EDTA缓冲液(IHC抗原修复液，50×) 蛋白质研究

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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括EDTA缓冲液(IHC抗原修复液，50×) 蛋白质研究在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：EDTA缓冲液(IHC抗原修复液，50×) 蛋白质研究
品牌：百奥莱博
英文名：EDTA Buffer(50×)
产地：国产|进口
编号：WE0319
规格：100ml
  福尔马林固定时，组织中的许多*基酸残基形成醛键、羧甲键而封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联也使抗原决定簇隐蔽。因此，对于石蜡切片，要求在进行IHC染色前，先进行抗原修复，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，恢复抗原的原有空间形态。EDTA缓冲液是除柠檬酸缓冲液外另一种常用的IHC 抗原修复液。有部分抗原用EDTA缓冲液修复效果好于柠檬酸缓冲液。

注意事项：
1、请使用足量的修复液，修复过程中保证组织切片完全浸没在修复液中。
2、使用沸水浴或高压修复时，操作请务必谨慎，尤其高压修复时，保证锅内有足量的修复液，以防止干烧。
3、推荐的修复时间为达到理想修复效果所需时间，如组织粘片不牢，容易掉片，请酌情减少修复时间。

操作步骤：

1、高压热修复：根据需要量，取适量本品，稀释50倍后即可使用。将稀释好的修复液加入高压锅内，将待修复切片浸于其中，保证修复液没过组织(最好将切片浸入盛修复液的塑料容器内，再置于锅内修复液浴中)，盖上压力锅盖，加热至均匀喷汽，从喷汽开始计时，1~2 分钟后压力锅离开热源，自然冷却至室温，取出切片，蒸馏水冲洗后，再用 PBS(0.01M pH7.4)漂洗 2 次，每次 3分钟。下接免疫组化染色步骤。此方法修复强度最大，是最常用的热修复法。

2、微波热修复：根据需要量，取适量本品，稀释50倍后即可使用。将切片放入盛有修复液的容器中，置微波炉内加热至沸腾，停止加热，使容器内液体温度下降保持在95℃~98℃之间并持续 10~15分钟(注意：请根据具体机型酌情设置条件，务必满足以上步骤中对温度和时间的要求)。取出容器，自然冷却至室温，取出切片，蒸馏水冲洗后，再用 PBS(0.01M pH7.4)漂洗 2 次，每次 3分钟。下接免疫组化染色步骤。此方法修复强度大于沸水浴，但小于高压修复。

3、沸水浴热修复：根据需要量，取适量本品，稀释50倍后即可使用。将待修复切片完全浸入盛有修复液的容器中，并将此容器置于盛去离子水的大器皿水浴中，电炉上加热煮沸，从修复液的温度到达95℃起开始计时15~20分钟。让切片在修复液中自然冷却至室温，蒸馏水冲洗，再用 PBS(0.01M pH7.4)漂洗 2 次，每次 3分钟。下接免疫组化染色步骤。该方法效果较微波和高压修复差。

储存条件：2～8℃

更多有关EDTA缓冲液(IHC抗原修复液，50×) 蛋白质研究的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：
ARB13075 小鼠肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TSGF)ELISA代测服务 Mouse tumor specific growth facter/tumor supplied group of factor,tsgf ELISA KIT
ARB10469 人白三烯E4(LTE4)定量分析 Human leukotriene e4,lt-e4 ELISA KIT
诺*沙星 Nystatin 70458-96-7
ARB13360 牛抑制素(INH)含量分析 Bovine inhibin,inh ELISA KIT
BL0838 羊抗人IgA纯化抗体
ARB12180 大鼠白细胞介素16(IL-16)免费代测 Rat interleukin16,IL-16 ELISA KIT
ARB11521 人胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)Elisa定量检测 Human glial cell line-derived neurotrophic factor,gdnf ELISA KIT
F020110 山羊抗乙肝核心抗原抗体 Polyclonal Goat Anti-HBcAg
ARB13904 猪血管生成素1(ANG-1)尿液中含量检测 Porcine angiopoietin 1,ang-1 ELISA KIT
PY01-120  D-泛酸*  25克  
ARB10314 人切除修复交叉互补基因1(ERCC1)elisa检测说明书 Human excision repair cross-complementation group 1,ercc1 ELISA KIT
BL1094 RPMI Medium 1640(不含酚红、谷*酰胺、丙*(代"酮")酸*)
ARB13124 小鼠促卵泡素(FSH)含量分析 Mouse follicle-stimulating hormone,fsh ELISA KIT
63231-63-0 核糖核酸酵母
环丙基*甲*(代"烷") Nα-Boc-D-tryptophan 7051-34-5
胭脂红 Aspartame 1390-65-4
ARB11841 人凝血因子Ⅹ(FⅩ)ELISA代测服务 Human coagulation factor Ⅹ,fⅩ ELISA KIT
2-羟基*乙酸 L-Phenylalaninol 614-75-5
BTN130504 凝胶法内毒素半定量试剂盒 Gel Based TAL Kit
磷钼酸 Geldanamycin 51429-74-4
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·酵母基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0181
英文名称：Yeast Genomic DNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒适用于从酵母样品中提取高纯度的总DNA，本品无需使用*酚、*仿等有机溶剂抽提，可获得最大为50 kb的DNA，同时对100 bp的DNA片段也能有效的回收。本试剂盒采用优化的缓冲液体系使裂解液中的DNA高效结合在硅胶膜上，而其他污染物可流过膜，使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度的DNA。提取的DNA可直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

