大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)pLys化学感受

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)pLys化学感受态细胞价格是高品质的克隆与表达产品，由北京百奥莱博供应，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)pLys化学感受态细胞等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。

名称：大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)pLys化学感受态细胞价格
产地：国产|进口
编号：BTN130560
英文名：E.coli Rosetta-gami (DE3)pLys Chemical Competent Cell
规格：0.1mL*10
 Rosetta-gami(DE3)pLysS是Rosetta-gami(DE3)的的衍生菌株，用于具有毒性的含二硫键真核蛋白的表达。它是高度严紧表达宿主菌，包括Tunerlac 透性酶突变以及gor B/gor突变帮助细胞质内二硫键形成。

基因型：Δ(ara–leu)7697 Δ lac X74 Δ phoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL F"[lac+lacIq pro](DE3)gor522::Tn10(TcR)gorB::kan plysS pRARE(CmR)

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

关于大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)pLys化学感受态细胞价格的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·血液RNA柱式提取试剂盒
编号：BTN71202
英文名称：Blood RNA column Extraction Kit
规格：50次
本试剂盒是在血液RNA提取试剂盒(BTN3071)基础上开发的柱式升级产品，专门从动物全血样品中快速提取总RNA。

试剂盒特点：
1. 比BTN3071更加简单快捷，直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品，不需裂解红细胞等任何预处理步骤，整个提取过程只需要十分钟左右，可以全在室温下进行。
2.产量和纯度更高，OD260/280 均在2.0左右，产率一般为2-5μg/mL人血。
3. 每次微量提取的最大样品处理量可以达到1.5mL，高于进口的同类产品。
4.与常用的抗凝剂(包括肝素，EDTA，柠檬酸*，草酸*)兼容，得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern杂交等研究。

试剂盒组成：

 

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将0.2-1.5mL 新鲜或解冻后的抗凝全血加入到1.5mL塑料离心管中。
2. 12000～15000g室温离心3分钟，弃上清(血浆)。如果此时血液细胞沉淀体积大于0.2mL，则需要减少血液的使用量，具体减少量需根据具体情况决定，因为各个个体(尤其是患者)血液中白细胞数目差别很大。
3. 将1mL溶液A加入到血液细胞沉淀中，用移液枪吹打沉淀使细胞裂解。
4. 将0.3mL的溶液B加入到离心管中，剧烈震荡30秒。
5.和0.2mL *仿加入到离心管中，剧烈震荡30秒。
6. 12000～15000g室温离心3～5分钟，将上清液(为无色或浅红色，约0.5-0.9mL)转移到另一干净离心管中。注意：转移的液体不要超过0.7mL，否则下一步不能加入等体积的溶液C。为防止污染，最好留100μL左右的上清液。下层有机相一般呈深红色，中间层为白色，含有DNA，蛋白质和其他细胞破碎物，避免触及或吸取。
7. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。
8. 分两次将溶液转移到离心吸附柱中，每次转移后12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 加0.7mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 如果有必要，可以再加0.3mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。注意：增加此步可以进一步提高RNA的纯度。
11.室温12000～15000g离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的后续反应。
12. 将离心吸附柱转移到一个RNase-free的收集管中，加入50-100μL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
13. 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
15. RNA产量产率测定：将5-10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。人血RNA产率一般为2-5μg/mL。
16. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在2.0左右(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：如何去除RNA样品中的DNA污染？
A：可以使用百奥莱博的非酶DNA 清除剂DNA ERASOL-2。
Q：为何有的样品在第6 步离心后有很厚的中间层，上清很少。
A：这是因为蛋白质变性不充分，可以适当减少血液的用量。白细胞多的血液容易产生这种情况。
Q：离心吸附柱的RNA 最大吸附量是多少？
A：是40μg。



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·Tris饱和酚
编号：BTN3191
英文名称：Tris-Saturated Phenol
规格：100mL
本产品是将重蒸酚用Tris-HCl(pH8.0)缓冲液充分饱和而得，pH在8左右，不会再吸收样品中的水分。它可用于DNA提取时去除蛋白质。

储存条件：常温运输和保存、避光。有效期一年。

疑难解答：
Q：提取DNA时一定要用Tris饱和酚吗？
A：不一定，最重要的是pH，Tris(其实是Tris-HCl)只是pH缓冲液，用其饱和酚的目的是提高酚的pH。如果用其他缓冲液使酚的pH升高到7以上，也可以用于DNA纯化。如果低于此pH，DNA可能会进入酚相而丢失。

