北京柱式动物RNA大量提取试剂盒价格

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名称：北京柱式动物RNA大量提取试剂盒价格
规格：5次
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：BTN80901
本试剂盒是柱式动物RNA提取试剂盒(BTN71201)的大提升级产品，可用于从各种动物组织(包括白细胞)中大规模快速提取总RNA。跟柱式动物RNA提取试剂盒相比，其主要特点是：
1.大规模提取，一次最大可以提取到80-100μg的动物总RNA。
2. 操作简单快速，整个过程只需要不到二十分钟(对一个样品而言)。
3. RNA 纯度更高，OD260/OD280一般在2.0左右。
4.一般不含用电泳可以检测到的基因组DNA污染。
5.适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。
6. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。

试剂盒组成：

 

成分	5T
溶液A	50ml
溶液B	50ml
离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
RNA 洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 先将1-2 g左右剪切好的动物组织放入50mL塑料离心管中，加10mL溶液A，用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg/mL 裂解液，否则十分容易产生DNA污染。
2. 加入0.2倍体积的自备*仿(10mL溶液A需2mL*仿)，振荡器上充分振荡混均30秒。
3. 5000-7000rpm室温离心3～5分钟。
4. 将上清液(约6-7mL的无色透明水相，有时水相比重大时，水相在下层，有机相即蓝相在上层，吸取时应吸取透明水相)转移到一个干净的50mL塑料离心管中。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下少许上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
5. 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。加入溶液B后，溶液为乳白色。
6. 将溶液转移到离心吸附柱中，5000-7000rpm室温离心1分钟，弃穿透液。
7. 加10mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
8. 加10mL 通用洗柱液，室温离心1分钟，弃穿透液。此步可以省略。
9.室温5000-7000rpm离心2分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
10. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入1mL RNA 洗脱液。
11.室温5000-7000rpm离心2分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
12. 重复10-11 步一次，大提离心吸附柱吸附能力较强，一般第二次洗脱能洗脱较第一次洗脱更多的RNA。
13. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
14. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH在7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1OD260 RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
15. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA专用上样液(如RNA上样液)。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。

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