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孚博生物
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100 ml
| 原厂网址:http://www.zenoaq.jp/english/ |
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文献和实验固定30秒,然后用清洗液洗数秒钟。 c.将已固定的血片放于缓冲底质液内,在37℃水浴中保温2小时,然后用清洗液洗数秒钟。 d.将上述血片依次放入2%硝酸钴液中5分钟,用清洗液洗净,然后移于稀硫化铵液中1分钟,用清洗液洗净,最后用2%碱性藏红水溶液染色16秒,用水洗净,待干,用显微镜油镜观察结果。 3 计算方法 共计数100个中性粒细胞,视其细胞内碱性磷酸酶活力强弱,按Kaplow法五级记分表示。将每级阳性细胞百分比乘以各该级的分数所得分数之和,即为碱性磷酸酶的积分。分级
液:用 DMSO 配置终浓度为 5 mM 的 CFSE 溶液(1000×)RPMI 1640 完全培养基:RPMI 1640 培养基 + 10% 血清 + 1% 双抗☟☟☟— 实验正式开始 —1. 脾淋巴细胞的制备无菌操作取出小鼠脾脏,研磨成单细胞悬液,用红细胞裂解液或者小鼠淋巴细胞分离液去除红细胞,将细胞过 40 μm 细胞滤网后,进行细胞计数。样本清洗液洗涤(可用 PBS 或者不含血清双抗的培养基代替),1 500 rpm 离心 5 min,用 PBS 重悬,调整细胞浓度为 107/ml。2. CFSE
消毒,然后打开腹腔,用20ml培养基清洗腹腔,然后把腹腔清洗液取出铺板,一只小鼠腹腔清洗液能够铺2-3块96孔板。第二天再铺稳定转染的细胞,一个孔最好铺2-3个细胞。长出单克隆的细胞再扩大转代培养。
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