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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃保存,避免反复冻融
- 保质期:
长期
- 英文名:
Protein Molecular Weight Marker
- 库存:
327
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京蛋白分子量Marker价格,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京蛋白分子量Marker价格
英文名:Protein Molecular Weight Marker
品牌:百奥莱博
编号:WE0280
产地:国产|进口
规格:100次
本蛋白Marker由8条纯化好的蛋白质组成,其分子量范围是14.4 KD-220 KD(14.4 KD、20 KD、29 KD、35 KD、40 KD、66 KD、90 KD、220 KD),每种蛋白浓度为0.1-0.2 µg,进行聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳时,染色后可以用来判断蛋白质的分子量。本产品仅适用于SDS-PAGE凝胶电泳考蓝染色,不适用于Western Blot检测。
注意事项:
1、仅适用于SDS-PAGE凝胶考马斯亮蓝染色,推荐使用8%-12%的聚丙*(代"烯")酰胺凝胶。
2、不推荐用于Native-PAGE。
3、不适用于Western Blot检测。
4、为避免反复冻融及污染,可将本产品分装后,-20℃保存。
操作步骤:
1、加样前在室温或者37℃-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀,以确保溶液混合均匀。
2、本产品推荐上样量为5μl,可根据凝胶的厚度和浓度大小调整。
实验图例:
12%的聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳后,经ShowProtein-G250蛋白快速染色试剂(#WE0290)染色的结果。
储存条件:-20℃保存,避免反复冻融。
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北京蛋白分子量Marker价格关键词:蛋白分子量Marker,WE0280,Protein Molecular Weight Marker
·RRX标记驴抗大鼠IgG(H+L)
编号:WE0369
英文名称:Donkey Anti-Rat IgG, Rhodamine Red-X Conjugated
规格:100μl
本产品为RRX标记的经抗原亲和纯化的驴抗体,特异识别大鼠IgG重链和轻链,检测灵敏度高,本底低。Rhodamine Red-X(RRX)是近年新开发的一种荧光素,被激发后产生较明亮的红色荧光。它比普通的荧光更加明亮,更加不容易淬灭,且背景更低。由于其发射波长介于Cy2(或FITC)和Cy5中间,且重叠较少,RRX可与Cy2和Cy5一起用于同一样本的多重标记检测。
免疫原:大鼠IgG
缓冲液:0.01M PBS,50%甘油,pH7.6
稳定剂:15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂:0.05%叠氮*
荧光团:Rhodamine Red-X,Amax=570; Emax=590
应用范围:对于大多数实验(1:50-200)
·病毒RNA提取试剂盒
编号:WE0194
英文名称:RNAtiqu Virus RNA Extraction Kit
规格:50次
本试剂盒采用可以特异性结合病毒RNA的吸附柱和独特的缓冲液系统,适用于从血清、血浆、尿液、脑脊液等无细胞体液及细胞培养上清液中分离病毒RNA。病毒RNA特异性地结合到硅基质膜上,而污染物则流过该膜。通过两次高效洗涤完全去除蛋白质等杂质,然后用无RNase的水或试剂盒提供的RNase-Free Water洗脱高纯度的病毒RNA。由本试剂盒提取的病毒RNA可直接用于RT-PCR、Real-time RT-PCR和印迹分析等实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 |
| Buffer GL | 15ml |
| Buffer RW1 | 40ml |
| Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
| 蛋白酶K | 12.5 mg |
| 蛋白酶K 储存液 | 1.2 5ml |
| RNase-Free Water | 10ml |
| 吸附柱RS及收集管 | 50套 |
| RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
自备试剂:无水乙醇,0.9% NaCl。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解,-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。
2、预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5M的NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
3、血清或血浆避免反复冻融导致蛋白变性或产生沉淀,减少病毒滴度进而影响提取病毒核酸的产量。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5、Buffer GL如果产生沉淀,可在56℃加热使其溶解后室温放置。
6、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。
操作步骤:
1、室温下取200μl血清或血浆加到1.5ml离心管(自备)中。
注意:不足200μl可以加入0.9 % NaCl(客户自备)补足。
2、向上步溶液中加入20μl 蛋白酶K ,混匀。
3、加入200μl Buffer GL,涡旋震荡15秒。
注意:不要直接把蛋白酶K 加到Buffer GL中。
