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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
2~8℃
- 保质期:
长期
- 英文名:
Rabbit HRP Kit(DAB)
- 库存:
484
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应北京现货免疫组化试剂盒(兔源一抗)销*(代"售"),我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:北京现货免疫组化试剂盒(兔源一抗)销*(代"售")
产地:国产|进口
英文名:Rabbit HRP Kit(DAB)
规格:3ml
品牌:百奥莱博
编号:WE0314
本试剂盒根据生物素与链霉亲和素具有很强亲和力的原理设计。在兔源的一抗与相应靶抗原结合后,本试剂盒中的生物素化羊抗兔二抗与一抗特异结合;二抗上标记的生物素与标记了过氧化物酶的链霉亲和素结合,形成抗原~特异性一抗~生物素化的二抗~HRP标记的链霉亲和素复合物。HRP可以催化底物显色,从而推断待检抗原的存在及分布。该试剂盒使用的生物素化二抗、SA-HRP,均采用优化的标记和纯化技术,使得其染色有更高灵敏度和更低的背景,适合于检测福尔马林固定石蜡包埋组织切片,以及冰冻切片、细胞爬片、新鲜制备的血涂片等。兔Streptavidin-HRP试剂盒适合与百奥莱博即用型或浓缩型抗体配套使用。
试剂盒组成:
| 组份 | 3ml |
| Solution A(Endogenous Peroxydase Enzymes Blocking Buffer,White Solution) | 3ml |
| Solution B(Normal Goat Serum For Blocking,White Solution) | 3ml |
| Solution C(Goat anti-Rabbit IgG,Biotin,Ready to Use,Yellow Solution) | 3ml |
| Solution D(Streptavidin-HRP,Ready to Use,Red Solution) | 3ml |
| DAB-A(20×) | 250μl |
| DAB-B(1×) | 5ml |
注意事项:
1、本试剂盒仅适用于一抗为兔源抗体的IHC实验。
2、以每张切片加入1滴(约50μl)计算,3ml可做60张切片,18ml可做360张切片。
3、对于内源性生物素含量比较丰富的组织,使用本试剂盒时最好用内源性生物素阻断剂进行封闭。
4、DAB工作液现配现用,配制好的工作液2~8℃避光1小时内有效。
5、实验过程中避免组织片干燥,因此各步孵育时工作液用量必需充足,保证完全覆盖组织样本,且尽量在湿盒中进行孵育。
6、为获得最佳实验结果,请务必优化实验条件及试剂用量。
7、DAB为可疑致癌物,使用时请采取必要的防护措施。
8、本产品仅用于科研,不能用于人体反应或人体治疗。
操作步骤:
1、常规处理欲检测的石蜡或冰冻组织切片或细胞爬片等样本。
1)组织切片或细胞爬片染色前处理:
a. 石蜡切片
脱蜡水化:60ºC烤片1小时,二甲*脱蜡二次,每次5分钟;再依次浸入梯度乙醇(无水乙醇-无水乙醇-95%-85%-75%乙醇)和蒸馏水中各5分钟水化。
b. 冰冻切片和细胞爬片
切片(或爬片)浸于0.01 M pH7.4 PBS洗涤3次×5分钟。然后用0.1%Triton X-100覆盖组织(或细胞)浸润15分钟,0.01 M pH7.4 PBS洗涤2次×5分钟。
2)石蜡切片的抗原修复:绝大大多数情况下,石蜡组织切片用柠檬酸缓冲液高压修复都是适合的。
修复工作液配制:1 L去离子水中加入10ml柠檬酸缓冲液(IHC抗原修复液, 100×)(WE0318),混匀即可。
修复过程:修复液加入高压锅内,待修复切片浸于修复液中(必需没过组织),盖上压力锅盖,加热至均匀喷汽,从喷汽开始计时,1~2分钟后压力锅离开热源,自然冷却至室温,取出切片,蒸馏水淋洗后,再用PBS(0.01 M pH7.4)漂洗2次,每次3分钟。
2、滴加适量Solution A白色溶液,即内源性过氧化物酶封闭液室温孵育10分钟,PBS充分淋洗。
3、滴加适量Solution B白色溶液,即封闭用正常羊血清工作液,室温孵育10分钟,甩干。
4、滴加适量一抗工作液(商品化即用型抗体或适当比例稀释的浓缩抗体),按实验要求孵育,然后PBS充分淋洗。
5、滴加适量Solution C黄色溶液,即生物素标记羊抗兔二抗工作液,室温孵育10分钟,PBS充分淋洗。
6、滴加适量Solution D红色溶液,即HRP标记的链霉亲和素,室温孵育10分钟,PBS充分淋洗。
7、DAB显色工作液配制:根据需要量,将DAB-A和DAB-B以1:19的体积比混匀后即为DAB显色工作液。也可选择每毫升试剂B中滴加1滴(约50μl)试剂A,混匀即可。
8、显色:加适量的DAB显色工作液于需要显色的组织切片或细胞爬片上即可显色,显色时间一般为1-5分钟。显微镜下观察控制显色时间,当达到最佳显色效果后,自来水冲洗终止显色。显色后的切片经复染、脱水透明,封片后可长期保存。
储存条件:2~8℃
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北京现货免疫组化试剂盒(兔源一抗)销*(代"售")关键词:WE0314,免疫组化试剂盒,免疫组化试剂盒(兔源一抗),Rabbit HRP Kit(DAB)
·FastStar热启动DNA聚合酶
编号:WE0122
英文名称:HotStar DNA Polymerase
规格:500U|2500U
HotStar DNA Polymerase是抗Taq酶单克隆抗体和WE0101 Taq DNA Polymerase的混合制品,适用于Hot Start PCR。使用Taq酶抗体进行PCR扩增时,高温变性前由于Taq酶抗体与Taq酶结合抑制DNA聚合酶活性,能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。Taq酶抗体在PCR反应最初的DNA变性步骤中变性,DNA聚合酶活性恢复,达到热启动效果。使用本品无需特殊地对Taq酶抗体失活处理,可以在常规PCR反应条件下使用。
HotStar DNA Polymerase具有5"→3"DNA聚合酶活性和5"→3"外切酶活性,无3"→5"外切酶活性,酶延伸速度2 kb/min,可以扩增长度达5 kb的片段。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高的特点,主要适用于PCR法扩增DNA片段、DNA序列测定等实验。
产品组成:
| 组份 | 500U | 2500U |
| HotStar DNA Polymerase, 5 U/μl | 100μl | 5×100μl |
| 10×PCR Buffer | 1.8ml | 5×1.8ml |
注意:本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM*离子。
活性定义:用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74℃,30分钟内,将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制:
1、经过多次柱纯化,SDS-PAGE检测其纯度大于99%;
2、经检测无外源核酸酶活性;
3、PCR方法检测无宿主残余DNA;
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。
使用方法:
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 10×PCR Buffer | 5μl | 1× |
| dNTP Mix,10 mM each | 1μl | 200μM each |
| Forward Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Reverse Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Template DNA | <0.5μg | <0.5μg/50μl |
| HotStar DNA Polymerase,5U/μl | 0.25-0.5μl | 1.25-2.5 U/50μl |
| ddH2O | up to 50μl |
注意:可以在室温下配制反应液,须将试剂置于冰上。
2、PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 2 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 25-35个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 30 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 2 min |
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
北京现货免疫组化试剂盒(兔源一抗)销*(代"售")关键词:WE0314,免疫组化试剂盒,免疫组化试剂盒(兔源一抗),Rabbit HRP Kit(DAB)
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