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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
311
- 英文名:
BalbGen Blood DNA Kit
- 保质期:
10天
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
室温(15~30℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应血液基因组DNA提取试剂盒 价格,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:血液基因组DNA提取试剂盒 价格
产地:国产|进口
编号:WE0176
英文名:BalbGen Blood DNA Kit
品牌:百奥莱博
规格:可处理50ml血液|可处理200ml血液
本试剂盒提供了一种快速、灵活的方法,适用于新鲜或冷冻全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的样品)提取总DNA,包括基因组DNA和线粒体DNA。本品可以灵活处理0.1-20ml的全血,采用非离心柱的方法,无需使用*酚、*仿等有机溶剂,有效去除蛋白、色素、脂类及其它抑制性杂质污染。整个过程在一个管中操作,减少了污染及样本混淆的风险。提取的DNA产量高、质量好,可直接用于PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern Blot以及文库构建等实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 可处理50ml血液 | 可处理200ml血液 |
| Buffer FG1 | 2×65ml | 2×260ml |
| Buffer FG2 | 30ml | 120ml |
| Buffer GE | 15ml | 60ml |
| 蛋白酶K | 3 mg | 12.5mg |
| 蛋白酶K 储存液 | 1.25ml | 1.25ml |
保存条件:Buffer FG1 2~8℃,其他组分室温(15~30℃)。
产品特点
1、纯度高:提取的基因组DNA可直接用于下游PCR、荧光定量PCR、酶切等各种实验。
2、提取量大:可从0.1-20ml的全血中提取DNA,无需使用*酚、*仿等有机溶剂。
3、兼容性强:适用于处理各种血液和细胞样本。
自备试剂:异丙醇、70%乙醇
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、向蛋白酶K 中加入指定用量(0.3ml/1.25ml)的蛋白酶K 储存液使其溶解,-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。
2、所有离心操作均在室温下完成。
3、血液样品反复冻融,会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。所得基因组DNA也应尽可能避免反复冻融,以免降解。如果提取冷冻血液的基因组DNA,建议37℃水浴,迅速解冻后再进行后续操作。
4、血液样品的储存:
1)短期保存:已加入抗凝剂的血液样品可在2~8℃储存最多10天,对于某些实验例 如Southern杂交等,需要得到完整全长的基因组DNA,请将血液样品在2~8℃储存不超过3天,此时基因组DNA的降解程度较轻。
2)长期保存:已加入抗凝剂的血液请置于-70℃保存(如果提取的是高分子量的DNA,推荐使用EDTA作为抗凝剂)。
操作步骤:
一、从100~900μl全血中提取基因组(以300μl血液处理量为例)
1、取300μl全血于2ml离心管(自备)中,加入300μl(样本等体积)Buffer FG1,上下颠倒混匀5次,10000×g离心30秒,弃上清。
2、再向离心管中加入450μl(1.5倍样本体积)Buffer FG1,涡旋震荡,使沉淀完全分散。10000g离心30秒,弃上清,并把离心管倒置于干净的吸水纸上,放置2分钟。
注意:在极少情况下沉淀可能会松弛,所以要缓慢倒掉上清。将离心管倒置在吸水纸上,可以减少管壁上清的回流。
3、按照附表配制Buffer FG2与蛋白酶K 的混合液(比例100:1)。
注意:此混合液最好现用现配.井在配好后1小时之内用完。
4、加入150μl的Buffer FG2与蛋白酶K 的混合液,立即涡旋混匀至溶液无团块。
注意:
1)如果有多个样品同时操作,加入Buffer FG2/蛋白酶K 混合液后立即涡旋震荡,不要等所有样品部加完后再震荡。
2)通常涡旋震荡3-4次.毎次5秒,可以使沉淀充分悬浮,如果涡旋震荡后发现沉淀中含胶状物质可以再加入30μl的Buffer FG2/蛋白酶K 混合液,再次混旋混匀。
5、65℃孵育10分钟,其间颠倒混匀数次。
注意:如果样品颜色从红色变成橄榄绿说明蛋白消化完全。
6、加入150μl导丙醇,上下颠倒彻底混匀直至出现丝状或簇状基因组DNA。
注意:与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要。如果样品中白细胞含量少,可能看不到DNA,则至少上下频倒高心管20次确保沉淀完全。
7、10000×g离心5分钟。
注意:如果沉淀贴壁不牢,可以适当延长离心时间或増大离心力。
8、弃上清,并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。
注意:少数时候沉淀可能贴壁不牢,注意不要吸弃沉淀。
