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- 百奥莱博
- 北京
- WE0176-LKZ
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
室温(15～30℃)
- 保质期：
长期
- 英文名：
BalbGen Blood DNA Kit
- 库存：
638
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖北京血液基因组DNA提取试剂盒 价格在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称：血液基因组DNA提取试剂盒
品牌：百奥莱博
编号：WE0176
产地：国产|进口
英文名：BalbGen Blood DNA Kit
本试剂盒提供了一种快速、灵活的方法，适用于新鲜或冷冻全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的样品)提取总DNA，包括基因组DNA和线粒体DNA。本品可以灵活处理0.1-20ml的全血，采用非离心柱的方法，无需使用*酚、*仿等有机溶剂，有效去除蛋白、色素、脂类及其它抑制性杂质污染。整个过程在一个管中操作，减少了污染及样本混淆的风险。提取的DNA产量高、质量好，可直接用于PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern Blot以及文库构建等实验。
试剂盒组成：
| 组份 | 可处理50ml血液 | 可处理200ml血液 |
| Buffer FG1 | 2×65ml | 2×260ml |
| Buffer FG2 | 30ml | 120ml |
| Buffer GE | 15ml | 60ml |
| 蛋白酶K | 3 mg | 12.5mg |
| 蛋白酶K 储存液 | 1.25ml | 1.25ml |
保存条件：Buffer FG1 2～8℃，其他组分室温(15～30℃)。
产品特点
1、纯度高：提取的基因组DNA可直接用于下游PCR、荧光定量PCR、酶切等各种实验。
2、提取量大：可从0.1-20ml的全血中提取DNA，无需使用*酚、*仿等有机溶剂。
3、兼容性强：适用于处理各种血液和细胞样本。
自备试剂：异丙醇、70%乙醇
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入指定用量(0.3ml/1.25ml)的蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、所有离心操作均在室温下完成。
3、血液样品反复冻融，会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。所得基因组DNA也应尽可能避免反复冻融，以免降解。如果提取冷冻血液的基因组DNA，建议37℃水浴，迅速解冻后再进行后续操作。
4、血液样品的储存：
1)短期保存：已加入抗凝剂的血液样品可在2～8℃储存最多10天，对于某些实验例 如Southern杂交等，需要得到完整全长的基因组DNA，请将血液样品在2～8℃储存不超过3天，此时基因组DNA的降解程度较轻。
2)长期保存：已加入抗凝剂的血液请置于-70℃保存(如果提取的是高分子量的DNA，推荐使用EDTA作为抗凝剂)。
操作步骤：
一、从100～900μl全血中提取基因组(以300μl血液处理量为例)
1、取300μl全血于2ml离心管(自备)中，加入300μl(样本等体积)Buffer FG1，上下颠倒混匀5次，10000×g离心30秒，弃上清。
2、再向离心管中加入450μl(1.5倍样本体积)Buffer FG1，涡旋震荡，使沉淀完全分散。10000g离心30秒，弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上，放置2分钟。
注意：在极少情况下沉淀可能会松弛，所以要缓慢倒掉上清。将离心管倒置在吸水纸上，可以减少管壁上清的回流。
3、按照附表配制Buffer FG2与蛋白酶K 的混合液(比例100:1)。
注意：此混合液最好现用现配.井在配好后1小时之内用完。
4、加入150μl的Buffer FG2与蛋白酶K 的混合液，立即涡旋混匀至溶液无团块。
注意：
1)如果有多个样品同时操作，加入Buffer FG2/蛋白酶K 混合液后立即涡旋震荡，不要等所有样品部加完后再震荡。
