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正常驴IgG
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Ns05-02
Normal Donkey IgG
-20
佰泰科
3年
10000
1mg
本品来自健康驴血清,经过纯化实验得到驴IgG 。与其他抗原抗体无交叉反应,经无菌过滤分装,长期储存:-20℃ ,短期储存:2-8℃。1 . 将抗体结合到蛋白A或蛋白G微珠上。对于一般用途的层析柱,每毫升湿的微珠大约可以结合2mg单克隆抗体或亲和纯化的多克隆抗体。将抗体和蛋白A或蛋白G微珠混合制成稀薄的匀浆,在总量为10ml的溶液中加入大约lml微珠,室温孵育1h,轻轻摇动混匀。 2. 用10倍体积的0.2mol/L硼酸钠(pH9.0)洗涤微珠2次,每次以3000g离心2rain或10 000g离心30s。 3. 用10倍体积的0.2mol/L硼酸钠(pH9.0)重悬微珠,留取相当于10t~l湿微珠的样品。加入足量的二甲基庚二酸酯固体至微珠匀浆中,使终浓度为20mmol/L。4. 室温孵育30min,并轻轻混匀。留取相当于10t~l偶联微珠的样品。 5. 用0.2mol/L乙醇胺pH8.0.洗涤微珠1次以终止反应。然后重悬于0.2mol/L乙醇胺,室温孵育2h,轻轻混匀。微珠用PBS洗涤后,重悬于PBS,加入硫柳汞保存。 6. 将偶联前和偶联后的微珠样品加入Laemmli样品缓冲液中煮沸后,检查偶联效果。分别取相当于1ul和9ul 2份样品在10%SDS—聚丙烯酰胺凝胶中电泳,并用考马斯亮蓝染色,偶联效果良好时,在偶联前的微珠样品中显示一条55kDa的重链带,而偶联后的样品无此区带。 7. 将抗体包被的微珠转入合适的层析柱中,用PBS冲洗容器收集残留的微珠。如果可能,仅使用结合制品中全部抗原所需的抗体微珠基质。 8. 用20倍柱床体积与制备抗原相同的缓冲液洗柱。 9. 将抗原液加到柱上,按每毫升柱体积大约lml/h的速度使抗原溶液流过层析柱,可以用一台蠕动泵控制。 10. 用20倍柱床体积的结合缓冲液(PBS)洗柱。 11. 用20倍柱床体积的预洗脱缓冲液洗柱,建议使用预洗脱缓冲液。 12. 采用分段洗脱法,连续以0.5倍柱床体积的洗脱缓冲液通过层析柱,分管收集每一组分。如果用过高或过低pH值的缓冲液洗脱,收集管内需加入0.1倍柱床体积的缓冲液。 13. 检测每管的抗原含量,将浓度高的各管合并。根据抗原的用途,需对获得的蛋白洗脱液透析以改变缓冲液。 14. 用20倍柱床体积的起始缓冲液流经基质,使层析柱再生。加入0.01%硫柳汞可长期保存(4℃)。
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