DB3.1化学感受态细胞

特别提示：包括DB3.1化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：DB3.1化学感受态细胞
英文名称：DB3.1 Chemically Competent Cell
产品货号：MQ0010
产品规格：10×100μl/50×100μl

DB3.1大肠杆菌菌株基因组中含有gyrA462基因，赋予其对ccdB毒性基因的抗性，特别适用于构建或扩繁含有ccdB基因的质粒载体(例GATEWAY System vector)，此菌株具有链霉素抗性。
DB3.1感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19检测转化效率>108 cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃
基因型：
F-gyrA462 endA1 glnV44(sr1-recA)mcrBmrrhsdS20(rB-,mB-)ara14galK2lacY1proA2rpsL20(Smr)xyl5 Δleu mtl1
操作说明：
1.DB3.1感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中)，加入目的DNA并用指尖轻轻拨打管底混匀(避免用枪吸打)，冰上静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项：
1.感受态细胞最好在冰上融化。
2.混入目的DNA时应轻柔操作。

除了DB3.1化学感受态细胞,，我公司还供应以下相关产品：



名称：平末端DNA加A试剂盒
货号：BTN60105
规格：50次
本产品利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有dATP 存在的情况下，在平末端的DNA片段加上一个dA 尾巴，使平末端片段也能被T载体克隆。其流程图如下：


产品特点：
1. 简单，2×Tailing Buffer中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNA polymerase等酶合成的DNA片段。
3.产物可以直接用于与T载体的连接。

试剂盒组成：

成分	规格
Taq DNA polymerase(5U/μL)	50μl
2×Tailing Buffer	1.25ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：反应前纯化处理：
用Vent，Deep Vent，Pfu，Pwo等具有3 到5外切活性的DNA聚合酶扩增得到的DNA片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程(如酚/氯*抽提或Proteinase K处理)，否则它们将在加A反应时，切除掉加上的A尾巴，干扰反应。可以采取胶回收和酚/氯*抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或TE中，终浓度以0.1μg/μL为宜。
二：加A反应
在干净的0.5mL或1.5mL离心管中，分别加入下列成分：

回收的DNA片段	0.2-2ug
2×dA Tailing Buffer	25μL
Taq DNA polymerase(5U/μL)	1μL
补水到	50μL
72℃保温2小时

三：反应后处理
加A反应后，Taq DNA pol