Hoechst 33258 荧光染料

别名：2'-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)- 2,5'-bi(1H-benzimidazole) trihydrochloride;2-[2- (4-Hydroxyphenyl)-6-benzimidazoyl]-6-(1-methyl-4- piperazyl)benzimidazole trihydrochloride;HOE 33258； Hoechst 33258

说明：荧光色素；用于DNA、染色体和核酸的染色；荧光染色法和免疫荧光技术。Hoechst 33258 是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，它在嵌入双链 DNA 后释放强烈的蓝色荧光，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258 常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测，也可以用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。

物理性状：至深粉末；溶于水，黄或棕色溶液，参考浓度为9.80 - 10.20 mg/ml；熔点＞300℃。

用途：细胞遗传学研究的常用试剂，荧光染色细胞的DNA ，插入DNA的A-T区，具有低的细胞毒性，形成膜渗透性荧光DNA链。

用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33258工作浓度为0.5-10μg/ml。

 

配制母液

Hoechst 33258溶于水，溶解度可达10mg/ml。因此可配制成10mg/ml的母液于4℃避光保存。

注意事项

1) Hoechst 33258 对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

2) 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

3) 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

4) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1.   用PBS或合适的缓冲液制备10～50µM Hoechst 33258染色液。

2.   固定的细胞或组织染色：

对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst33258染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258染色。

a) 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。

b)  吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

c) 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350nm，发射波长460nm。

3.  活细胞或组织染色：

a) 细胞培养物中加入适量Hoechst 33258染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100μl染色液。

b) 在 37℃培养细胞 10～20 分钟。

c) 用 PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

d) 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350nm，发射波长460nm。