北京免疫组化试剂盒(兔源一抗)现货

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京免疫组化试剂盒(兔源一抗)现货是高品质的蛋白质研究产品，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多免疫组化试剂盒(兔源一抗)等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。

名称：北京免疫组化试剂盒(兔源一抗)现货
产地：国产|进口
规格：3ml
编号：WE0314
品牌：百奥莱博
  本试剂盒根据生物素与链霉亲和素具有很强亲和力的原理设计。在兔源的一抗与相应靶抗原结合后，本试剂盒中的生物素化羊抗兔二抗与一抗特异结合；二抗上标记的生物素与标记了过氧化物酶的链霉亲和素结合，形成抗原～特异性一抗～生物素化的二抗～HRP标记的链霉亲和素复合物。HRP可以催化底物显色，从而推断待检抗原的存在及分布。该试剂盒使用的生物素化二抗、SA-HRP，均采用优化的标记和纯化技术，使得其染色有更高灵敏度和更低的背景，适合于检测福尔马林固定石蜡包埋组织切片，以及冰冻切片、细胞爬片、新鲜制备的血涂片等。兔Streptavidin-HRP试剂盒适合与百奥莱博即用型或浓缩型抗体配套使用。

试剂盒组成：

 

组份	3ml
Solution A(Endogenous Peroxydase Enzymes Blocking Buffer，White Solution)	3ml
Solution B(Normal Goat Serum For Blocking，White Solution)	3ml
Solution C(Goat anti-Rabbit IgG，Biotin，Ready to Use，Yellow Solution)	3ml
Solution D(Streptavidin-HRP，Ready to Use，Red Solution)	3ml
DAB-A(20×)	250μl
DAB-B(1×)	5ml

注意事项：
1、本试剂盒仅适用于一抗为兔源抗体的IHC实验。
2、以每张切片加入1滴(约50μl)计算，3ml可做60张切片，18ml可做360张切片。
3、对于内源性生物素含量比较丰富的组织，使用本试剂盒时最好用内源性生物素阻断剂进行封闭。
4、DAB工作液现配现用，配制好的工作液2～8℃避光1小时内有效。
5、实验过程中避免组织片干燥，因此各步孵育时工作液用量必需充足，保证完全覆盖组织样本，且尽量在湿盒中进行孵育。
6、为获得最佳实验结果，请务必优化实验条件及试剂用量。
7、DAB为可疑致癌物，使用时请采取必要的防护措施。
8、本产品仅用于科研，不能用于人体反应或人体治疗。

操作步骤：

1、常规处理欲检测的石蜡或冰冻组织切片或细胞爬片等样本。

1)组织切片或细胞爬片染色前处理：
a. 石蜡切片
脱蜡水化：60ºC烤片1小时，二甲*脱蜡二次，每次5分钟；再依次浸入梯度乙醇(无水乙醇－无水乙醇－95%－85%－75%乙醇)和蒸馏水中各5分钟水化。
b. 冰冻切片和细胞爬片
切片(或爬片)浸于0.01 M pH7.4 PBS洗涤3次×5分钟。然后用0.1%Triton X-100覆盖组织(或细胞)浸润15分钟，0.01 M pH7.4 PBS洗涤2次×5分钟。
2)石蜡切片的抗原修复：绝大大多数情况下，石蜡组织切片用柠檬酸缓冲液高压修复都是适合的。
修复工作液配制：1 L去离子水中加入10ml柠檬酸缓冲液(IHC抗原修复液, 100×)(WE0318)，混匀即可。
修复过程：修复液加入高压锅内，待修复切片浸于修复液中(必需没过组织)，盖上压力锅盖，加热至均匀喷汽，从喷汽开始计时，1~2分钟后压力锅离开热源，自然冷却至室温，取出切片，蒸馏水淋洗后，再用PBS(0.01 M pH7.4)漂洗2次，每次3分钟。