试剂盒组成：

 

组份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25 mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
Lyticase Working Buffer	30ml
Lyticase	300μl
Glass Beads	2g
吸附柱DM及收集管	50套

保存条件：Lyticase -20℃，其他组分室温(15～30℃)。

自备试剂：无水乙醇，β-巯基乙醇。

产品特点
1、适用于从酵母样品中分离纯化高纯度总DNA。
2、无需有机溶剂提取以及乙醇沉淀，彻底去除污染物及下游反应抑制物，快速提取高品质DNA。
3、Lyticase酶与玻璃珠共同作用，有效破除酵母细胞壁。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。对于有些细胞壁较厚以及在培养阶段会产生大量代谢物的酵母，建议在生长早期收集样品。
3、Lyticase Working Buffer在使用前请加入β-巯基乙醇，使其终浓度为0.1%。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GTL和Buffer GL于65℃水浴重新溶解。
6、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GL前加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。

操作步骤：
1、取1-5ml酵母培养物(最多不超过5×107个细胞，一般对于酿酒酵母OD600=1.0时，相当于1-2×107细胞/ml)，12000rpm(～13400×g)离心1分钟，收集菌体沉淀，尽量吸弃上清。
注意：菌液较多时，可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。
2、酵母细胞壁的去除：向菌体中加入600μl Lyticase Working Buffer(使用前检查是否加入β-巯基乙醇，使其终浓度为0.1%)，并加入5μl Lyticase，充分混匀。30℃处理30分钟。4000rpm(~1,500×g)离心10分钟，弃上清，收集沉淀。
注意：以上为5×107酵母细胞Lyticase用量，根据酵母的菌株和酵母细胞数量的不同，所用的Lyticase的浓度和孵育时间应该进行适当调整。
3、向沉淀中加入200μl Buffer GTL，加入40 mg玻璃珠(Glass Beads)，涡旋5分钟。
4、加入20μl 蛋白酶K 混匀。55℃振荡水浴至细胞完全裂解。若无振荡水浴箱，温育期间每20-30分钟颠倒混匀一次。(一般不超过1小时细胞即可完全裂解)。
注意：如需去除RNA，在上述步骤完成后加入4μl 100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
5、12000rpm离心5分钟，小心吸取上清至新离心管中。
6、加入200μl Buffer GL，充分混匀。70℃孵育10分钟，其间颠倒混匀数次，12000rpm离心5分钟，将上清移到一个新的离心管中。
注意：若孵育后溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取的DNA不纯。
7、加入200μl无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀。短暂离心，使管壁和管盖上的液体集中到管底。
8、将步骤7所得溶液和沉淀全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤10。
11、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟以彻底晾干。
12、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤10；若洗脱体积小于200μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。


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BL0946 生物素化兔抗鸡IgG抗体
F030817 BIOTIN标记兔抗狗IgG抗体 Rabbit Anti-Dog IgG*BIOTIN
SJ0235 DPBS
ARB13165 小鼠热休克蛋白40(Hsp-40)含量检测 Mouse heat shock protein 40,hsp-40 ELISA KIT
ARB12708 大鼠磷脂酰肌醇抗体IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)elisa检测 Rat phosphatidylinositol antibody igg/igm,pi ab-igg/igM ELISA KIT
ARB10174 人X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良(SEDL)Elisa定量检测 Human x-linked spondyloepiphyseal dysplasia tarda,sedl ELISA KIT
13114-27-7 Zeatin  玉米素
ARB12078 大鼠内皮素1(ET-1)尿液中含量检测 Rat endothelin 1,et-1 ELISA KIT
PY01-105  腺嘌呤  1克  
ARB14072 乙肝表面抗原定量分析 
没食子酸正丙酯 Acetoacetanilide 121-79-9
丙*(代"烯")酰胺  Thionin 79-06-1 
ARB11231 人细胞毒素(CTX)酶联免疫定量检测 Human cytotoxin,ctx ELISA KIT
ARB12743 小鼠Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)elisa检测 Mouse collagen type Ⅳ,col Ⅳ ELISA KIT
ARB10015 人25羟基维生素D(25-OH-D)ELISA代测服务 Human 25-dihydroxy vitamin d, 25-oh-d ELISA KIT
NF-238 兔抗鼠IgG血清
ARB13663 兔去甲肾上腺素(NA)含量测试 Rabbit noradrenaline,na ELISA KIT
小分子量蛋白质标准 Tylosin tartrate
3-(N-玛啡啉)丙磺酸 5′-CMP,2Na 1132-61-2
ARB13397 羊布病(BrucellosIs)Elisa分析 
氧合血红蛋白 VAZO52

我公司强烈推荐蛋白质研究系列产品，热情期待您的咨询选购EDTA缓冲液(IHC抗原修复液，50×) 蛋白质研究。