造血干细胞专用冻存液|HSC banker GMP Grad

细胞冷冻保存方法

选择冻存处于对数生长数的细胞有助于提高复苏细胞存活率。

1. 按照常用方法收集悬浮细胞或贴壁细胞于试管中。
2. 按照培养细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存细胞数。
   （参考：5×105 至 5×106 cells/ml）。
3. 取相当于所需细胞数的细胞悬浮液量，置于离心管中，离心收集培养细胞(参考离心条件：1,000~2,000rpm，4℃，3至5分)。移去离心管中的上清液。
4. 加入适量的CELLBANKERⓇ 细胞冻存液于离心管中，使细胞浓度为 5×105 至 5×106 cells/ml。缓慢地混合均匀，制成细胞混合液。
5. 将离心管中的细胞混合液分装于已标示完全的冷冻保存管中。
6. 直接将含细胞混合液的冻存管放入-80℃冰箱，长期冷冻保存。
7. 若研究者需要液氮保存时，可将完全冻结的冻存管（放入-80℃冰箱后至少一昼夜）移至-196℃液氮罐。

1. 从冰箱里取出细胞冷冻保存管，立即放入37℃ 振动水浴槽中快速解冻。
2. 待冻存管中细胞混合液完全融化后，立即加入1ml细胞培养基于该冷冻管中与细胞混合，再将细胞混合液从冻存管中移入含有9ml该细胞培养基的试管中，混合均匀。
3. 离心收集培养细胞((参考离心条件：1,000~2,000rpm，4℃，3至5分)，移去上清液。
4. 清洗细胞，充分洗净残留冻存液。
5. 加入适量的新鲜细胞培养基，使用移液管缓缓地均匀细胞混合液。适量地稀释后，将细胞混合液移至事先准备好的培养瓶中。
6. 镜检后，研究者可根据各自方法和需要来进行细胞培养。