2、滴加适量Solution A白色溶液，即内源性过氧化物酶封闭液室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
3、滴加适量Solution B白色溶液，即封闭用正常羊血清工作液，室温孵育10分钟，甩干。
4、滴加适量一抗工作液(商品化即用型抗体或适当比例稀释的浓缩抗体)，按实验要求孵育，然后PBS充分淋洗。
5、滴加适量Solution C黄色溶液，即生物素标记羊抗兔二抗工作液，室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
6、滴加适量Solution D红色溶液，即HRP标记的链霉亲和素，室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
7、DAB显色工作液配制：根据需要量，将DAB-A和DAB-B以1：19的体积比混匀后即为DAB显色工作液。也可选择每毫升试剂B中滴加1滴(约50μl)试剂A，混匀即可。
8、显色：加适量的DAB显色工作液于需要显色的组织切片或细胞爬片上即可显色，显色时间一般为1-5分钟。显微镜下观察控制显色时间，当达到最佳显色效果后，自来水冲洗终止显色。显色后的切片经复染、脱水透明，封片后可长期保存。

储存条件：2～8℃

北京免疫组化试剂盒(兔源一抗)现货极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·微量凝胶DNA回收试剂盒
编号：WE0169
英文名称：Gel DNA Extraction Micro Kit
规格：50次
  本试剂盒专用于从普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化微量DNA片段，溶胶速度快，并利用硅基质膜技术，以非常小的终洗脱体积(可少至10μl)，从琼脂糖凝胶中，快速纯化50 bp-50 kb的DNA片段，纯化过程有效去除引物、寡核苷酸、酶等杂质，从而可获得高纯度、高浓度，完整性好的DNA，回收率高达90%。本试剂盒回收纯化的DNA可直接用于测序、连接和转化、酶切、标记、体外转录等分子生物学实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer PG	25ml
Buffer PS	15ml
Buffer PW(浓缩)	10ml
Buffer EB	10ml
离心吸附柱DE及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇，异丙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，将吸附柱置于2～8℃可保存更长时间。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
3、使用前请检查Buffer PG如果出现结晶或者沉淀，可在37℃水浴中放置3-5分钟，即可恢复澄清。
4、电泳时最好使用新的电泳缓冲液，避免影响电泳和回收效果。
5、切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
6、回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少，洗脱体积越少，回收率越低。
7、将水浴锅预热至50℃。
8、Buffer PG中含有pH指示剂，当pH≤7.5时溶液的颜色为黄色，此时DNA才能够有效的与膜结合，当pH值偏高时溶液的颜色变为桔红色和紫色，需要进行调整。

操作步骤：
1、将单一目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)，放入干净的离心管(自备)中，称量计算凝胶重量(提前记录离心管重量)。
注意：若胶块的体积过大，可将胶块切成碎块。
2、向胶块中加入1倍体积Buffer PG(如凝胶重为100 mg，其体积可视为100μl，依此类推)。
3、50℃水浴温育，其间每隔2-3分钟温和地上下颠倒离心管，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟直至胶块完全溶解。
注意：
1)凝胶完全融解后胶溶液为黄色，可进行后续操作；若胶溶液为桔红色或紫色，可向胶溶液中加10-30μl 的3 M醋酸*(pH5.0)，将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作。
2)胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱，吸附柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。
4、(可选步骤)当回收片段<300 bp时，应加入1/2胶体积的异丙醇，上下颠倒混匀(如凝胶重100 mg，则加入50μl的异丙醇)。
5、柱平衡：向已装入收集管中的吸附柱DE中加入200μl Buffer PS，13000rpm(~～～16200×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、将步骤3或4所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
7、向吸附柱中加入450μl Buffer PW(使用前先检查是否已加入无水乙醇)，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如果纯化的DNA用于盐敏感的实验(例如平末端连接或直接测序)，建议加入Buffer PW静置2-5分钟再离心。
8、重复步骤7。
9、13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇的残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱放到一个新的1.5ml离心管(自备)中，向吸附膜中间位置悬空滴加10-50μlBuffer EB，室温放置2分钟。13000rpm离心1分钟收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意：
1)为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟。
2)回收大于10 kb的DNA片段时，Buffer EB应在50℃水浴中预热，可增加回收效率。

