T4 DNA连接酶厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应T4 DNA连接酶厂家，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：T4 DNA连接酶厂家
编号：BTN60609
规格：200U
产地：国产|进口
英文名：T4 DNA Ligase
T4 DNA连接酶从表达T4 gene 30的E.coli细胞中分离纯化而得，由一个分子量为68KDa的单亚基组成。

产品用途：
1．催化连接反应，即dsDNA，dsRNA和DNA/RNA分子的粘性末端和平末端5´-P末端和3´-OH末端之间形成磷酸二酯键。
2．修复dsDNA反应中的切口(Nick)。
3．催化pyrophosphate和ATP之间的磷酸交换反应(Weiss酶单位定义原理)
4．需要ATP、Mg2+和DTT，最佳pH为pH7.5-8.0。
5．NaCl浓度在200mM以上时有抑制作用。
6．1%～10%PEG和150～200mM NaCl能促进连接反应(尤其是平末端DNA)效率。

产品组成：

 

成分	规格
T4 DNA连接酶(5U/μL)	40μl
10×T4连接酶Buffer	300μl
说明书	1份

注意：本公司本产品的单位按Weiss 单位定义，200个Weiss单位相当于25000个连接单位，1000个Weiss 单位相当于125000个连接单位。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：(DNA片段和载体DNA的连接)
1．在微量离心管中制备下列连接反应液

10×T4 DNA Ligase Buffer	2.5μl
自备插入DNA片段	约0.3pmol
自备载体DNA	约0.03pmol
T4 DNA Ligase	1μL
dH2O	up to 25μL

2．16℃过夜反应
3．加入2.5μL的3M醋酸*(PH5.2)
4．加入62.5μL的预冷无水乙醇，-20℃放置30-60分钟
5．离心回收沉淀，用70%的预冷无水乙醇清洗沉淀，真空干燥
6．25～50μL TE溶解，10-20μL转化至100μL感受态细胞中。

关于T4 DNA连接酶厂家的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·M13噬菌体单链基因组DNA提取试剂盒
编号：BTN130952
英文名称：M13 phage single chain genomic DNA extraction kit
规格：50次

·核酸内切酶IV
编号：BTN130638
英文名称：Endonuclease IV
规格：1000U
核酸内切酶IV能够作用于DNA分子上的几种氧化性损伤。该酶是一个脱嘌呤/脱嘧啶(AP)核酸内切酶，水解DNA上的完整AP位点，占E.coli AP酶总活性的10%。切割AP位点5´端的第一个磷酸二酯键，产生3´羟基和5´脱氧核糖磷酸末端。该酶也具有3´二酯酶活性，能从DNA的3´末端释放磷酸甘油醛、完整的脱氧核糖 5´-磷酸和磷酸。其反应原理图如下：


产品用途：
➤ 单细胞凝胶电泳(彗星试验)，彗星试验的推荐稀释倍数1:10⁴～1:10⁵；
➤ 碱洗脱；
➤ 碱解旋。

产品组成：

成分	规格
Endonuclease IV	100μL
10×Buffer	1ml
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

热失活：85℃，20分钟。

活性定义：1单位指在 10μl缓冲液体系中，37℃条件下，1小时内能够切割 1pmol含一个AP位点的34bp寡核苷酸双链所需要的酶量。

AP位点的创建方法如下：37℃条件下，用1单位尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)处理 10pmol含单一尿嘧啶碱基的34bp寡核苷酸双链2分钟。


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·SuperTOPO-Amp通用克隆试剂盒
编号：BTN160685-25A
英文名称：SuperTOPO Cloning Kit
规格：25次

·长效期SDS-PAGE配胶液
编号：BTN100909
英文名称：Stable SDS-PAGE Gel Buffer
规格：200mL
本产品专门用于配制长效SDS-PAGE胶，本配胶液pH值偏酸性，使PAGE胶比常规SDS-PAGE更加稳定，便于配预制胶，增加实验的可重复性。

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。

·DMSO，PCR级
编号：BTN80205
英文名称：DMSO，PCR Grade
规格：1.5mL
大量实验显示5-10%的DMSO能够促进PCR反应，尤其是高GC模板的PCR反应，本产品就是专门用于PCR或RT-PCR的高纯度DMSO。

