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-20℃
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半年
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586
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品,包括沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒折扣价在内的细菌PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品,欢迎选购。
名称:沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒折扣价
品牌:百奥莱博
规格:48次/盒
编号:SYA255
等级:科研试剂
一、简介:
本试剂盒用一对沙门氏菌特异性引物,对沙门氏菌DNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途:
该试剂盒适用于增菌培养物、疑似病料及食品中沙门氏菌(Sal)的特异性检测,用于沙门氏菌(Sal)的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
沙门氏菌PCR反应液(Sal-PCR MIX) 1管 720μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(JEV-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、PCR仪器适用范围
ABI系列,Roche系列等PCR检测仪等。
六、样品的采集与DNA提取
6.1 样品的采集
6.1.1 食品样品:样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》(GB 4789.4-2010)要求进行。
6.1.2 粪便样品:取粪便置于灭菌的收集管中送检。
6.1.3 病灶部位样品:取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
注:上述样品建议经过增菌后,收集培养物用于检测。
6.2 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA 抽提液,按以下说明进行DNA 核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA 提取试剂盒(过柱法-凝胶配套),并按照相应试剂盒说明进行操作。
6.2.1 培养物:取培养物50μL(培养至一定浊度)或者挑取单克隆菌落与50μL DNA 抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm 离心3min,取上清5μL 进行PCR 反应。
6.2.2 粪便样品:挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中,加入0.5mL 生理盐水,振荡混匀,13000rpm 离心3 分钟,弃上清,沉淀中加入50μL DNA 抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm 离心3min 取上清5μL进行PCR反应。
6.2.3 其他液体标本:取标本2-3mL,13000rpm 离心3min,弃上清,沉淀中加入50μL DNA 抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm 离心3min 取上清5μL进行PCR反应。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出PCR 反应液(Sal-PCR MIX),室温融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
PCR反应液 15µL N×15µL
向设定的N个PCR 反应管中分别加入15μL PCR 反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(Sal-PTC)5μL,10000rpm 瞬时离心10秒。
7.2 PCR反应条件
将各反应管放入PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
预变性 1循环 94℃ for 2 min
PCR扩增 35循环 94°C for 30 sec
58°C for 30 sec
72°C for 30 sec
八、结果分析:
(1) 称取1.5g琼脂糖放于250mL锥形瓶中,加入100mL 1×TAE电泳缓冲液,微波炉加热溶解,稍冷后加入10μL染色液混匀,倒入插有梳子的制胶板中。
(2) 待胶凝固后,取10μL Maker(推荐使用DL2000 Maker)点样于左侧凝胶孔中,取10μL PCR产物依次点样于凝胶孔中,电压值设定为电泳槽正负极距离(cm)与5(V/cm)的乘积。待*酚兰指示剂电泳至凝胶中部时停止电泳并使用凝胶成像仪或紫外透照台观察结果。
九、结果分析:
(1) 阴性对照(NTC):无任何的条带(引物带除外)。
(2) 阳性对照(Sal-PTC):在260bp处有条带。
(3) 被检样品:在260bp处有条带为阳性样品,否则为阴性样品。
(4) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
想要了解更多关于沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒折扣价的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息,请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品:
·乙型流感病毒(IFVB-V1)分型单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA196
英文名称:IFVB-V1 PCR Detection Kit
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·禽流感通用型和新城疫病毒(AIV-M和NDV)通用型(二合一)荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA371
英文名称:IFVB-V1 PCR Detection Kit
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
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英文名称:IFVB-V1 PCR Detection Kit
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
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英文名称:IFVB-V1 PCR Detection Kit
等级:科研实验专用
规格:96次/盒
·沙门菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA058
英文名称:IFVB-V1 PCR Detection Kit
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
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编号:SYA088
英文名称:IFVB-V1 PCR Detection Kit
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·口蹄疫病毒(FMDV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA401
英文名称:IFVB-V1 PCR Detection Kit
等级:科研实验专用
规格:48次/盒|96次/盒
一、简介:
口蹄疫病毒实时荧光qRT-PCR检测操作说明书是按照参照OIE《Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals 2009》国际标准和《中国国家标准口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测方法》(GB22915-2008)而制备的商业化检测试剂盒。试剂盒的探针报告基团为6-FAM,能对样品中口蹄疫病毒进行快速检测,具有特异性高、敏感性强和操作简便的特点。
二、用途:
本试剂盒适用于检测发病动物血清、水泡液、淋巴结等标本以及细胞培养液中所有血清型(包括A、O、C、南非1、南非2、南非3和亚洲1型)口蹄疫病毒(FMDV)RNA;适用于口蹄疫病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查,其检测结果仅供参考。
三、试剂盒组成:(40T/Kit)
组份 数量 规格
荧光qRT-PCR反应液(FMDV-qRT-PCR MIX) 1管 560μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 40μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1 管 50μL/管
阳性对照(FMDV-PTC) 1 管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-18℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
