T4 RNA连接酶2(截短型)哪里卖

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名称：T4 RNA连接酶2(截短型)哪里卖
编号：BTN130856
品牌：百奥莱博
规格：2000U
英文名：T4 RNA Ligase 2(truncated)
T4 RNA连接酶2(截短型)，又称T4 RNL2截短型，可特异性地将DNA或RNA的预腺苷酰化5´末端连接到RNA 3´末端。该酶连接时不需要ATP，但需要预腺苷酰化底物。该酶的表达来自E.coli质粒，该质粒编码T4 RNA连接酶2基因的前249个*基酸。与全长的T4 RNA连接酶2不同，T4 RNL2截短型不能将底物的5´末端腺苷酰化，因此无法将RNA或DNA的5´磷酸末端连接到RNA 3´端。该酶可用于microRNA克隆中接头连接的优化，因为此酶只能利用腺苷酰化的引物，因此，可以降低连接背景。其结构式如下图：


产品用途：
1．将5´预腺苷化的DNA或RNA连接到任何 RNA 3´末端；
2．将单链腺苷化引物连接至小RNA上，用于cDNA克隆文库构建；
3．将单链腺苷化引物连接至RNA上，用于链特异cDNA文库构建；
4．无单链和双链DNA核酸外切酶、核酸内切酶、RNase以及磷酸酶的污染。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

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·微量核酸沉淀剂
编号：BTN50903
英文名称：NA Precipitation Solution
规格：10mL
本产品是在经典的盐/醇核酸沉淀法基础上经过优化的即用型试剂，在沉淀浓缩核酸时替代常用的盐/醇(如乙酸*/乙醇)，在回收微量核酸时效率比经典的乙酸*/乙醇高30%以上。

产品特点：
1．高效，使用多种优化的成分替代经典的盐/醇(如乙酸*/乙醇)混合物，尤其适合于回收微量核酸(在1.5mL离心管中回收10ng以下的核酸效率比乙酸*/乙醇高30%以上)。
2．操作简单，按2：1的比例将本产品与待回收溶液混合即可，不需要任何额外处理步骤。
3．适用范围广，任何能用盐/醇(包括乙醇和异丙醇)沉淀回收的实验均可使用本产品。
4．不含DNase和RNase，不影响核酸的A260/280光吸收，不影响后续的反应过程(PCR和酶切等)。

储存条件：室温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1. 按2:1的比例将本产品与核酸溶液(PCR反应液、胶回收液等)混合。本产品取用前需要摇匀。
2.室温15000g离心10分钟(如果核酸含量在2 ng以下，建议离心30分钟)。
3. 弃上清后加75%乙醇1mL，振荡混匀。
4. 15000离心3～5分钟，弃上清。
5. 再短暂离心后小心吸弃上清，沉淀即为回收的核酸沉淀，可溶于TE或水中。

·B载体
编号：BTN51104
英文名称：Magic Vector B
规格：2μg
本产品是专门用于高效快速克隆平末端DNA片段的专用载体,它是由Sma I酶切ClionG载体后经过纯化得到的即用型线性载体。跟ClionG载体一样，本产品带有自杀基因，Sma I位点位于该基因之中，只有当外源平末端DNA 插入片段插入Sma I位点,连接后的DNA转化的细胞才能生长,所以最后得到的转化子几乎都是含有平末端DNA 插入片段的重组子。

产品特点：
1. 即用性，可以直接用于连接反应，免去繁琐的酶切，电泳检测，纯化，去磷酸化，再纯化等步骤。
2. 具有Clion-G载体的所有优点，包括零背景,适用于所有E.Coli菌株,多拷贝的colEI型复制起始位点。
3.高效率，由于自杀基因的使用有效地减除了载体自身环化对平末端DNA 克隆的影响，自身环化得到的转化子在有选择液存在时只占总转化子的1%-5%。
4. 应用广泛，可用于克隆酶切产生的平末端DNA，Pfu酶扩增的PCR片段，cDNA片段，3´和5´RACE片段，Taq酶扩增的PCR片段(部分为平末端)。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

自备试剂：
1.外源DNA片段。如果含又DNA片段的反应液中不含其他载体DNA(如酶切反应液，PCR反应液)，可以不需要凝胶回收,灭活酶后即可直接将反应液用于连接反应。PCR引物5´端一般为OH基团，最好在PCR后用T4 激酶磷酸化，否则连接效率极低。
2.感受态宿主菌。DH5α，DH10B或HB101等常用E.coli菌株。
3.连接反应试剂。请购买现成试剂盒。
4. 选择培养基。在倒LB 平板之前随产品赠送的选择液和Amp(如果附赠的选择液含Amp,则不必须额外加Amp)按比例加入到LB 之中,使选择液终浓度为1×，Amp 终浓度为50μg/mL(如果附赠的选择液含Amp,稀释到1X后Amp的终浓度即为50μg/mL),混匀后倒盘。

使用方法：

1.连接反应
a. 取新的经过灭菌处理的0.5mL Eppendorf 管,编号。
b. 将100 ng载体DNA转移到无菌离心管中，加两倍摩尔量的外源DNA片段，折合成重量(ng)=(外源DNA片段bp 数X 100 ng×2)/5330bp(载体DNA 长度)
c. 加蒸馏水至体积为8μl，于45℃保温5分钟，使重新退火的粘端解链。将混和物冷却至0℃。平末端DNA片段的克隆可以省去45℃保温5分钟这一步。
d. 加入10×T4 DNA ligase buffer 1μl，T4 DNA ligase 0.5μl，混匀后用微量离心机将液体全部甩到管底，于16℃保温1-24小时。
e. 同时做只有外源DNA片段没有质粒载体的组对照反应。没有必要做只有质粒载体而无外源DNA的对照组，因为自身环化的载体不能生长，能够生长的转化子基本上是两个载体分子相互连接形成的新载体。但在有两倍于外源DNA片段存在的情况下,两个载体分子连接的机率很小。
2. E.coli感受态细胞的转化
a. 各取每组连接反应液2μl按标准方法转化E. coli感受态细胞。
b. 每组连接反应转化原液取100μl用无菌玻棒均匀涂布于筛选培养基上，37℃下培养半小时以上,直至液体被完全吸收。

MCS位点：

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