大肠杆菌BL21化学感受态细胞多少钱

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博供应的大肠杆菌BL21化学感受态细胞多少钱用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多大肠杆菌BL21化学感受态细胞等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。

名称：大肠杆菌BL21化学感受态细胞多少钱
产地：国产|进口
规格：0.1mL*10
英文名：E.coli BL21 Chemical Competent Cell
品牌：百奥莱博
本产品是采用大肠杆菌BL21菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。本产品用作表达载体的宿主，适用于毒性蛋白的表达，适用于不是基于T7启动子的表达系统。使用pUC19质粒检测，本产品转化效率可达107。
菌株基因型为：BL21 strain E.coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-)gal。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μL感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μL无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养
3. 涂布剩余的。

关于大肠杆菌BL21化学感受态细胞多少钱的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·胚胎裂解液
编号：BTN130806
英文名称：Embryonic Cell Lysis SolutionEmbryonic Cell Lysis Solution
规格：1mL
本产品是胚胎培养过程中分离单个胚胎细胞的裂解液。可用于分离得到不同时期的胚胎的单细胞，得到的单细胞可用于各种单细胞分析，核酸提取等实验。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期两年。

·柱式真菌RNA提取试剂盒
编号：BTN80804
英文名称：Fungal RNA Column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是在本公司真菌RNA提取试剂盒(BTN60305)基础上改进的柱式产品，跟真菌RNA提取试剂盒相比，它具有下列特点：
1. 柱式操作，更加简单快捷，整个过程只需要约30分钟。
2. RNA 纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Norther杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
3. RNA产量高，一般在 20-70μg/mL 酵母培养物(约2.0 ×107个细胞)。
4. 非酶细胞破裂法，适用于各种形态和各个种属的真菌及革兰氏阳性细菌，包括 Candida albican、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pombe 、 Pichia pastoris 、Bacillus subtilis、Staphylococcusaureus等。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	20ml
溶液B	25ml
溶液C	75ml
溶液D	25ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将50mg左右的干菌丝(或100mg左右的鲜菌丝、或适当数量的真菌菌落)转移到 1.5mL塑料离心管中。如果是液体真菌培养物，则直接将1-10mL液体真菌在 1.5mL塑料离心管中 12000～15000g离心 1分钟，并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。
2. 加入0.4mL溶液A 并充分吹打混匀。如果 A溶液存放时产生沉淀，请置于65℃融化，用前充分摇晃均匀。
3. 加入0.4mL溶液B，剧烈振荡 30秒。
4. 65℃保温 5分钟。
5.室温 12000～15000g离心 3～5分钟，转移上清到一干净的1.5mL塑料离心管中。
6. 再加入0.1mL溶液B和0.1mL自备*仿，振荡混匀 30秒。
7.室温 12000～15000g离心 3～5分钟，转移上清到一自备的、干净的5mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清 3倍体积的溶液C(约1.2-1.5mL)和1倍体积的溶液D(约0.4-0.5mL)，充分混匀。
9. 将混合液(约2.5mL)分 3-4次转 移 到离 心 吸 附 柱中 。 每次13000-15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
10. 用 0.5mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11.一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高，可以再用 0.5mL 通用洗柱液重复此步一次。
12.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的洗柱液会影响 RNA的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 1.5mL塑料离心管中，加入30-100μL RNA 洗脱液。
14.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测：
 如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414 ，2000)。 如 果是简 单 检 测 ，可以使 用 TAE或SuperBuffer-2 DNA/RNA 两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques，9:558，1990)。普通 DNA上样液不含变性剂，也没经过去 RNase处理，所以最好不要使用。 尤其需要注意的是不要使用 TBE进行 RNA电泳，因为TBE 所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分，硼*(代"酸")通过与RNA 核糖中的羟基发生络合反应，形成 RNA分子内或RNA分子间的络合复 合物，使同样长度的RNA 具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA 络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组 DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关，而 RNA样品中污染的其他多糖也会参与此反 应，使硼*(代"酸")对 RNA电泳的影响更复杂，所以TBE 对 RNA电泳的影响 没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，最好是避免使用。
16. RNA产量产率测定：
 将5-10μL RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA 稀释在 DEPC 水中检测 OD260和OD280，否则光吸收比在 TE中测得的低 10%-15%。
17. RNA 纯度测定：
 无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3 之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用我公司的DNA Scavenger和PS Scavenger 去除。测 OD时 RNA 不能过度稀释使 OD 读数低于仪器的有效范围。

疑难解答：
Q：为何从酵母中提取的总 RNA 有 3 条小带？
A：它们分别是70bp左右的tRNA，120bp左右的5S RNA，160bp左右的5.8 S RNA。
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组 DNA吗？
A：不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用 TBE作电泳液的话)形成的复合物加 RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使 RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液 RNAload可以使 RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用 TAE或超快电泳液 SuperBuffer-2，最好不要使用 TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？
A：如果怀疑有 DNA污染，可以用 RNase处理 RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA污染。进一步确认可以使用 PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。


大肠杆菌BL21化学感受态细胞多少钱关键词：大肠杆菌BL21化学感受态细胞,E.coli BL21 Chemical Competent Cell ,BTN140428

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2,4-二羟基-6-甲基*甲*(代"酸") Fmoc-Ala-OH 480-64-8
3-*基异丁酸 Benzenesulfinic acid sodiu*(代"m") salt 144-90-1
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Triton X-100细胞裂解液   100ml
BTN130699 RNase 抑制剂(小鼠源) Murine RNase Inhibitor
油酸* BCIP 143-18-0
CYB161072 猴IgG(冻干粉)
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