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

·包涵体微量纯化试剂盒
编号：BTN90508
英文名称：Inclusion Body Miniprep Kit
规格：20次
包涵体是指超表达的蛋白在细胞胞浆内(如果超表达的是胞浆蛋白)或膜间内(如果超表达的是分泌蛋白)凝集形成的无活性的固体颗粒。包涵体形成的主要原因是在重组蛋白的表达过程中缺乏某些蛋白折叠辅助因子，或环境不适导致无法形成正确的蛋白质次级键。由于包涵体主要由超表达的重组蛋白质组成，因此分离纯化包涵体是分离纯化具有活性的重组蛋白的第一步。本产品就是用于快速的提取高质量的包涵体。

产品特点：
1．操作简单快速，整个过程只要三十分钟左右。
2．微量纯化，可以在1.5mL离心管中完成。
3．能有效去除包涵体中的细胞壁和细胞膜等非重组蛋白成份，使重组蛋白所占比重达到60%以上。
4．A型用于超声法裂菌，B型用于酶法裂菌。
5．可以选择盐*(代"酸")胍和尿素两种蛋白溶解方式。
6．得到的包涵体溶解液可以用于重折叠、SDS-PAGE或其他纯化处理。

试剂盒组成：

成分	20T(A型)	20T(B型)
溶液A	5ml	5ml
溶液B	50ml	50ml
包涵体溶解液	5ml	5ml
尿素	5g	5g
溶菌酶	无	600mg
Benzonase(1U/μL)	无	20μl

储存条件：常温运输和保存(B型的溶菌酶和Benzonase 需要低温运输，-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：

一、超声法裂菌(只适用于A型)
1．在蛋白诱导期结束时，转移1.5mL菌液到一个干净的塑料离心管中。最好同时处理不加诱导物的细菌做对照样。
2．12000rpm室温离心1分钟，小心弃上清。沉淀(约10mg)放冰上待用或放-80℃保存。
3．加入250μL 冰浴的溶液A，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则不容易沉淀包涵体。
4．直接进入第14步。

二、酶法裂菌(只适用于B型)
5．将600mg 溶菌酶全部加入到5mL溶液A中溶解，然后根据每次的需要量(一次微量提取需要250μl)分成小份放-20℃待用。每次只取用一管。
6．包涵体中的重组蛋白一般比溶解状态中的蛋白质更能够抵抗微量内源性蛋白水解酶的降解，如果实验发现得到的重组蛋白确有降解，则需要在溶液A中新鲜加入自备的蛋白酶抑制剂混合物(BTN80808)。
7．在蛋白诱导期结束时，转移1.5mL菌液到一个干净的塑料离心管中。最好同时处理不加诱导物的细菌做对照样。
8．12000rpm室温离心1分钟，小心弃上清。
9．加入250μL含溶菌酶的溶液A重悬细胞。
10．室温放置10-20分钟裂解细菌，其间可以用手轻弹离心管混匀。
11．-20℃冷冻至凝固，一定要凝固到细菌溶液变成固体为止。
12．室温水浴解冻。如果裂解充分，细菌释放出的DNA 将使裂解物十分粘稠。如果不粘稠，说明裂解不充分，需要重复冻融步，否则完整细菌将和包涵体一起沉淀，影响包涵体的纯度。最好在显微镜下检查细菌是否充分裂解。
13．加入1μL Benzonase(1U/μL)，脱色摇床上摇晃直到裂解液不再粘稠，一般需要30分钟左右，否则还需要延长保温时间。
14．12000rpm 4℃离心5分钟，留存上清作为SDS-PAGE 对照样品一。
15．将沉淀(包涵体)悬浮在1mL的溶液B中，轻柔混匀后室温放置5分钟。
16．12000rpm 4℃离心10分钟，留存上清作包涵体洗涤的对照样品二。
17．将沉淀(包涵体)悬浮在1mL的溶液B中，轻柔混匀后室温放置5分钟。
18．12000rpm 4℃离心10分钟，留存上清作包涵体洗涤的对照样品三。本产品提供的溶液B足够两次洗涤(两次洗涤一般可得到足够纯净的包涵体)。如果需要更多洗涤，用户需要单独购买包涵体洗涤液(溶液B)
19．沉淀为纯化的包涵体，可以长期放置在冰箱待用或直接用于包涵体溶解。