2)通常涡旋震荡3-4次.毎次5秒，可以使沉淀充分悬浮，如果涡旋震荡后发现沉淀中含胶状物质可以再加入30μl的Buffer FG2/蛋白酶K 混合液，再次混旋混匀。
5、65℃孵育10分钟，其间颠倒混匀数次。
注意：如果样品颜色从红色变成橄榄绿说明蛋白消化完全。
6、加入150μl导丙醇，上下颠倒彻底混匀直至出现丝状或簇状基因组DNA。
注意：与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要。如果样品中白细胞含量少，可能看不到DNA，则至少上下频倒高心管20次确保沉淀完全。
7、10000×g离心5分钟。
注意：如果沉淀贴壁不牢，可以适当延长离心时间或増大离心力。
8、弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。
注意：少数时候沉淀可能贴壁不牢，注意不要吸弃沉淀。
9、加入300μl的70%乙醇，涡旋震荡5秒，10000×g离心5分钟，弃上清。
注意：如果沉淀贴壁不牢，可以适当延长离心时间或増大离心力。
10、把离心管倒置于干净的吸水纸上5分钟，确保沉淀在管中 。
注意：在管底可见白色的DNA沉淀，在极少情況下沉淀可能会松弛 ，所以要缓慢倒掉上清。
11、空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净(至少5分钟)。
注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、 PCR等)实验，但避免过度干操DNA沉淀，因过度干燥会使DNA难于溶解。
12、加入200lμl的Buffer GE，低速涡旋5秒，65℃孵育1小时溶解DNA，期间轻弹数次助溶。-20℃保存DNA。
注意：如果DNA没有完全溶解，可室温过夜。如果使用少量的FG3溶解DNA，建议延长孵育时间。
二、从1～5ml全血中提取基因组(以3ml血液外理量为例)
1、取3ml全血于15ml离心管(自备)中，加入3ml(样本等体积)Buffer FG1，上下颠倒混匀5次，2500×g离心5分钟，弃上清。
2、再向离心管中加入4.5ml(1.5倍样本体积)Buffer FG1，涡旋震荡，使沉淀完全分散。2500×g离心5分钟，弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上，放置2分钟。
注意：在极少情况下沉淀可能会松弛 ，所以要缓慢倒掉上清。将离心管倒置在吸水纸上，可以減少管壁上清的回流。
3、按照附表配制缓冲液FG2与蛋白酶K 的混合液(比例100:1)。
注意：此混合液最好现用现配，井在配好后1h之内用完。
4、加入1.5ml Buffer FG2/蛋白酶K 混合液，立即涡旋混匀至溶液无团块。
注意：
1)如果有多个样品同时操作，加入Buffer FG2/蛋白酶K 混合液后立即涡旋振荡，不要等所有样品都加完后再震荡。
2)通常涡旋震荡3-4次，毎次5秒可以使沉淀充分悬浮，如果涡旋震荡后发现沉淀中含胶状物质可以再加入300lμl的Buffer FG2/蛋白酶K 混合液，再次涡旋混匀。
5、65℃孵育10～30分钟，其间颠倒混匀数次。
注意：如果样品额色从红色变成橄榄绿说明蛋白消化完全。
6、加入1.5ml导丙醇，上下颠倒彻底混匀直至看到DNA。
注意：与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要。如果样品中白细胞含量少，可能看不到DNA，则至少上下颠倒离心管20次确保沉淀完全。
7、2500×g离心5分钟。
注意：如果沉淀贴壁不牢，可以造当延长离心时间或増大离心力。
8、弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。
注意：在管底可见自色的DNA沉淀，在极少情况下沉淀可能会松弛 ，所以要缓慢倒掉上清。
9、加入1.5ml的70%乙醇，涡旋震荡5秒，2500×g离心5分钟，弃上清。
注意：如果沉淀贴壁不牢.可以适当延长离心时间或増大离心力。
10、把离心管倒置于干净的吸水纸上5分钟，确保沉淀在管中 。
注意：在极少情况下沉淀可能会松弛，所以要缓慢倒掉上清。
11、空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净(至少5分钟)。
注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、 PCR等)实验，但避免过度干燥DNA沉淀，因过度干燥会使DNA难于溶解。