·超级电泳液
编号：BTN151103
英文名称：Superbuffer
规格：100mL
本品是我司开发的超级核酸电泳液套装，其中的溶液A含抗水解的核酸染料，用于配制琼脂糖凝胶(溶液A也可用于电泳，但不经济)；溶液B为不含染料的电泳液。

产品特点：
1.高浓度，溶液A和溶液B用去离子水稀释100倍后可以直接用作配胶工作液和电泳工作液，100mL的产品可以配制10 L工作液。
2.低产热，用溶液A配制的胶在溶液B配制的电泳液中电泳时可用30 V/cm的中等电压(cm是指电泳槽两电级之间的距离)，一般的mini胶电泳(如检查PCR扩增)只需要5-10分钟即可完成，比TAE和TBE快4-5倍(TAE和TBE电泳一般需要40分钟)。当然，也可以按常规的电泳参数电泳，所需时间约为40分钟左右。
3. 用本产品溶液A 配制的琼脂糖凝胶可以在TBE和TAE缓冲液中低压电泳。用TBE 配制的琼脂糖凝胶也可以在本产品溶液B配制的电泳液中电泳(低压中压均可)。但用TAE 配制的胶不能在溶液B中电泳。
4. 用本产品电泳得到的DNA片段的胶回收率高于使用TAE和TBE电泳的胶回收，不影响后续的DNA胶回收和DNA连接等反应。
5.溶液A(配胶用)和溶液B(电泳用)均可以单独购买。

产品组成：

成分	A型	B型
溶液A(配胶液，含染料)	100ml	-
溶液B(电泳液，不含染料)	-	100ml
说明书	1份	1份

储存条件：常温保存和运输，有效期两年。如果本产品有沉淀析出现象，请65℃水浴溶解后使用。

使用方法：
将本品溶液A用去离子水稀释100倍(1mL溶液A加99mL去离子水)，混匀后直接用于配琼脂糖胶，溶液B用去离子水稀释100倍(1mL本产品加99mL去离子水)后直接用于做电泳液，其余操作跟TAE，TBE缓冲液一样。需注意的地方是：

1.电压：对一般minigel，一般可以用250-350V 跑5-10分钟；对大的电泳槽，可用400-450V 跑5-10分钟。若在电泳时发生电流或电压逐渐下降的现象，请检查电泳仪是否设置了电流上限或功率上限。若继续存在，可能需要更换新的缓冲液。
2. DNA条带扭曲：DNA样品中所含SDS量过高时(SDS 主要来于上样液)，DNA条带将出现扭曲，影响实验效果。建议使用不含SDS的上样液，最好使用跟我公司超级电泳液兼容的上样液。
3. 反复使用：本溶液A配制的电泳液至少可以重复使用2-3次，如果使用大电泳槽，可以重复使用的次数会更多。
4. TBE胶：已经用TBE电泳液配置好的琼脂糖凝胶，如果不含EB，SYBR Green等染料，则可以直接放入本产品溶液A配制的电泳液中按上述电泳条件电泳(因为溶液A含染料，故不需要额外再加染料)。如果用TBE电泳液配置好的琼脂糖凝胶含EB、SYBR Green或绿如蓝等核酸染料，则可以直接在本产品溶液B配制的电泳液中进行电泳。
5.溶液A配制的胶在TAE或TBE电泳液中电泳：已经用本产品溶液A配置好的琼脂糖凝胶，也可以直接在TBE或TAE电泳液中电泳，电压跟常规TAE或TBE电泳一样。


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·凝胶法内毒素半定量试剂盒
编号：BTN130504
英文名称：Endotoxin semi-quantitative kit(Gel Method)
规格：10×0.1mL
本试剂盒又称鲎试剂，为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品。鲎试剂中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在适宜的条件下(温度，pH值及无干扰物质)，细菌内毒素激活C因子，引起一系列酶促反应，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。

试剂盒组成：

成分	规格
鲎试剂,灵敏度0.06 EU/mL	0.1ml×10支
说明书	1份

储存条件：常温运输，阴凉处避光保存，有效期两年。

使用方法：

一、样品溶液的制备
样品的pH值应在6.0–8.0 之间，若超出此范围，需用无热原缓冲液或0.1N*氧化*、0.1N 盐*(代"酸")调节。若样品中可能存在鲎实验的干扰物质，见本说明书4.2“样品的干扰实验”。若样品中可能含有导致鲎试剂中G 因子旁路反应的(1,3)β－D－葡聚糖，需选用不会对(1,3)β－D－葡聚糖起反应的特异性鲎试剂。