储存条件：室温(15～30℃)。


北京免疫组化试剂盒(兔源一抗)现货关键词：Rabbit HRP Kit(DAB),免疫组化试剂盒,免疫组化试剂盒(兔源一抗),WE0314


·cDNA第一链合成试剂盒(去除基因组DNA)
编号：WE0133
英文名称：BalbScript gDNA Removal cDNA Synthesis Kit
规格：100次
  本试剂盒是用于去除基因组DNA进行反转录的试剂盒。该试剂盒在42℃，2 min即可除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制gDNA Eraser的组分，经过 gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行逆转录反应合成cDNA。本试剂盒配有新型高效反转录酶BalbScript，新颖突变位点大幅提升酶的转录活性，cDNA第一链合成的效率和产量更高，可利用pg级的总RNA或mRNA合成cDNA第一链。如逆转录产物cDNA用于下游荧光定量检测，可在42℃，15min完成逆转录反应。本试剂盒适用于第一链cDNA的合成和后续的RT-PCR、RT-qPCR、以及全长cDNA文库的构建等。

试剂盒组成：

组份	25次	100次
gDNA Eraser	12.5μl	50μl
10×gDNA Eraser Buffer	30μl	120μl
BalbScript，200 U/μl	25μl	100μl
5×ScriptRT Buffer	120μl	500μl
Primer Mix	30μl	120μl
RNase-Free Water	1ml	2×1ml

产品特点
1、快速去除基因组：含有去除基因组DNA 的gDNA Eraser，只需2min即可除去基因组DNA。
2、快速逆转录：15分钟即可获得荧光定量PCR模板cDNA第一链合成。
3、灵敏度高：可利用pg级总RNA或mRNA模板合成cDNA第一链。
4、高效的逆转录效率：新颖突变位点大幅提升酶活性能，获得更高产量的cDNA。

注意事项：
1、在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，使用专门的仪器和耗材。
2、逆转录体系配制在冰上进行操作，防止RNA发生降解。试剂盒的酶使用后尽快置于-20 ºC保存，并尽量避免反复冻融。
3、反应体系可倍比放大，10μl反应体系可最大使用1μg总RNA。
4、Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成， 也可根据实验需要选用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer。
5、若起始RNA的量小于50ng，建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号为WE0223。
6、对于二级结构复杂的RNA模板，建议在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5分钟立刻置于冰上，短暂离心后进行下一步操作。

操作步骤：
将模板RNA在冰上解冻；试剂盒组分在室温解冻后立刻置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，并经短暂离心后使用。

一、去除基因组DNA反应
1、根据以下表格在冰上配制反应体系，总体积为10μl。为了保证反应液配制的准确性，先按反应数+2的量配制预混体系，然后再分装到每个反应管中，最后加入RNA样品。

试剂	10μl反应体系
10×gDNA Eraser Buffer	1μl
gDNA Eraser	0.5μl
RNA Template	10 pg-1μg
RNase-Free Water	up to 10μl

注意：如果总RNA量大于1μg，请按比例扩大反应体系。若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)，该产品货号为WE0223。

2、涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
3、42℃孵育2分钟(室温反应时，可以延长到30分钟)。
4、反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。

二、逆转录反应

1、根据以下表格在冰上配制反应体系，反应液配制请在冰上进行。为了保证反应液配置的准确性，先按数+2的量配制成预混溶液，然后再分装 10μl到每个反应管中，取配制的预混液10μl加入至已完成去基因组的步骤1反应管中。
 

试剂	20μl反应体系
步骤1反应液	10μl
BalbScript，200 U/μl	1μl
Primer Mix	1μl
5×ScriptRT Buffer	4μl
RNase-Free Water	4μl

注意：可根据实验需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer，建议20μl 反应体系Oligo-dT Primer 50pmol，或Gene Specific Primer 2 pmol。

2、混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
3、cDNA合成反应条件：
1)若下游进行荧光定量PCR检测，42℃孵育15分钟，85℃孵育5分钟。
2)若下游进行普通PCR检测，42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。
注意：对于二级结构复杂或GC含量高的模板，可以提高逆转录温度至50℃，增强逆转录效率。
4、反应结束后，短暂离心后置于冰上，再进行后续PCR或荧光定量PCR，如果需要长时间保存，请置于-20℃。
注意：进行Real-time PCR反应时，逆转录产物的加量应不超过PCR反应总体积的1/10。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


