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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
2~8℃
- 保质期:
长期
- 英文名:
EDTA Buffer(50×)
- 库存:
737
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")WE0319型EDTA缓冲液(IHC抗原修复液,50×)优惠,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:WE0319型EDTA缓冲液(IHC抗原修复液,50×)优惠
产地:国产|进口
编号:WE0319
品牌:百奥莱博
英文名:EDTA Buffer(50×)
福尔马林固定时,组织中的许多*基酸残基形成醛键、羧甲键而封闭了部分抗原决定簇,同时蛋白之间发生交联也使抗原决定簇隐蔽。因此,对于石蜡切片,要求在进行IHC染色前,先进行抗原修复,即将固定时分子之间所形成的交联破坏,恢复抗原的原有空间形态。EDTA缓冲液是除柠檬酸缓冲液外另一种常用的IHC 抗原修复液。有部分抗原用EDTA缓冲液修复效果好于柠檬酸缓冲液。
注意事项:
1、请使用足量的修复液,修复过程中保证组织切片完全浸没在修复液中。
2、使用沸水浴或高压修复时,操作请务必谨慎,尤其高压修复时,保证锅内有足量的修复液,以防止干烧。
3、推荐的修复时间为达到理想修复效果所需时间,如组织粘片不牢,容易掉片,请酌情减少修复时间。
操作步骤:
1、高压热修复:根据需要量,取适量本品,稀释50倍后即可使用。将稀释好的修复液加入高压锅内,将待修复切片浸于其中,保证修复液没过组织(最好将切片浸入盛修复液的塑料容器内,再置于锅内修复液浴中),盖上压力锅盖,加热至均匀喷汽,从喷汽开始计时,1~2 分钟后压力锅离开热源,自然冷却至室温,取出切片,蒸馏水冲洗后,再用 PBS(0.01M pH7.4)漂洗 2 次,每次 3分钟。下接免疫组化染色步骤。此方法修复强度最大,是最常用的热修复法。
2、微波热修复:根据需要量,取适量本品,稀释50倍后即可使用。将切片放入盛有修复液的容器中,置微波炉内加热至沸腾,停止加热,使容器内液体温度下降保持在95℃~98℃之间并持续 10~15分钟(注意:请根据具体机型酌情设置条件,务必满足以上步骤中对温度和时间的要求)。取出容器,自然冷却至室温,取出切片,蒸馏水冲洗后,再用 PBS(0.01M pH7.4)漂洗 2 次,每次 3分钟。下接免疫组化染色步骤。此方法修复强度大于沸水浴,但小于高压修复。
3、沸水浴热修复:根据需要量,取适量本品,稀释50倍后即可使用。将待修复切片完全浸入盛有修复液的容器中,并将此容器置于盛去离子水的大器皿水浴中,电炉上加热煮沸,从修复液的温度到达95℃起开始计时15~20分钟。让切片在修复液中自然冷却至室温,蒸馏水冲洗,再用 PBS(0.01M pH7.4)漂洗 2 次,每次 3分钟。下接免疫组化染色步骤。该方法效果较微波和高压修复差。
储存条件:2~8℃
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WE0319型EDTA缓冲液(IHC抗原修复液,50×)优惠关键词:EDTA Buffer(50×),EDTA缓冲液,WE0319,IHC抗原修复液,50×,EDTA缓冲液(IHC抗原修复液,50×)
·2×BAmp MasterMix(含染料)
编号:WE0106
英文名称:2×BAmp MasterMix(With Dye)
规格:5ml
BAmp MasterMix由BAmp DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系,浓度为2×。BAmp DNA Polymerase是一种兼具高扩增效率和高保真性的耐热聚合酶。其主要特点是可以高效扩增长片段DNA,尤其在扩增>10 kb的DNA片段方面,其优势更加明显,所扩增的片段最长可以达到40 kb。该酶具有高度的延伸和校对能力,保真度高于普通Taq酶。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷,可最大限度地减少人为误差和污染。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定,重复性好。本产品已加入染料(蓝色),反应结束后可直接进行电泳检测,无需再使用上样缓冲液。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。适用于构建基因图谱、序列测定及分子遗传学研究等。
产品组成:
| 组份 | 1ml | 5ml |
| 2×BAmp MasterMix(With Dye) | 1ml | 5×1ml |
| ddH2O | 1ml | 5×1ml |
注意:2×BAmp MasterMix含有BAmp DNA Polymerase,3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。
质量控制:
1、经检验无外源核酸酶活性;
2、PCR方法检测无宿主残余DNA;
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。
使用方法:
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×BAmp MasterMix(With Dye) | 25μl | 1× |
| Forward Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Reverse Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Template DNA | <0.5μg | <0.5μg/50μl |
