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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
室温
- 保质期:
12个月
- 英文名:
Ultra Pure Total RNA Extraction Kit From Blood
- 库存:
667
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京超纯血液总RNA提取试剂盒(TRIzol法)价格厂家,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京超纯血液总RNA提取试剂盒(TRIzol法)价格厂家
编号:ALH005
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
规格:20次|50次
英文名:Ultra Pure Total RNA Extraction Kit From Blood
本试剂盒本试剂盒适用于快速提取全血高纯度总RNA。采用改进的异硫*酸胍/酚一步法(TRIzol法)裂解细胞和灭活RNA 酶, 然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除, 最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
产品组分:
| 组份 | 20次 | 50次 |
| 10X红细胞裂解液RLB | 10ml | 25ml |
| 裂解液RL | 25ml | 50ml |
| 去蛋白液RE | 15ml | 25ml |
| 漂洗液RW | 5ml | 10ml |
| RNase-free H2O | 10ml | 10ml |
| 70%乙醇 | 4ml RNase-free H2O | 9ml RNase-free H2O |
| 吸附柱 | 20个 | 50个 |
| 收集管(2ml) | 20个 | 50个 |
产品特点:
1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2. 结合了异硫*酸胍/酚一步法试剂稳定性好,纯度高和离心柱方便快捷的优点,不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程,RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。
3. 独特的RL裂解液配方,可以有效的消除基因组污染。
4. 多次漂洗去蛋白过程,提取RNA纯度更高。
5. 有效的去除了5S在总RNA中含量,提高了纯度。
注意事项:
1. 第一次使用前请先在漂洗液瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
2. 所有离心步骤如未加说明,均在室温进行。使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
3. 裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 考虑到环保问题,本试剂盒不含有实验室常用试剂*仿,用户使用前需要自备*仿。
5. 常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带,分别为~5Kb(28S),~2Kb
(18S),条带亮度比值约为2:1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S,tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4,5条带也属于正常现象,如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。
6. 检测OD260/OD280吸光度比值时,RNA样品应该溶于TE后检测,如果用水稀释后检测,由于一般水离子强度和PH值低,会使OD280升高,从而使比值降低。
7. 加入裂解液RL匀浆后,加*仿前,样品可在–60℃-70℃ 保存一个月以上。
8. 关于DNA的微量残留:
一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留, 在大多数RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA 残留(一般电泳EB 染色紫外灯下观察不可见)影响不是很大, 如果要进行严格的mRNA 表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时:
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA 中的连接区,这样DNA 就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA 和cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA 提取物用RNase-free 的DNase I 处理。
4) 在步骤去蛋白液RE 漂洗前,直接在吸附柱 上进行DNase I 消化处理。
储存条件:室温,有效期12个月。(裂解液RL需4℃避光保存)
本品别名:超纯血液总RNA提取试剂盒(TRIzol法)|全血RNA提取试剂盒|血液RNA提取试剂盒|全血总RNA提取试剂盒
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·组织细胞miRNA提取试剂盒
编号:ALH072
英文名称:Tissue Cell microRNA Extraction Kit
规格:50次
本试剂盒采用独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,强烈有机抽提去除蛋白和DNA,RNA包括微小分子RNA吸附于离心柱内特殊硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质进一步去除, 最后低盐的洗脱液将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
近年来对RNA干扰和调节性小RNA的广泛研究迫切需要一种能有效提取15~30核苷酸左右大小RNA(包括siRNA和miRNA)的试剂盒。但是传统的RNA提取方法如硅胶膜不能有效吸附回收,酚/胍抽提和乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA。本试剂盒的出现很好的解决了这一问题。
产品组分:
Lysis/Binding buffer————50ml
70%乙醇——————————9ml
Wash Solution 1——————12ml
Wash Solution 2/3—————10ml
RNase-free H2O——————10ml
吸附柱和收集———————50套
microRNA吸附柱和收集管——50套
产品特点:
1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。 克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2. 也不需要乙醇沉淀等容易丧失微小分子RNA的步骤。
3. 快速,简捷,单个样品操作一般可在30分钟内完成。
4. 多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.9~2.0,基本无DNA残留,可用于RNAi,RT-PCR,Northern-blot和各种实验。
注意事项:
1. 第一次使用前请先在70%乙醇、Wash Solution 1瓶和Wash Solution 2/3瓶中加入指定量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
2. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm 的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
3. 需要自备乙醇,*仿,一次性注射器,研钵。
4. Lysis/Binding buffer 和Wash Solution 1含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
5. 预防RNase 污染,应注意以下几方面:
1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase 污染。
2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3) RNA 在裂解液中时不会被RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时,塑料器皿可在0.5M NaOH 中浸泡10 分钟,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase。
4) 配制溶液应使用无RNase 的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1%( v/v),37℃放置过夜,高压灭菌。)
6. RNA 纯度及浓度检测:
完整性:RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件:胶浓度1.2%;0.5×TBE 电泳缓冲液;150v,15 分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA 为rRNA,电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA 条带。动物rRNA 大小分别约为5kb和2kb,分别相当于28S 和18S rRNA。动物RNA 样品中最大rRNA 亮度应为次大rRNA 亮度的1.5-2.0 倍,否则表示RNA 样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。
纯度:OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA,OD260/OD280 读数(10mMTris, pH7.5)在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品,假定在10mM Tris,pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间,在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA 不纯。
浓度:取一定量的RNA 提取物,用RNase-free 水稀释n 倍,用RNase-free 水将分光光度计调零,取稀释液进行OD260, OD280 测定,按照以下公式进行RNA浓度的计算:终浓度(ng/μl)= (OD260)×(稀释倍数n)×40。
储存条件:室温,有效期6个月。(Lysis/Binding buffer需4℃避光保存)
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·大型质粒大量提取试剂盒(>10kb质粒)
编号:ALH091
英文名称:Large Plasmid Extraction Kit(for cell transfection)
规格:20次
本试剂盒适用于BAC/PAC/P1/Cosmid等大型质粒制备。常规的离心柱型质粒抽提试剂盒并不适用于BAC/PAC/P1/Cosmid等大型质粒DNA的抽提。这主要是因为大型质粒DNA分子量很大,常常会超过100kb而且一般拷贝数低产量低,使用常规的离心柱吸附膜吸附效率和产量很低而且过膜会打断这些大分子量的质粒DNA。本试剂盒采用改进碱裂解法从培养菌中提取质粒DNA,采用独特的溶液配方和内毒素清除试剂,只需要几次简单离心去除蛋白质、多糖、内毒素、RNA等杂质,获得高质量的质粒DNA。纯化DNA的OD260/280通常在1.8左右,得到的质粒可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的工作中。纯化后期过程均在Eppendorf管中操作,方法简单,不需特殊设备,无需过柱,不用酚*仿抽提;基本可完全回收细菌裂解释放出的质粒,不必担心质粒DNA的丢失。本方法提取纯化质粒DNA,对质粒损伤小,即使是10kb甚至100kb以上的大型质粒或超大型BAC/PAC质粒,只要碱裂解法能够提取,就可以有效纯化。此外溶液型的试剂可以按照比例放大缩小进行小提/中提/大提,最后可选择任意小体积溶解质粒,浓度可高达3μg/μl。
试剂盒组份(20次):
RNaseA(10mg/ml)-————————1.3ml
溶液P1—————————————130ml
溶液P2—————————————100ml
溶液PⅢ-————————————110ml
杂质清除剂A-——————————3ml
杂质清除剂B-——————————30ml
内毒素清除剂——————————10ml
试剂盒特点:
1.不需要使用有毒的*酚,*仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。快速、 方便、从150-200 ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中,可快速提取0.4-1mg纯净的高拷贝质粒DNA,提取率达80-90 %。
2.获得的质粒产量高,超螺旋比例高,纯度好,可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
3.内毒素含量极低(<0.1 EU/μg DNA),可直接应用于细胞转染。
注意事项
1. 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb 的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加P1、P2、PⅢ的用量。
2. 提取大质粒时操作动作要轻柔,应该使用剪大了开口的吸头,防止机械剪切对DNA 的损坏。
3. DNA 沉淀液沉淀离心后,可能看不到明显沉淀。如未见沉淀,担心DNA 丢失,可保留上清液,待完成全部操作后电泳鉴定,以确定是否获得终产物(数百微克DNA 离心沉淀在管的侧壁上,可能无法看到明显团块)。
4. 得到的质粒DNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1 相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带,也可能为2 条或者多条DNA 条带,这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成,与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过95%。
5. 质粒DNA 确切分子大小, 必须酶切线性化后,对比DNA 分子量Marker 才可以知道。处于环状或者超螺旋状态的质粒,泳动位置不确定,无法通过电泳知道确切大小。
储存条件:室温,有效期18个月。
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