9、加入300μl的70%乙醇,涡旋震荡5秒,10000×g离心5分钟,弃上清。
注意:如果沉淀贴壁不牢,可以适当延长离心时间或増大离心力。
10、把离心管倒置于干净的吸水纸上5分钟,确保沉淀在管中 。
注意:在管底可见白色的DNA沉淀,在极少情況下沉淀可能会松弛 ,所以要缓慢倒掉上清。
11、空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净(至少5分钟)。
注意:乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、 PCR等)实验,但避免过度干操DNA沉淀,因过度干燥会使DNA难于溶解。
12、加入200lμl的Buffer GE,低速涡旋5秒,65℃孵育1小时溶解DNA,期间轻弹数次助溶。-20℃保存DNA。
注意:如果DNA没有完全溶解,可室温过夜。如果使用少量的FG3溶解DNA,建议延长孵育时间。
二、从1~5ml全血中提取基因组(以3ml血液外理量为例)
1、取3ml全血于15ml离心管(自备)中,加入3ml(样本等体积)Buffer FG1,上下颠倒混匀5次,2500×g离心5分钟,弃上清。
2、再向离心管中加入4.5ml(1.5倍样本体积)Buffer FG1,涡旋震荡,使沉淀完全分散。2500×g离心5分钟,弃上清,并把离心管倒置于干净的吸水纸上,放置2分钟。
注意:在极少情况下沉淀可能会松弛 ,所以要缓慢倒掉上清。将离心管倒置在吸水纸上,可以減少管壁上清的回流。
3、按照附表配制缓冲液FG2与蛋白酶K 的混合液(比例100:1)。
注意:此混合液最好现用现配,井在配好后1h之内用完。
4、加入1.5ml Buffer FG2/蛋白酶K 混合液,立即涡旋混匀至溶液无团块。
注意:
1)如果有多个样品同时操作,加入Buffer FG2/蛋白酶K 混合液后立即涡旋振荡,不要等所有样品都加完后再震荡。
2)通常涡旋震荡3-4次,毎次5秒可以使沉淀充分悬浮,如果涡旋震荡后发现沉淀中含胶状物质可以再加入300lμl的Buffer FG2/蛋白酶K 混合液,再次涡旋混匀。
5、65℃孵育10~30分钟,其间颠倒混匀数次。
注意:如果样品额色从红色变成橄榄绿说明蛋白消化完全。
6、加入1.5ml导丙醇,上下颠倒彻底混匀直至看到DNA。
注意:与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要。如果样品中白细胞含量少,可能看不到DNA,则至少上下颠倒离心管20次确保沉淀完全。
7、2500×g离心5分钟。
注意:如果沉淀贴壁不牢,可以造当延长离心时间或増大离心力。
8、弃上清,并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。
注意:在管底可见自色的DNA沉淀,在极少情况下沉淀可能会松弛 ,所以要缓慢倒掉上清。
9、加入1.5ml的70%乙醇,涡旋震荡5秒,2500×g离心5分钟,弃上清。
注意:如果沉淀贴壁不牢.可以适当延长离心时间或増大离心力。
10、把离心管倒置于干净的吸水纸上5分钟,确保沉淀在管中 。
注意:在极少情况下沉淀可能会松弛,所以要缓慢倒掉上清。
11、空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净(至少5分钟)。
注意:乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、 PCR等)实验,但避免过度干燥DNA沉淀,因过度干燥会使DNA难于溶解。
12、加入300μl的Buffer GE,低速涡旋5秒,65℃孵育1小时溶解DNA,期间轻弹数次助溶。一20℃保存DNA。
注意:如果DNA没有完全溶解,可室温过夜。如果使用少量的FG3溶解DNA,建议延长孵育时间。
三、从6~20ml全血中提取基因组(以10ml血液处理量为例)
1、取10ml全血于50ml离心管(自备)中,加入10ml Buffer FG1,上下颠倒混匀5次,2500×g离心5分钟。
2、再向离心管中加入15ml Buffer FG1,涡旋震荡,使沉淀完全分散。2500×g离心5分钟,弃上清,并把离心管倒置于干净的吸水纸上,放置2分钟。
注意:在极少情况下沉淀可能会松弛,所以要缓慢倒掉上清。
3、按照附表配制缓冲液FG2与蛋白酶K 的混合液(比例100:1)。
注意:此混合液最好现用现配,井在配好后1小时之内用完。
4、加入5ml Buffer FG2/蛋白酶K 混合液,立即涡旋混匀至溶液无团块。
注意:
1)如果有多个样品同时操作,加入Buffer FG2/蛋白酶K 混合液后立即涡旋震荡,不要等所有样品都加完后再震荡。
2)通常涡旋震荡3-4次,毎次5秒可以使沉淀充分悬浮,如果涡旋震荡后发现沉淀中含胶状物质可以再加入1ml BufferFG2/蛋白酶K 混合液,再次涡旋混匀。
5、65℃孵育30分钟,其间颠倒混匀数次。
注意:如果样品颜色从红色变成橄榄绿说明蛋白消化完全。
6、加入5ml导丙醇,上下颠倒彻底混匀直至看到DNA。
注意:与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要,应该至少上下颠倒离心管20次确保沉淀完全。
7、2500×g离心5分钟。
注意:如果沉淀贴壁不牢,可以适当延长离心时间或増大离心力。
8、弃上清,并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。
注意:在管底可见白色的DNA沉淀,在极少情况下沉淀可能会松弛 ,所以要缓慢倒掉上清。
9、加入5ml的70%乙醇,涡旋震荡5秒,2500×g离心5分钟,弃上清。