12、加入300μl的Buffer GE，低速涡旋5秒，65℃孵育1小时溶解DNA，期间轻弹数次助溶。一20℃保存DNA。
注意：如果DNA没有完全溶解，可室温过夜。如果使用少量的FG3溶解DNA，建议延长孵育时间。
三、从6～20ml全血中提取基因组(以10ml血液处理量为例)
1、取10ml全血于50ml离心管(自备)中，加入10ml Buffer FG1，上下颠倒混匀5次，2500×g离心5分钟。
2、再向离心管中加入15ml Buffer FG1，涡旋震荡，使沉淀完全分散。2500×g离心5分钟，弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上，放置2分钟。
注意：在极少情况下沉淀可能会松弛，所以要缓慢倒掉上清。
3、按照附表配制缓冲液FG2与蛋白酶K 的混合液(比例100:1)。
注意：此混合液最好现用现配，井在配好后1小时之内用完。
4、加入5ml Buffer FG2/蛋白酶K 混合液，立即涡旋混匀至溶液无团块。
注意：
1)如果有多个样品同时操作，加入Buffer FG2/蛋白酶K 混合液后立即涡旋震荡，不要等所有样品都加完后再震荡。
2)通常涡旋震荡3-4次，毎次5秒可以使沉淀充分悬浮，如果涡旋震荡后发现沉淀中含胶状物质可以再加入1ml BufferFG2/蛋白酶K 混合液，再次涡旋混匀。
5、65℃孵育30分钟，其间颠倒混匀数次。
注意：如果样品颜色从红色变成橄榄绿说明蛋白消化完全。
6、加入5ml导丙醇，上下颠倒彻底混匀直至看到DNA。
注意：与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要，应该至少上下颠倒离心管20次确保沉淀完全。
7、2500×g离心5分钟。
注意：如果沉淀贴壁不牢，可以适当延长离心时间或増大离心力。
8、弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。
注意：在管底可见白色的DNA沉淀，在极少情况下沉淀可能会松弛 ，所以要缓慢倒掉上清。
9、加入5ml的70%乙醇，涡旋震荡5秒，2500×g离心5分钟，弃上清。
注意：如果沉淀贴壁不牢，可以适当延长离心时间或増大离心力。
10、把离心管倒置于干净的吸水纸上5分钟，确保沉淀在管中 。
注意：在极少情况下沉淀可能会松驰 ，所以要缓慢倒掉上清。
11、空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净(至少5分钟)。
注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、 PCR等)实验，但避免过度干燥DNA沉淀，因过度干燥会使DNA难于溶解。
12、加入1ml的Buffer GE，低速涡旋5秒，65℃孵育1小时溶解DNA，期间轻弹数次助溶。-20℃保存DNA。
注意：如果DNA没有完全溶解.可室温过夜。如果使用少量的FG3溶解DNA，建议延长孵育时间。
附表：不同体积血液所需各种缓冲液用量
| 缓冲液 | 血液样品的体积(μl) | ||||||
| 100 | 300 | 1000 | 3000 | 5000 | 10000 | 20000 | |
| Buffer FG1(μl) | 250 | 750 | 2500 | 7500 | 12500 | 25000 | 50000 |
| Buffer FG2(μl) | 50 | 150 | 500 | 1500 | 2500 | 5000 | 10000 |
| 蛋白酶K(μl) | 0.5 | 1.5 | 5 | 15 | 25 | 50 | 100 |
| 异丙醇(μl) | 50 | 150 | 500 | 1500 | 2500 | 5000 | 10000 |
| 70%乙醇(μl) | 50 | 150 | 500 | 1500 | 2500 | 5000 | 10000 |
| Buffer GE(μl) | 100 | 200 | 200 | 300 | 500 | 1000 | 1000 |
| 补加FG2和蛋白酶K 混合液 | 10 | 30 | 100 | 300 | 500 | 1000 | 1000 |
储存条件：室温(15～30℃)。
关键词：BalbGen Blood DNA Kit,WE0176,血液基因组DNA提取试剂盒
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