二：细菌内毒素标准溶液及对照液的准备
2.1细菌内毒素标准溶液(本试剂盒不提供)
 取细菌内毒素工作标准品1支，按《细菌内毒素工作标准品使用说明书》配制2λ ，1λ ,0.5λ,及0.25λ的一系列内毒素标准溶液(λ为鲎试剂灵敏度标示值)。备用。
 注：鲎试剂灵敏度复核实验见本手册其他常用实验方案。
2.2 阴性对照液：即无内毒素水。
2.3 阳性对照液：即浓度为2λ的内毒素标准溶液。
2.4样品阳性对照液：即添加浓度为2λ内毒素标准的样品溶液。

三：内毒素检测
3.1 鲎试剂的溶解：按标示量(本试剂盒为0.1mL/支)加无内毒素水于鲎试剂中，轻轻振摇使鲎试剂完全溶解。注意不要引起气泡，溶解后的试剂应在10 min内使用(即配即用)。
3.2样品溶液的制备
 样品最大有效稀释倍数(MVD)的计算：
 MVD＝ C•L/λ
 λ：测试用鲎试剂灵敏度标示值(EU/mL)；L：样品细菌内毒素限值；C：样品浓度或样品复溶后所得样品浓度。当L 单位为EU/mL(溶液)时，C的单位为1mL/mL；当L单位为EU/mg或者EU/U时，C的单位为mg/mL或者U/mL。按照计算所得体积，加无内毒素水制备样品溶液。
3.3 各反应管中分别加入0.1mL 阴性对照液，阳性对照液，样品，或样品阳性对照液。
 封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入37℃的恒温器中温育60分钟±2分钟，温育期间避免振动。
3.4 结果判断
3.4.1 将试管从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转180°。若管内的内容物呈坚实凝胶，不变形，不从管壁滑脱为阳性，记录为(+)；不呈凝胶或虽生成凝胶但不能保持完整并从管壁滑脱为阴性，记录为(－)。
3.4.2 只有当阴性对照管结果均为阴性，阳性对照管、样品阳性对照管结果均为阳性，实验方有效，否则无效。若阴性对照管为阳性，提示鲎试剂、无内毒素水或实验器具可能受到污染。若阳性对照管为阴性，提示鲎试剂活性减失、内毒素标准溶液效价降低，鲎试剂的灵敏度或内毒素的效价标示不准确，或内毒素标准溶液的稀释不正确。若样品阳性对照管为阴性，提示反应体系内有干扰因素存在。

四：其他常用实验方案
4.1 鲎试剂灵敏度复核实验
 当使用新批号的鲎试剂或实验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应按《中华人民共和国药典》2010 版中《细菌内毒素检查法》的“鲎试剂灵敏度复核实验”进行实验。按照下式复核灵敏度：λ＝lg-1(ΣX/4)，当0. 5λ≤λ ≤2.0λ时，鲎试剂灵敏度复核合格，检测时仍以标示灵敏度λ为准。
4.2样品的干扰实验
 当鲎试剂、样品的来源、配方、生产工艺或实验环境中发生了任何有可能影响实验结果的变化时，须按《中华人民共和国药典》2010 版中《细菌内毒素检查法》的“干扰实验”进行干扰实验。以样品代替无内毒素水为溶剂，配制2λ，λ，0.5λ，及0.25λ的内毒素系列标准溶液进行灵敏度复核。若灵敏度复核值在0.5λ 到2λ之间(包含0.5 λ及2 λ)，则认为在此实验条件下样品无干扰。若灵敏度复核值在0.5λ 到2λ之外，则认为在此实验条件下样品有干扰，需对样品进行稀释(稀释倍数不得超过最大有效稀释倍数MVD)或进行其它处理消除干扰。
4.3凝胶限度实验
 凝胶限度实验用于判断样品的内毒素含量是否超过药典所规定的细菌内毒素限值。按《中华人民共和国药典》2010 版中《细菌内毒素检查法》的“凝胶限度实验”进行实验。在实验有效的情况下，如果样品管的两个平行管均为阴性，判定样品的内毒素含量小于药典规定限值。如果样品管的两个平行管均为阳性，判定样品的内毒素含量不符合药典规定。如果样品管的两个平行管一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试。复试时，样品需做4个平行管，若所有平行管均为阴性，判定样品符合规定，否则判定样品不符合规定。
4.4凝胶半定量实验
 本方法系通过确定反应终点浓度来量化样品中内毒素含量。详见《中华人民共和国药典》2010 版中《细菌内毒素检查法》的“凝胶半定量实验”。

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