注意:如果沉淀贴壁不牢,可以适当延长离心时间或増大离心力。
10、把离心管倒置于干净的吸水纸上5分钟,确保沉淀在管中 。
注意:在极少情况下沉淀可能会松驰 ,所以要缓慢倒掉上清。
11、空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净(至少5分钟)。
注意:乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、 PCR等)实验,但避免过度干燥DNA沉淀,因过度干燥会使DNA难于溶解。
12、加入1ml的Buffer GE,低速涡旋5秒,65℃孵育1小时溶解DNA,期间轻弹数次助溶。-20℃保存DNA。
注意:如果DNA没有完全溶解.可室温过夜。如果使用少量的FG3溶解DNA,建议延长孵育时间。
附表:不同体积血液所需各种缓冲液用量
| 缓冲液 | 血液样品的体积(μl) | ||||||
| 100 | 300 | 1000 | 3000 | 5000 | 10000 | 20000 | |
| Buffer FG1(μl) | 250 | 750 | 2500 | 7500 | 12500 | 25000 | 50000 |
| Buffer FG2(μl) | 50 | 150 | 500 | 1500 | 2500 | 5000 | 10000 |
| 蛋白酶K(μl) | 0.5 | 1.5 | 5 | 15 | 25 | 50 | 100 |
| 异丙醇(μl) | 50 | 150 | 500 | 1500 | 2500 | 5000 | 10000 |
| 70%乙醇(μl) | 50 | 150 | 500 | 1500 | 2500 | 5000 | 10000 |
| Buffer GE(μl) | 100 | 200 | 200 | 300 | 500 | 1000 | 1000 |
| 补加FG2和蛋白酶K 混合液 | 10 | 30 | 100 | 300 | 500 | 1000 | 1000 |
储存条件:室温(15~30℃)。
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·TOP10感受态细胞
编号:WE0251
英文名称:TOP10 Competent Cell
规格:100μl×10支
本产品是大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。TOP10是一种常用于质粒克隆的菌株,其φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶*基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。使用pUC19质粒检测,转化效率可达108,适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。
产品组成:
| 组份 | 0.1ml×10支 |
| TOP10 Competent Cell | 10×100μl |
| Control DNA pUC19,0.1ng/μl | 10μl |
实验前准备及重要注意事项
1、感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。
2、转化所有步骤均在无菌条件下操作。
3、包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA,供对照试验使用。
使用方法:
1、取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2、待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3、42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4、向每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5、根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意:
1)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
储存条件:-80℃。
血液基因组DNA提取试剂盒 价格关键词:血液基因组DNA提取试剂盒 ,BalbGen Blood DNA Kit,WE0176
·HRP标记抗c-Myc标签单克隆抗体
编号:WE0333
英文名称:HRP Conjugated Anti c-Myc Tag Mouse Monoclonal Antibody
规格:20μl|100μl
本抗体为经辣根过氧化物酶(HRP)直接标记的抗c-Myc标签鼠单克隆抗体,可高度特异识别重组蛋白C末端或N末端的c-Myc标签(EQKLISEEDL), 而不受邻近*基酸组成的影响,可用于检测c-Myc Tag融合蛋白。本产品经HRP直接标记,无需使用二抗,可直接用相应酶底物显色或化学发光法检测目的蛋白,减化了实验步骤,避免由二抗交叉反应引起的非特异性条带。
抗体类型:鼠IgG
免疫原:人工合成多肽
标记物:HRP
应用范围:WB(1:1000-5000)、ELISA(1:1000-20000)
·2×Bes Taq MasterMix(含染料)
编号:WE0104
英文名称:2×Bes Taq MasterMix(With Dye)
规格:1ml|5ml|25ml