三、包涵体的溶解：
20.在包涵体沉淀中加入250μL包涵体溶解液，用枪头充分吹打后漩涡震荡室温放置1小时使蛋白质充分溶解。注意：包涵体溶解液含6M 盐*(代"酸")胍，溶解蛋白能力强于含8M尿素的溶解液，但SDS-PAGE时不能直接上样。客户也可以用本试剂盒提供的尿素干粉自配8-10 M 尿素的溶液(尿素溶液不稳定，所以不能长期放置)溶解包涵体，得到的溶解液可以直接用于SDS-PAGE或后续纯化。但其溶解能力弱于盐*(代"酸")胍。
21. 20000g 4℃离心20分钟，小心收集上清，保留不溶性沉淀(未能溶解的包涵体)。SDS-PAGE 检查是否大部分重组蛋白都在上清中。如果没有，说明包涵体没有完全溶解，需要用适当增加包涵体溶解液的用量。
22. 所得蛋白质溶液可以用于复性等试验。用户可本公司购买包涵体复性套装。


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·柱式真菌DNA大量提取试剂盒(玻璃珠法)
编号：BTN80926
英文名称：Fungus DNA Column large-scale extraction kit(Glass bead method)
规格：4次
本试剂盒在柱式真菌DNA提取试剂盒(BTN70901)基础上改良而得大提升级产品，主要用于大量快速从各种真菌材料中提取基因组DNA。

产品特点：
1.处理量大，一次可以处理1-3g 各种真菌组织。
2. 纯度高，OD260/280一般在1.8以上。不含污染和抑制剂，得到的DNA可以不经稀释直接用于酶切、PCR、real-timePCR、multiplex PCR、RAPD、RELP、AFLP、Southern Blotting，microsatellite analysis等各种后续分子生物学实验。
3. 采用玻璃珠法破碎细胞，属于物理方法，远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好，也不容易带入外援真菌DNA。
4.产率一般在10-100μg/g真菌样品。离心吸附柱最大吸附量为800μg。
5. DNA片段长度一般在20-40kb左右。
6.适用范围广，适用于度大多数真菌材料，包括酵母(S.cerevisiae、S.pomb、Pichia pastoris)等。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	40ml
溶液B	40ml
溶液C	100ml
大提离心吸附柱	4套
通用洗柱液	200ml
DNA洗脱液2.0	5ml
酸洗玻璃珠，400μm	40g
说明书	1份

储存条件：常温运输,4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 对菌液：取60-100mL 过夜培养的真菌菌液(OD600一般在1以上)到干净的塑料离心管中，12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
2. 对菌落：用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落(约1 g)，转移到装有20mL 无菌水的干净的塑料离心管中，洗涤下接种环上的菌体。12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
3. 对孢子材料，一般取1-3g左右，直接加入到离心管中，在材料中加入无菌水20mL，振荡半分钟后12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
4.沉淀中加入10mL溶液A和10 克的玻璃珠，涡旋震荡10分钟，可以延长震荡时间。
5. 加入10mL的溶液B，涡旋震荡5分钟，12000rpm离心2分钟，将上清液全部转移到一个50mL的干净的塑料离心管中。
6.在上清中加入3倍体积的溶液C，颠倒数次混匀后，分三次上离心吸附柱，每次上柱后均先室温放置2分钟，然后12000rpm离心1分钟，倒掉穿透液，再第二次上柱，重复上面的操作，直到挂柱步骤完成。
7. 将20mL 通用洗柱液加入离心柱，12000rpm离心1分钟，弃穿透液。
8. 重复上步操作一次。
9. 12000rpm 空甩1分钟去除残留液体。
10. 将离心柱放置在一新的50mL塑料离心管中，加入500μL DNA 洗脱液2.0。
11.室温放置5分钟后12000rpm离心1分钟，管底即为真菌DNA样品，吸取离心管中的DNA溶液重新滴加在吸附柱上，离心洗脱以收集更多的DNA。
12. 所得DNA可立即使用，也可长期保存在－20℃。
13. 注：如离心机转速不能达到12000rpm，可以用最大转速离心10-15min 代替12000rpm离心1-2min。

北京百莱博科技有限公司专业生产工具酶产品，欢迎来电咨询选购T4 DNA连接酶厂家。