WE0207型磁珠法唾液DNA提取试剂盒品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括WE0207型磁珠法唾液DNA提取试剂盒品牌在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：WE0207型磁珠法唾液DNA提取试剂盒品牌
产地：国产|进口
规格：96次
品牌：百奥莱博
编号：WE0207
  本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的唾液DNA提取方法，适用于从在保护液 中保存的唾液中提取DNA。在高盐存在时，DNA结合于硅基包被的Magbeads表面。 漂洗后，高纯度的DNA被洗脱于Buffer EB或去离子水中。DNA的得率与样品中细胞数 量，储存条件、时间有很大关系。纯化得到的DNA纯度好(A260/280在1.7-1.9之间， A260/230大于1.5)，完整度高(大于15 kb)，可用于二代测序、芯片检测、PCR检测等下游实验。

试剂盒组成：

 

组份	96次
Buffer ML	24ml
Buffer GW1(浓缩液)	80ml
Buffer GW2(浓缩液)	50ml
Buffer MW3	96ml
Buffer EB	30ml
蛋白酶K	2×25mg
蛋白酶K 储存液	2×1.25ml
Magbeads PN	1ml

自备仪器及试剂：

1、手动单管操提取：
1)恒温混匀仪
2)2/15ml磁力架
3)异丙醇、无水乙醇

2、手动96孔深孔板提取：
1)恒温混匀仪
2)废液抽吸系统
3)手动连续分液器
4)电动连续分液器
5)手动连续分液器分液管(25ml)
6)96孔深孔板磁力架
7)异丙醇、无水乙醇

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入指定用量(1.25ml/25mg)的蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配置好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、Magbeads严禁冰冻、高速离心。冰冻和高速离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇并做好标记。
4、如Buffer ML中出现沉淀，请在56℃水浴锅中重新溶解，摇匀后即可使用。
5、实验过程中，磁珠在溶液中的充分混匀对提取的得率与纯度都有很大的影响。实验过程中务必使磁珠与溶液充分混匀。不同厂家生产的恒温混匀仪效果有一定差异，实验过程中请注意观察磁珠状态。如出现磁珠贴壁等未充分混匀的现象，请用移液器吹吸混匀或调整震荡频率。

操作步骤：

一、手动单管操作：
1、转移400μl唾液与保护剂的混合溶液至1.5ml离心管中，然后16000×g离心1分钟。
2、将离心管从离心机中取出，转移300μl上清液至新的1.5ml离心管中，之后向新的离心管加入20μl 蛋白酶K 和200μl Buffer ML。涡旋震荡混匀后，将新离心管放入56℃水浴锅中孵育1小时。此时可弃去旧离心管。
3、将离心管从水浴锅中取出，室温放置5分钟后短暂离心使溶液回流于离心管底部。向离心管中加入310μl充分混匀的异丙醇(300μl)与Magbeads(10μl)混合物，涡旋震荡5秒钟后立即放于25℃、1600 rpm的恒温混合仪上震荡混匀5分钟。
4、将离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
5、将离心管从磁力架上取下，加入750μl Buffer GW1(加入前请检查是否已加入无水乙醇)后涡旋点震1分钟或涡旋点震5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混合仪上震荡混匀2分钟(震荡过程确保Magbeads处于悬浮混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后充分弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
6、重复步骤5。
7、将离心管从磁力架上取下，加入750μl Buffer GW2(加入前请检查是否已加入无水乙醇)后涡旋点震1分钟或涡旋点震5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混合仪上震荡混匀2分钟(震荡过程确保Magbeads处于悬浮混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后充分弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
8、重复步骤7。
9、选择步骤：
1)保持离心管固定于磁力架上，用移液器去除离心管管底和管盖上的溶液，之后室温放置5-10分钟使乙醇充分挥发干净。如离心管侧壁上有液珠，可向离心管中加入750μl无水乙醇。盖盖后颠倒离心管，之后充分弃去溶液。
2)保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入750μl Buffer MW3，待悬起的磁珠重新吸附于磁力架上后立即充分弃去溶液。
10、将离心管从磁力架上取下，加入50-200μl Buffer EB。涡旋震荡使磁珠充分悬浮于洗脱液中后将其放于56℃、1600 rpm的恒温混合仪上震荡洗脱10分钟，或将离心管在56℃水浴锅中孵育10分钟，期间每隔3分钟涡旋震荡10秒钟。
11、将离心管放于磁力架上静置2分钟，待Magbeads充分吸附于离心管侧壁后用移液器将溶液转移至新的离心管中-20℃保存备用。