本品是由Bes Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系,浓度为2×。Es Taq DNA Polymerase具有扩增效率高、错配率低的优良性能。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定,超过98%的PCR扩增能一次成功,同时复杂模板也能得到有效扩增,并可最大限度地减少人为误差和污染。本产品已加入染料(蓝色),反应结束后可直接进行电泳检测,无需再使用上样缓冲液。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。主要适用于常规PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等实验。
产品组成:
| 组份 | 1ml | 5ml | 25ml |
| 2×Bes Taq MasterMix(With Dye) | 1ml | 5×1ml | 5×5ml |
| ddH2O | 1ml | 5×1ml | 5×5ml |
注意:2×Bes Taq MasterMix含有Bes Taq DNA Polymerase,3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。
质量控制:
1、经检验无外源核酸酶活性;
2、PCR方法检测无宿主残余DNA;
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。
使用方法:
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×Bes Taq MasterMix(With Dye) | 25μl | 1× |
| Forward Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Reverse Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Template DNA | <0.5μg | <0.5μg/50μl |
| ddH2O | up to 50μl |
注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 2 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 25-35 个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 30 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 2 min |
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,Bes Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
血液基因组DNA提取试剂盒 价格关键词:血液基因组DNA提取试剂盒 ,BalbGen Blood DNA Kit,WE0176
BL0372 Glass beads acid-Washed 玻璃珠
甲*(代"酚")红指示剂 100ml
85-86-9 苏丹Ⅲ
1405-41-0 硫*(代"酸")庆大霉素 Gentamycin Sulfate
ARB11122 人肺炎支原体抗体(MP-Ab)酶免分析 Human mycoplasma pneumoniae antibody,mp-ab ELISA KIT
ARB10260 人二磷酸尿核苷葡糖醛酸基转移酶2家族肽B4(UGT2B4)Elisa定量检测 Human uridine dipho-sphate glucuronosyltransferase 2 family polyPeptide b4,ugt2b4 ELISA KIT
CYB164045 兔抗生物素-HRP(1:500~1000)
ARB14026 植物赤霉素(GA)尿液中含量检测 Plant gibberellic acid,ga ELISA KIT
ACD抗凝剂(B) 100ml
60-18-4 L-Tyrosine L-酪*酸
无机焦磷酸化酶 Sorbic acid 9024-82-2
F030840 BIOTIN标记兔抗驴IgG抗体 Polyclonal Rabbit Anti-Donkey IgG*BIOTIN
RPMI 1640 Medium 500ml
ARB13286 小鼠凝血因子Ⅱ(FⅡ)含量检测 Mouse coagulation factor Ⅱ,fⅡ ELISA KIT
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以下操作按照天根产品 DP349 血液基因组 DNA 提取试剂盒的说明书进行,所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品,样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备:1. 抗凝或新鲜全血(本实验以10 ml人的新鲜全血(a)/抗凝血(b)分别为例 )2. 移液器及配套无菌枪头(2.5 μl,10 μl ,200 μl ,1ml),15 ml离心管3. 无水乙醇,70%乙醇,干净的吸水纸4. 涡旋振荡器,金属浴/水浴,台式离心机本文版权归天根生化科技(北京)有限
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