| ddH2O | up to 50μl |
注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 2 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 25-35 个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 30 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min |
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,BAmp DNA Polymerase的扩增效率为2.0 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
WE0319型EDTA缓冲液(IHC抗原修复液,50×)优惠关键词:EDTA Buffer(50×),EDTA缓冲液,WE0319,IHC抗原修复液,50×,EDTA缓冲液(IHC抗原修复液,50×)
·0.5 M Tris-HCl缓冲液(pH6.8)
编号:WE0285
英文名称:0.5 M Tris-HCl(pH6.8)
规格:500ml
·定影粉
编号:WE0302
英文名称:Fixing Powder
规格:20套
·BL21(DE3)感受态细胞
编号:WE0253
英文名称:BL21(DE3)Competent Cell
规格:100μl×10支
本产品是大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。BL21(DE3)菌株适合表达非毒性蛋白,该菌株是以T7 RNA聚合酶为表达系统的外源基因蛋白高效表达的宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子调控,该区整合在BL21染色体上。使用pUC19质粒检测,转化效率可达107。
产品组成:
| 组份 | 0.1ml×10支 |
| BL21(DE3)Competen t Cell | 10×100μl |
| Control DNA pUC19,0.1ng/μl | 10μl |
实验前准备及重要注意事项
1、感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。
2、转化所有步骤均在无菌条件下操作。
3、包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA,供对照试验使用。
使用方法:
1、取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2、待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3、42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4、向每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5、根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意:
1)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
储存条件:-80℃。
我公司强烈推荐蛋白质研究系列产品,热情期待您的咨询选购WE0319型EDTA缓冲液(IHC抗原修复液,50×)优惠。
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文献和实验一、SP 法 1)脱蜡、水化;2)PBS 洗 2~3 次各 5 分钟;3)3% H2O2(80% 甲醇)滴加在 TMA 上,室温静置 10 分钟;4)PBS 洗 2~3 次各 5 分钟;5)抗原修复;6)PBS 洗 2~3 次各5分钟;7)滴加正常山羊血清封闭液,室温 20 分钟。甩去多余液体。8)滴加Ⅰ抗 50μl,室温静置 1 小时或者4℃过夜或者37℃1小时。9)4℃ 过夜后需在37℃复温45分钟。10)PBS 洗 3 次各 5 分钟;11)滴加 Ⅱ 抗 40~50 μl,室温
我的石蜡切片又「团灭」了!没关系,专业技术人员与您并肩推塔!
1. 二甲苯脱蜡:3 × 5 min。(为确保测试时二甲苯新鲜,使用新的二甲苯)2. 乙醇水化:100% 乙醇2 × 10 min;95% 乙醇,2 × 10 min。3. 洗涤:切片浸没于ddH2O中,3 ×5 min。抗原修复4. 修复:使用200 mL ddH2O稀释后的SignalStain® EDTA Unmasking Solution#14747进行修复,根据实验室微波炉的实际情况,高火档加热2 min45sec后煮沸,立即换保温档,保温15 min。修复后切片不冷却,直接进行下一步
十分重要,实验中我们也发现要获得满意结果必须选择抗原修复液的最适PH值。在常规石蜡切片做AR-IHC,采用不同浓度的Alcl3液做AR液,发现4%的Alcl3取得最理想的染色[11]。在修复的抗原中,金属盐可影响蛋白的结构。郑辉等人[12]使用0.01mmol/LPBS、0.01mol/L柠檬酸缓冲液、0.1mol/L Tris-HCL缓冲液及1mmol/L EDTA-Na2,于微波修复抗原,发现其阳性强度逐渐增强。 高温抗原修复因其机理相当复杂,对某些存在的问题很难用设计对照的方法
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