通用植物RNA提取试剂盒北京厂家

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北京百奥莱博供应的通用植物RNA提取试剂盒北京厂家用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多通用植物RNA提取试剂盒等RNA纯化产品请联系我司咨询订购。

名称：通用植物RNA提取试剂盒北京厂家
品牌：百奥莱博
英文名：Universal Plant RNA Extraction Kit
产地：国产|进口
编号：ALH033
本试剂盒适用于快速提取植物组织RNA，使用独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，然后用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，DNase直接在柱上消化残留DNA，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

试剂盒特点：
1.完全不使用有毒的Beta-巯基乙醇，苯酚，氯*(代"仿")等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.简捷，单个样品操作一般可在40分钟内完成，世界上最简单快速的试剂盒。
3.配套DNase I 柱上消化，得到的RNA不残留DNase消化，可直接用于反转录荧光定量PCR、二代测序、芯片、RACE等实验。
4.世界领先，是同类产品中适应性最广泛的试剂盒，可以提取包括水稻、玉米、小麦、拟南芥、番茄、烟草和一般多糖多酚如棉花、冬青等植物。
5.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.2，无DNA残留,可直接用于荧光定量PCR、RT-PCR、芯片、二代测序、Northern-blot等各种实验。

试剂盒组份：

组份	50次
裂解液RPA	50ml
去蛋白液RW1	40ml
漂洗液RW	10ml
RNase-freeH2O	10ml
DNaseBuffer	1.25ml×2/td>
Rnase free DNaseI	0.25ml
吸附柱和收集管	50套

注意事项：
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机。
2. 需要自备乙醇，研钵(可选)。
3. 裂解液RPA和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

提示：第一次使用前请先在漂洗液RW 瓶加入指定量无水乙醇!

1. 直接研磨法（推荐）:
a. 新鲜植物组织称重后取100mg 迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100mg 放入研钵）， 加入1 ml 裂解液RPA 室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液RPA 立刻充分接触以抑制RNA酶活性。
b. 将裂解物转入离心管，剧烈摇晃振荡15 秒，13,000rpm 离心5-10 分钟，沉淀不能裂解的碎片。
c. 取480μl 裂解物上清（在不超过RNA 吸附柱能力的情况下可以取更多或者全部上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5 体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
d. 立刻接操作步骤的步骤3。

2. 液氮研磨法:
a. 取500μl 裂解液RPA，转入1.5ml 离心管中。
b. 液氮中研磨适量植物组织成细粉后，取50mg 细粉转入上述装有RPA 的离心管, 立即用手剧烈振荡20 秒，充分裂解。
c. 用吸头吹打混匀帮助裂解或者剧烈涡旋震荡直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30 秒)，可以剪切DNA，降低粘稠度和提高产量。
d. 将裂解物13000rpm 离心5-10 分钟，沉淀不能裂解的碎片。
e. 取裂解物上清（在不超过RNA 吸附柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5 体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
f. 立刻接操作步骤的步骤3。
注意：以上液氮研磨法用户可以根据需要加倍处理，可以提高产量。也就是使用1ml 的裂解液RPA和100mg的样品。

3. 将混合物(每次小于720μl，多可以分两次加入)加入一个吸附柱 中，（吸附柱放入收集管中）13000rpm 离心2 分钟，弃掉废液。确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。

4. 加350μl 去蛋白液RW1，室温放置1 分钟，13,000rpm 离心30 秒，弃掉废液。

5. DNase I 工作液配制：取45μl DNase I buffer 和5μl RNase free DNase I 在离心管轻轻吹打混匀成工作液（处理多个离心柱子要按照比例放大制备工作液）。

6. 向吸附柱 中央加入50μl 的DNase I 工作液，室温（20-30℃）放置15 分钟。
注意：直接将工作液滴在膜中央上，不要让工作液滴在O 型圈或是离心柱管壁上。

7. 向吸附柱 中加入350μl 去蛋白液RW1， 12000rpm 离心30 秒，弃废液，将吸附柱放回收集管中。

8. 加入500μl 漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），13000rpm 离心30秒，弃掉废液。加入500μl 漂洗液RW，重复一遍。

9. 将吸附柱 放回空收集管中，13000rpm 离心2 分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

10. 取出吸附柱，放入一个RNase free 离心管中，根据预期RNA 产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water（事先在70-90℃水浴中加热可提高产量），室温放置1 分钟，12000rpm 离心1 分钟。

11. 如果预期RNA 产量>30μg，加30-50μl RNase free water 重复步骤10，合并两次洗液，或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA 浓度高)。

洗脱两遍的RNA洗脱液RNA浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%，但是浓度要低，用户根据需要选择。

注意：如果不需要做荧光定量PCR，仅仅做普通的反转录，克隆基因片段，可以省略DNA 酶柱上消化的步骤，具体就是第4 步骤的“加350μl 去蛋白液RW1”改成“加700μl 去蛋白液RW1”，同时省略步骤5，6，7。

储存条件：室温，有效期12个月(DNase I及其Buffer需-20℃保存)

