病动物血液、脑脊液、组织以及病毒细胞培养液等标本中猪乙型脑炎病毒(JEV)RNA，适用于猪乙型脑炎病毒(JEV)感染的辅助诊断。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
JEV荧光qRT-PCR反应液(JEV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(JEV-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
6、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
适用标本类型：发病动物的血液、体液、脑脊液、组织以及病毒培养物等标本。
6.1.1 组织：取发病组织约1g，置入1.5mL洁净EP管，立即送检。
6.1.2 血液、体液、脑脊液及病毒培养物：血液，无菌注射器抽取外周血1-2mL注入EDTA2Na(或柠檬酸*)抗凝管；体液、脑脊液及病毒培养物液等，无菌条件下取0.5-1mL左右，置入1.5mL洁净EP管，立即送检。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL 加入到反应体系中即可。
由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(JEV-qRT-PCR MIX)，室温融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，测试反应体系配制如下：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm 离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(JEV-PTC)5μL，10000rpm 瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1)阴性对照(NTC)： 不应产生任何的扩增曲线。
(2)阳性对照(JEV-PTC)：均产生扩增曲线。
(3)以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1)在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明JEV核酸阳性。
(2)Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明JEV核酸阴性。
(3)如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
(4)对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行JEV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明JEV核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA 酶。
(3)PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等)，防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



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·猪源性成分单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA294
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对猪源性成分特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用荧光PCR技术对猪源性成分DNA进行体外扩增检测。本试剂盒中猪源性成分的探针报告基团为FAM。

二、用途：
该试剂盒适合于各种饲料及其它样品中猪源性成分的检测。

三、试剂盒组成：(40T/Kit)
组份 数量 规格
猪物种荧光qPCR反应液(Pork-qPCR MIX) 1管 720μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(Pork-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Bio-Rad系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品采集与DNA提取
6.1 样品采集
样品的采集与预培养按照样品的采集按照国家标准《饲料中牛羊源性成分的定性检测定性聚合酶链式反应(PCR)法》(GB/T 20190-2006)要求进行。
6.2 DNA提取
可按常规方法提取，也可采用商品化试剂盒提取DNA。
6.2.1 动物组织、食品或饲料：直接取约50mg上述材料，匀浆后置入洁净的1.5mL离心管中，加50μl DNA抽提液充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)后100℃15min，4℃降温5min，13000rpm离心5min，取上清液5μL进行PCR反应。
6.2.2 血液：取500μL摇匀的抗凝血转至一洁净的1.5mL离心管中，加入1mL双蒸水，剧烈震荡30s，8000rpm离心5min，弃上清。重复清洗至无明显红色沉淀。加入1mL生理盐水，剧烈震荡15s，10000rpm离心5min，弃上清。沉淀加50μl DNA抽提液并与沉淀混匀，100℃恒温15min，4℃降温5min。13000rpm离心5min，取上清5μL进行PCR反应。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(Pork-qPCR MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 15µL N×15µL
向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(Pork-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1)阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
(2)阳性对照(Pork-PTC)：均产生扩增曲线。
(3)以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1)在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明猪源性成分核酸阳性。
(2)Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明猪源性成分核酸阴性。
(3)如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
(4)对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行猪源性成分qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明猪源性成分核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
(3)PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



北京现货肠出血性大肠杆菌溶血素荧光PCR检测试剂盒(Hly)厂家关键词：SYA087,肠出血性大肠杆菌溶血素荧光PCR检测试剂盒,肠出血性大肠杆菌溶血素荧光PCR检测试剂盒(Hly),百奥莱博

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