二、手动96孔板操作：
1、向2.0ml的96孔深孔板(简称“深孔板”)中加入500μl唾液与保护剂的混合溶液，然后在水平离心机上2000×g离心5分钟。
2、将深孔板从离心机中取出，取300μl上清液至新的深孔板中，之后向新的深孔板中加入20μl 蛋白酶K 和200μl Buffer ML。用硅胶盖将新的深孔板封闭后将其放于恒温混合仪上1500 rpm震荡2分钟，之后将新的深孔板放于56℃水浴锅中孵育1小时。此时可将旧的深孔板弃去。
3、将深孔板从水浴锅中取出，固定于25℃、1500 rpm的恒温混匀仪上震荡5分钟。
4、将深孔板从恒温混匀仪取下，短暂离心后打开硅胶盖。向深孔板中加入310μl充分混匀的异丙醇(300μl)与Magbeads(10μl)混合物，盖上硅胶盖后立即将深孔板固定于25℃、1500 rpm恒温混匀仪上震荡5分钟。
5、将深孔板从恒温混匀仪上取下放于96孔板磁力架上静置2分钟，之后用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
6、用手动连续分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW1(加入前检查是否已加入无水乙醇)，之后将深孔板固定于25℃、1500 rpm恒温混匀仪上震荡2分钟。
7、将深孔板从恒温混匀仪上取下放于96孔板磁力架上静置2分钟，之后用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
8、重复步骤6-7。
9、用手动连续分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW2(加入前检查是否已加入无水乙醇)，之后将深孔板固定于25℃、1500 rpm恒温混匀仪上震荡2分钟。
10、将深孔板从恒温混匀仪上取下放于96孔板磁力架上静置2分钟，之后用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
11、重复步骤9-10。
12、将深孔板从恒温混匀仪上取下放于96孔板磁力架上静置2分钟，之后用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
13、保持深孔板固定于96孔板磁力架上，将深孔板倒置于干净的吸水纸上放置2分钟。之后将深孔板放于100℃(由于深孔板未与加热模块直接接触，管底实际温度在50-60℃之间)的恒温混匀仪上静置5分钟。
14、用电动连续分液器或8通道移液器向深孔板中加入100-200μl Buffer EB，之后将深孔板放于100℃、1500 rpm恒温混匀仪上震荡10分钟。
15、将深孔板从恒温混匀仪上取下放于96孔板磁力架上静置2分钟，用8通道移液器将溶液转移至96孔板板中盖盖后-20℃保存备用。

储存条件：室温(15～30℃)

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·蛋白印迹膜再生液
编号：WE0304
英文名称：Stripping Buffer
规格：100ml|500ml
  本产品采用温和洗涤配方，可在不影响目的蛋白的情况下，去除结合在印迹膜上的一抗和二抗，使同一张膜可进行多次抗体检测，无需反复电泳和转膜，节省样品和时间，适用于使用NC或PVDF膜进行Western Blot检测时条件的优化或同一样品不同蛋白的检测。

注意事项：建议先检测表达量较低的目的蛋白，用再生液处理后检测表达量高的蛋白，如内参蛋白等。

操作步骤：
1、将曝光后的膜取出，加入适量的Stripping Buffer(蛋白印迹膜再生液)，再生液充分覆盖膜表面，8.5 cm×5.5 cm膜加入15ml左右蛋白印迹膜再生液，室温振摇孵育15分钟左右(孵育时间应根据不同的目的蛋白来调整：比如内参抗体等表达量较高的蛋白，使用蛋白印迹膜再生液时可以延长孵育时间至1小时或者在37℃孵育30分钟)。
2、弃去蛋白印迹膜再生液，用15ml缓冲液(PBST或TBST)洗膜3次，每次5 分钟，室温振摇。
3、为了检测酶标二抗洗脱是否完全，此时可以用显色方法来确定二抗是否洗脱掉。
4、待检测完毕，确认膜上无残留的酶活性，再生后的膜通过加入15ml的封闭液进行封闭，室温30分钟或者4℃封闭过夜。
5、重新加入待测一抗，进行下一轮的WB实验。