(1) 猪病料:剪取50-100mg猪病料,加入装有500 µl PBS或生理盐水的研钵中缓慢研成匀浆,取匀浆液转移到无RNA酶污染的离心管中,6000rpm离心20sec;取上清备用。
(2) 动物血清、水泡液、淋巴结等标本以及细胞培养液:取样本至无RNA酶污染的离心管中备用。
6.2 样品RNA提取
可按常规方法提取,也可采用商品化试剂盒提取病毒RNA。
(1) 取灭菌的1.5 mL Eppendorf离心管,做好标识。
(2) 每管加入600 µL裂解液,分别加入被检样本200 µL,再加入200 µL*仿,混匀器上振荡混匀5 s,于4℃ 12000 r离心15 min。
(3) 取无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管,加入-20℃预冷400µL异丙醇,吸取步骤(2)各管中的上清液转移至相应的管中,避免吸出中间层,颠倒混匀。
(4) 于4℃ 12000 r离心15 min,弃上清,倒置于吸水纸上,沾干液体;加入600µL 75%预冷乙醇,洗涤。
(5) 于4℃ 12000 r离心10 min,弃上清,倒置于吸水纸上,沾干液体。
(6) 10000 r离心10 s,用微量加样器将其吸干,室温干燥5 min~10 min。
(7) 加入10µL 无核酸降解酶的水,溶解管底的RNA,5000 r离心5 s,冰上保存备用。若需长期保存须放置-70℃ 冰箱。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(FMDV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000r离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(FMDV-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 real time RT-PCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 5 min
预变性 1循环 94℃ for 30 sec
PCR扩增(PCR amplification ) 40循环 94℃ for 5 sec
60℃ for 30 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(FMDV-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明FMDV核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明FMDV核酸阴性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行FMDV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明FMDV核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒折扣价关键词:沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒,百奥莱博,SYA255
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沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒折扣价关键词:沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒,百奥莱博,SYA255
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等级:科研实验专用
规格:48次/盒|96次/盒
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等级:科研实验专用
规格:48次/盒
本试剂盒适合于检测全血等样本中的贝氏柯克斯体通用,用于贝氏柯克斯体通用感染的辅助诊断,其检测结果仅供参考。
本试剂盒用一对贝氏柯克斯体通用特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对贝氏柯克斯体通用的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
试剂盒组成:
| 组分 | 数量 | 规格 |
| 贝氏柯克斯体反应液(qPCR MIX) | 1管 | 672μL/管 |
| DNA抽提液(DNA Extraction) | 2管 | 1.5mL/管 |
| 酶混合物(Enzymes MIX) | 1管 | 48μL/管 |
| 阴性对照(NTC) | 1管 | 50μL/管 |
| 贝氏柯克斯体阳性对照(PTC) | 1管 | 50μL/管 |
储存条件:-20℃以下,有效期6个月。
使用方法:
一、样品采集:
用注射器取血5mL至EDTA-2Na抗凝管,取抗凝血下层血细胞50μL,加入100μL双蒸水吹匀。
二、DNA提取:
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入等体积核酸提取液(固体标本加入50μL核酸提取液),100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
三、检测步骤:
1.试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
| 试剂 | 每个反应加入的量 | N个反应加入的量 |
| 荧光PCR反应液 | 14µL | N×14µL |
| 酶混合物 | 1 µL | N×1µL |
| 总量 | 15 µL | N×15µL |
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
2.qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
| 1循环 | 50℃ for 2 min预变性 | 1循环 | 95℃ for 10 minPCR扩增 | 40循环 | 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec |
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
四、结果分析:
1.结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
2.试验成立判定
➤阴性对照:不应产生任何的扩增曲线。
➤阳性对照:均产生扩增曲线。
➤以上条件应同时满足 ,否则,此次试验视为无效。
3.结果判定
➤在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明贝氏柯克斯体核酸阳性。
➤Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明贝氏柯克斯体核酸阴性。
➤如果Ct值>35,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
➤对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行贝氏柯克斯体 qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明贝氏柯克斯体核酸阳性;否则判为样本阴性。
五、注意事项:
➤初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
➤所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
➤PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
➤样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
➤试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
我公司生产供应销*(代"售")的细菌PCR检测试剂盒正全品类优惠促销,十分期待您的咨询选购沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒折扣价。
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。因此,如何进一步提高检测方法灵敏度、简化操作程序、缩短检测时间、消除非特异因素干扰以及采用统一的、标准化的方法已成为实时荧光PCR检测试剂盒未来研究的主要方向。许多研究者趋向于将更多的精力投入实时荧光定量PCR方法的研究开发,使之进一步合理化,以增加试验的可信度;通过使其涉及的所有过程实现最终自动化,来提高临床检验结果的准确性。毫无疑问,在不久的将来,实时荧光定量PCR技术将以其显著的优势,在分子生物学、实验医学,特别是在临床医学领域中得到越来越广泛的应用。
(1.福建出入境检验检疫局,福建 福州 350001;2.厦门北大之路生物工程有限公司,福建 厦门 361009; 3. 厦门大学生物系,福建 厦门 361005) 摘要: 分别以CTAB法、 试剂 盒提取菊花、矮牵牛、非洲菊3种花卉的基因组DNA,凝胶电泳结果表明 试剂 盒提取的效果较好。设计合成了3对引物,分别用于扩增花椰菜花叶病毒(Cauliflower mosaic virus,CaMV)35S启动
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