4、56℃ 孵育15分钟,短暂离心,将管壁上的溶液收集到管底。
5、加入250μl无水乙醇,涡旋震荡15秒,室温孵育5分钟,短暂离心,将管壁上的溶液收集到管底。
6、将步骤5得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中,若一次不能将全部溶液加入吸附柱中,请分两次转入,12000rpm(~~13400×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer RW1,12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl无水乙醇,12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
10、12000rpm 离心3分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:
1)这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
2)推荐步骤:将吸附柱放入一个新的1.5ml离心管(自备)中,打开管盖,56℃烘箱孵育3分钟,使吸附柱的膜彻底干燥。
11、将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中,向吸附柱的中间部位悬空加入20-50μl RNase-Free Water,室温放置5分钟,12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。
注意:
1)RNase-Free Water体积不应小于20μl,体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量,可用20-50μl新的RNase-Free Water重复步骤11。
3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤11。
储存条件:室温(15~30℃)。
北京蛋白分子量Marker价格关键词:蛋白分子量Marker,WE0280,Protein Molecular Weight Marker
·低背景ECL化学发光检测试剂盒
编号:WE0307
英文名称:cwECL Western Blot Kit
规格:50ml|250ml
低背景化学发光检测试剂盒是免疫印迹实验中与辣根过氧化物酶(HRP)配套使用的的低背景底物检测试剂盒。本产品能够在HRP的催化下发生化学反应而发光,可用于检测固定在膜上的蛋白质等生物大分子。其高灵敏度能够检测ng级别的抗原,发光信号强
烈持久,可以使用照相技术(X-光胶片曝光)或者其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测。
试剂盒组成:
| 组成 | 50ml | 250ml |
| cwECL-A(Luminol) | 25ml | 125ml |
| cwECL-B(Peroxide) | 25ml | 125ml |
注意事项:
1、在与膜发生接触过程中,请佩戴手套且使用干净镊子等洁净器材,避免蛋白污染及高背景。
2、避光条件下,配制好的化学发光检测底物工作液可在室温下稳定保存8小时。阳光或其他强光会影响工作液,故应避免强光长时间的照射。正常实验室灯光短时间照射不影响工作液的使用。
3、百奥莱博提供多种蛋白转移用膜、封闭液、一抗、酶标二抗、缓冲液等,详情请查询公司网站。
操作步骤:
1、二抗孵育完毕后,将印迹膜充分洗涤。
2、根据需要量,将cwECL-A和cwECL-B按照1:1的比例等体积混合,配制为发光检测底物工作液(一张8 cm×6 cm的膜大约使用1ml工作液)。
3、弃去洗涤缓冲液,将发光底物工作液滴加在印迹膜上,确保工作液覆盖整张膜,室温孵育3-5分钟。
4、用移液器吸去多余发光底物工作液,将印迹膜置于两层干净的塑料薄膜之间,此过程应小心完成,避免膜与膜之间产生气泡。
5、在暗室内进行X-光胶片曝光,或将膜放置到化学发光成像仪内,按照仪器说明书进行检测。
| 问题 | 可能原因 | 解决方法 |
| 胶片反相(白色条带,黑色背景) | 系统中HRP过量 | 稀释HRP标记物至少10倍以上 |
| 膜上出现棕色或黄色条带 | ||
| 暗室中看到强烈发光 | ||
| 发光信号持续时间过短 | ||
| 信号较弱或者无信号 | 发光反应系统中HRP 过多,消 耗底物过快,引起信号迅速降低 |
稀释HRP标记物至少10倍以上 |
| 抗原/抗体量不够 | 增加抗原/抗体使用量 | |
| 蛋白转移率低 | 优化转移系统 | |
| 高背景 | 系统中HRP 过量 | 稀释HRP标记物至少10倍以上 |
| 封闭不足 | 优化封闭程序 | |
| 封闭试剂选择不当 | 选择另一种封闭试剂 | |
| 冲洗不充分 | 增加冲洗时间,次数 | |
| 曝光过度 | 减少曝光时间 | |
| 抗原/抗体浓度过高 | 降低抗原/抗体使用浓度 | |
| 蛋白条带为点状 | 蛋白转移失败 | 优化转移过程 |
| 膜未平衡 | 按照说明书处理膜 | |
| 胶片与膜之间有气泡 | 曝光前去除所有气泡 | |
| 出现非特异条带 (高背景、信号维持时间较短) |
系统中HRP过多 | 稀释HRP标记物 |
| 出现非特异条带 (背景干净信号维持时间正常) |
一抗用量过多 | 进一步稀释一抗 |
| SDS 导致非特异结合 | 在实验过程中避免使用SDS |
储存条件:2~8℃,避光保存
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在Western Blot过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个 Western Blot参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小,只有标准量精确无误了,实验结果才有说服力,除此之外,蛋白标准还有表示转移成功或者蛋白在凝胶上的电泳程度等等的作用,所以选择正确的蛋白Marker也是western blot实验成功
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