本品别名：通用型植物RNA提取试剂盒(Dnase I)|植物通用RNA提取试剂盒|通用植物RNA提取试剂盒|通用植物RNA纯化试剂盒

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BL1200 卢戈碘液(革兰氏染色)
氯化银 PLP 7783-90-6
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·超纯总RNA提取试剂盒(TRIzol法)
编号：ALH011
英文名称：Ultra Pure Total RNA Fast Extraction Kit
规格：20次|50次
本试剂盒适用于动植物组织、动植物培养细胞的总RNA提取，采用改进的异硫氰酸胍/酚一步法(TRIzol法)裂解细胞和灭活RNA酶，然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点，不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程，RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。
3.独特的RL裂解液配方，可以有效的消除基因组污染。
4.多次漂洗去蛋白过程，提取RNA纯度更高。
5.有效的去除了5S在总RNA中含量，提高了纯度。

试剂盒组份：

组份	20次	50次
裂解液RL	20ml	50ml
去蛋白液RE	15ml	25ml
漂洗液RW	5ml	10ml
RNase-free H2O	10ml	10ml
吸附柱和收集管	20套	50套

储存条件：室温，有效期一年。(裂解液RL需4℃避光保存)

注意事项：
1. 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
2. 本试剂盒抑制RNA酶效果极佳，所有离心步骤如未加说明，均可在常温进行。
3. 裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 考虑到环保问题，本试剂盒不含有实验室常用试剂氯*(代"仿")，使用前需要自备氯*(代"仿")。
5. 常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带，分别为~5Kb（28S），~2Kb（18S），条带亮度比值约为2：1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S，tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4，5条带也属于正常现象，如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。
6. 检测OD260/OD280吸光度比值时，如需稀释RNA样品应该用TE（PH 8)，如果用水稀释后检测，由于一般水离子强度和PH值低，会使OD280升高，从而使比值降低。
7. 加入裂解液RL匀浆后，加氯*(代"仿")前，样品可在–60℃～70℃ 保存一个月以上。
8. 若提取细菌RNA，推荐细菌RNA提取试剂盒（目录号：ALH027和ALH029）。

操作步骤（实验前请先阅读注意事项）
 提示：第一次使用前请先在漂洗液RW 瓶中加入指定量无水乙醇!
1. 匀浆处理
a. 组织
将组织在液氮中磨碎，每50~100mg组织加1ml的裂解液RL后匀浆。组织样品容积不能超过RL容积的10%。
b. 单层生长的细胞
直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml的RL溶解细胞，并用移液枪轻轻吹打混匀。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的RL量（每10cm2加1ml）。一般情况下，普通大小的细胞培养瓶，加入1ml的RL, 迅速轻摇使RL充分和瓶底所有细胞接触裂解细胞并灭活RNA酶，轻轻用移液枪反复吹打混匀。当RL量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。
c. 悬浮生长的细胞
通过离心来沉淀细胞，小心弃上清。每5~10×106的动物细胞或植物细胞加1ml的RL。在RL试剂中用移液枪反复吹打来裂解细胞。在加入RL前应避免洗涤细胞，否则会增加mRNA降解的可能性。
2. 将匀浆样品剧烈震荡混匀，在15～30℃条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。
3. 可选步骤：4℃的条件下12,000rpm 离心10分钟，小心取上清转入一个新的RNase free的离心管中。当样品富含蛋白质、脂肪、多糖或是细胞外物质例如肌肉、脂肪组织或植物的块茎部分时可能需要一额外的分离步骤。匀浆化后在2~8℃的条件下以12,000rpm离心10分钟，移除匀浆中不溶解的物质，余下的沉淀中包含有细胞外膜、多糖、以及高分子量DNA，而上层的超浮游物含有RNA。
4. 每1ml RL加0.2ml氯*(代"仿")。盖紧样品管盖，剧烈振荡15秒并将其在室温下孵育3分钟。
5. 于4℃12,000rpm 离心10分钟，样品会分成三层：下层有机相，中间层和上层无色的水相，RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加RL体积的50%，把水相小心转移到新管中（不要触碰中间层），记录水相体积。
6. 加入水相体积一半也就是0.5倍体积的无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀）。得到的溶液和可能沉淀一起转入吸附柱中（吸附柱套在收集管内，若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱中，请分两次转入吸附柱中。) ，12,000rpm离心45秒，弃废液，将吸附柱重新套回收集管。
7. 加500μl 去蛋白液RE，12000rpm 离心45 秒，弃废液。
8. 加入500μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12000rpm 离心45秒，弃废液。
9. 重复步骤8一次。
10. 将吸附柱放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
11. 取出吸附柱，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加50-80μl RNase free water，室温放置2分钟，12000rpm 离心1分钟。如果需要较多RNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心1分钟，或者另外再加30μl RNase free water，离心1分钟，合并两次洗脱液。洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要RNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积最好不少于30μl，体积过小降低RNA 洗脱效率，减少RNA产量。


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