北京免疫组化试剂盒(兔源一抗)现货关键词：Rabbit HRP Kit(DAB),免疫组化试剂盒,免疫组化试剂盒(兔源一抗),WE0314


·Protein A琼脂糖凝胶
编号：WE0271
英文名称：Protein A-Agarose
规格：5ml
  本产品可从血清，腹水，细胞培养上清和细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物丌同亚型的抗体或包含抗体 Fc片段的基因工程重组蛋白。具有高IgG结合特异性，高流速，低Protein A-Agarose脱落等特点。

注意事项：
1、凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温后装柱，避免产生气泡影响柱效。
2、装柱时尽可能维持凝胶长径比为5:3-2:1，长径比过大将导致洗脱峰拖尾，洗脱体积增大；长径比过小将导致样品与填料接触时间短，吸附不充分，填料吸附蛋白量小。
3、若上样液中抗体浓度过高，应使用平衡缓冲液稀释至1-2 mg/ml，抗体浓度过高影响柱效。
4、可以采用降低上样时的流速来增加样品与填料接触时间从而提高纯化抗体量。
5、凝胶用低pH缓冲液洗脱时间应尽可能短，洗脱后用中性缓冲液尽快中和至pH中性，以延长亲和介质的使用寿命。
6、洗脱后，应立刻用如中和缓冲液将收集到的抗体溶液中和到中性(pH7.4左右)，以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。
7、填料使用后应用0.1 M柠檬酸*缓冲液(pH3.0)做再生处理，长期采用极端的洗脱条件将缩短亲和介质的使用寿命。

使用方法：

I 缓冲液的准备
1、平衡缓冲液：纯化不同动物和不同亚型抗体时所用平衡缓冲液是不同的，部分参照如下。

抗体	平衡缓冲液成分
人IgG1、人IgG2、小鼠IgG2a、小鼠IgG2b	20 mM PBS，300 mM NaCl，pH7.4-8.5
人IgG3、人IgG4、小鼠IgG1、大鼠IgG3	50 mM Tris-Cl，3 M NaCl，pH7.8-8.5

2、洗脱缓冲液：0.1 M柠檬酸*缓冲液，pH4.0。
3、再生缓冲液：1 M NaCl。
4、中和缓冲液：1 M Tris-Cl，pH9.0。
注意：
1)以上缓冲液使用前均需0.45μM滤膜过滤。
2)为提高抗体和介质的吸附力。可适当提高平衡缓冲液中的盐浓度和ph值。

II 样本制备
1、样品用平衡缓冲液稀释5-10倍。
2、细胞培养液中大量的血清蛋白会对亲和层析造成一定的干扰，去血清处理或稀释样品将提高纯化抗体收率。
注意：样品在上柱前需0.45μM微孔滤膜过滤。

III 操作步骤
1、将Protein A-Agarose填料混匀后加入层析柱，室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。
2、向装填后的柱中加入3-5个柱床体积的超纯水将乙醇冲洗干净，用平衡缓冲液流洗5-10个柱床体积平衡柱子。
3、将样品上柱，上样流速60 cm/h。
4、平衡缓冲液再洗5-10个柱床体积，直至基线平稳。
5、洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰，用中和缓冲液将洗脱收集样品中和到中性。
6、立即用5-10个柱床体积平衡缓冲液平衡柱子到中性。
7、再生缓冲液流洗3-5个柱床体积。先后用纯水、20%乙醇分别流洗3-5个柱床体积。柱子置于2～8℃保存。
注意：收集洗脱峰时可以分阶段收集到多个管中，最后根据测定结果重新调整收集方式。
8、本产品使用10次以上后先用20%乙醇洗5个柱床体积，再用70%乙醇洗脱5-10个柱床体积，再用20%乙醇流洗3-5个柱床体积。柱子置于2～8℃保存。

储存条件：2～8℃，避免冷冻

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