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- DNA pull down实验
- 2025年07月13日
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- 服务名称：
蛋白-核酸/RNA-DNA互作研究
- 提供商：
艾柏森（北京）生物科技有限公司
原理及流程如下：
1. 链亲和素磁珠能够与生物素标记DNA/蛋白复合物结合。
2. 在磁场下或通过离心使结合物与上清液分离，吸弃上清液并洗涤磁珠，然后用SDS样品液使蛋白变性而与磁珠分离。
3. 分离液中的蛋白质用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）或双向电泳分离，SDS PAGE用高灵敏度考马斯亮蓝（CBB）染色。
4. 然后从染色胶上切下所需蛋白带进行质谱分析，确认蛋白种类与类型。
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文献和实验，只要互作蛋白间具有相互结合的结构域基础即可实验证明；Co-IP 实验是细胞内高表达目的蛋白，并通过 IgG 球珠-抗体-蛋白复合物体系，分离出互作的蛋白复合物，是细胞内的体内反应结合。2. GST pull-down 实验优点① 可验证蛋白质-蛋白质之间的直接互作。② GSH 谷胱甘肽偶联球珠亲和力强，洗脱纯度高。3. GST pull-down 实验缺点① 验证互作是在试管中进行的生化反应，不能够完全反应细胞内蛋白真实互作状态。② 融合表达的 GST 标签，肽链较长，可能会改变原目的蛋白的原有的折叠结构。
qiubiaodsg 我最近在做pull down 实验，先用western blot 标记的是被拉的蛋白，结果片子上是一片白板，连作为对照的input（只有被拉的蛋白）都没曝出来，请各位高手知道一下吧，谢谢。本人western 没有问题。 dianaofyezi 如果连对照都没有出来，就首先应该考虑程序流程的问题，无论是否发生了pull down，起码对照应该成立不是么？然后再考虑的是相互作用的蛋白的问题。
-gelatin bufferl d) GST- pull down 1- In an Eppendorf add: 5_ L of in-vitro synthesized receptor ( 35 S-labelled) Usual conditions for RAR & RXR as well as for GR are as follows: -TnT Quick Master Mix: 10 _ L -DNA 1_ g/_ L: 0,8 _ L - 35 S Méthionine
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