储存条件：室温


WE0207型磁珠法唾液DNA提取试剂盒品牌关键词：磁珠法唾液DNA提取试剂盒,WE0207,Magbead Saliva DNA Extraction Kit


·一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒(高含量ROX校正染料)
编号：WE0150
英文名称：BaldStar TaqMan One Step RT-qPCR Kit(High ROX)
规格：100次
  本试剂盒是采用探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)进行一步法Real-Time RT-qPCR的专用试剂盒。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应时，逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。本产品的检测灵敏度高，荧光信号强，信噪比高，非常适合于RNA病毒等微量RNA的检测。其所包含的特殊缓冲系统能使逆转录酶与DNA聚合酶同时发挥最大功效，提高反应效率。使用本产品可以得到更宽广的线性范围，对目的基因定量更准确，重复性好，可信度高。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器:(WE0148)
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器：(WE0149)
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器：(WE0150)
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

试剂盒组成：

组份	WE0148-100次	WE0149-100次	WE0150-100次
2×BaldStar TaqMan One Step Buffer	1.4ml	1.4ml	1.4ml
BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix	100μl	100μl	100μl
50×Low ROX	-	50μl	-
50×High ROX	-	-	50μl
RNase-Free Water	1.5ml	1.5ml	1.5ml

注意事项：
1、本试剂盒中试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品以RNA为模板进行一步法RT-PCR实验，在操作过程中应避免RNase污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，实验相关耗材应用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并高压灭菌30分钟后使用。
3、本试剂盒中的各试剂应尽量避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。
4、本试剂盒必须使用特异性引物，引物的选择可根据具体实验来选择，引物设计的好坏直接影响到RT-qPCR反应的结果，设计引物时需考虑GC含量，引物长度，引物位置，PCR产物的二级结构等因素，建议采用专业的引物设计软件进行设计。
5、本试剂盒推荐使用特异性探针，建议采用专业的设计软件进行设计。


使用方法：
以下举例为常规的反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小的不同进行相应的改进和优化。(反应液的配置请在冰上进行)

1、将RNA模板、引物、2×BaldStar TaqMan One Step Buffer、BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、PCR反应体系：
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
2×BaldStar TaqMan One Step Buffer	12.5μl	1×
Forward Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Probe，10μM	0.5μl	0.2μM
BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix	1.0μl
RNA Template	Xμl	10 pg～100ng
50×Low ROX or High ROX(可选)	0.5μl	1×
RNase-Free Water	up to 25μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常RNA模板的量以10 pg – 100ng为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX。

3、混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。
4、RT-PCR反应条件：
 

步骤	温度	时间	循环数
逆转录	45℃	10 min
PCR预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	30-40个循环
退火/延伸	60℃	45 s

注意：
1)1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、5-10 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。

储存条件：-20℃，避免反复冻融


WE0207型磁珠法唾液DNA提取试剂盒品牌关键词：磁珠法唾液DNA提取试剂盒,WE0207,Magbead Saliva DNA Extraction Kit

ARB13252 小鼠游离三碘甲状腺原*酸(Free-T3)含量分析 Mouse free tri-iodothyronine indes,free-t3 ELISA KIT
SOC固体培养基粉剂   1L
PY02-105  乳糖胆盐琼脂  250克  
F030825 BIOTIN标记兔抗豚鼠IgG抗体 Rabbit Anti-Guinea Pig IgG*BIOTIN
CYB162032 羊抗人C3(抗血清) 0.5ml
PY04-050  磺胺嘧啶*  12mg/支×10支  每支添加于100ml亚硫*(代"酸")盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂基础(SPS)培养基中，用于产气荚膜梭菌的平板计数
ARB10617 人血纤蛋白原(Fbg)ELISA代测服务 Human fibrinogen,fbg ELISA KIT
67-68-5 二甲基亚砜 DMSO
BTN130624 9°N DNA连接酶 9°N DNA Ligase
丙*(代"酮")酸脱羧酶 Sodium thioglycolate 9024-43-5
BL0798 人纤维蛋白原抗原(干粉)
组织线粒体/胞浆蛋白提取试剂盒   50T|100T
BOC-L-酪*酸 Erythromycin 3978-80-1
ARB11911 人癌蛋白诱导转录物3(OIT3)酶标法分析 Human oncoprotein induced transcript 3,oit3 ELISA KIT
F030838 BIOTIN标记山羊人IgM抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG FC*BIOTIN

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