BTN90903型无RNase的DNase溶液现货价格

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BTN90903型无RNase的DNase溶液现货价格由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多无RNase的DNase溶液等RNA纯化产品请联系我司咨询订购。

名称：BTN90903型无RNase的DNase溶液现货价格
编号：BTN90903
规格：500U
产地：国产|进口
英文名：RNase-Free DNase Solution
本产品是从牛胰DNase中精制的无RNase污染的DNase，专门用于降解RNA样品中的DNA污染。

产品特点：
1.高效，能使总RNA中的基因组DNA污染降低到电泳检测不到的水平。
2. 同时降解单链DNA和双链DNA。
3. 不含RNase，可以保证RNA分子完整性不受任何影响。
4.反应条件经过优化，可以用于快速降解硅胶膜上吸附的DNA，也可以用于快速降解液体反应体系中的DNA。
5.可以用于总RNA提取和体外转录中去除DNA。也可用于切口平移(Nick Translation)和DNase印迹法研究DNA-蛋白质相互作用。

产品组成：

 

成分	规格
RNase-free DNase(1U/μL)	300μl
10×DNase Buffer	300μl
50mM EDTA溶液	300μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、去除RNA样品中污染的基因组DNA(仅供参考，本试剂盒不含RNase-free DNase以外的所需试剂)
1.在一无RNA酶的离心管中配制50μl的反应液：

成分	用量
RNA样品	1μg
10×DNase Buffer	1μl
RNase-free DNase(1U/μL)	1μl
自备的RNase inhibitor(40U/μL)	0.5-1μL(可不加)
补超纯水到	10μL

2. 混匀，短暂离心，37℃放置30分钟；
3. 加入2μl 50mM EDTA溶液，65℃放置15分钟。此步可以灭活DNase。RNA在加热时容易水解，也可以使用酚/*仿抽提去除DNase，然后再乙醇沉淀RNA。如果RNA在20μg以上，也可以使用本公司的RNAadsorp
试剂盒进行柱式纯化，回收RNA。
4.电泳检测是否去除了基因组 DNA，然后进行后续实验。

二、除去硅胶膜离心吸附柱上的DNA(仅供参考，本试剂盒不含 RNase-free DNase以外的所需试剂)
1.在柱式法提取过程中，完成洗涤步骤。
2. 配制 50μl DNase工作液。

成分	用量
10×DNase Buffer	5μl
RNase-free DNase(1U/μL)	10μl
自备的RNase inhibitor(40U/μL)	0.5-1μL(也可不加)
补超纯水到	50μL

3. 加在离心吸附柱中间，室温放置5-30分钟。
4. 加入0.5mL自备洗柱液洗涤两次。
5. 用RNA洗脱液洗脱即得无DNA的RNA样品。

三、除去RNA体外转录反应中的DNA模板(仅参考，本试剂盒不含RNase-free DNase以外的所需试剂)
1. 按2 U RNase-free DNase/μg DNA模板的比例在RNA体外转录反应中加入RNase-free DNase。注意：酶的最佳用量也许需要优化。
2. 37℃放置15分钟。
3. 加入2μl 50mM EDTA溶液，65℃放置15分钟；此步可以灭活DNase。RNA在加热时容易水解，也可以使用酚/*仿抽提去除DNase，然后再乙醇沉淀RNA。如果RNA在20μg以上，也可以使用本公司的RNAadsorp试剂盒(需另购)进行柱式纯化，回收RNA。

四、用于切口平移法(Nick Translation)DNA探针标记(仅供参考，本试剂盒不含RNase-free DNase以外的所需试剂)
1. 按下表设置切口平移标记反应：

成分	用量
10×DNA聚合酶I缓冲液	2.5μl
3 dNTP mixture，1mM each	1.25μl
标记核苷酸：非标记核苷酸混合(3：7，1mM)	1μl
RNase-free DNase(0.002U/μL，见注)	1μl
DNA聚合酶 I(10U/μL)	0.5-1.5μl
模板 DNA	0.25μg
加水到	25μl

注：稀释 RNase-free DNase的缓冲液为1×DNA聚合酶 I缓冲液：50mM
2. 15℃放置 15-60分钟。
3. 加入10μl 50mM EDTA溶液。
4. 65℃放置 15分钟灭活酶。
5. 所得探针可以纯化后使用，也可以直接使用。


除BTN90903型无RNase的DNase溶液现货价格外，我公司正在打折促销以下产品：

·一管式点突变试剂盒
编号：BTN100212
英文名称：One-Tube Mutagenesis Kit
规格：10次
基因的定点突变是重要的分子生物学技术，广泛用于载体构建、基因改造、蛋白质功能研究等领域。但传统的方法需要使用单链DNA 模板，而得到单链DNA 模板又需要先将基因克隆到类似M13 这种载体中，操作过程冗长。为了克服这些缺点，本公司将突变位点设计到一对互补的引物中，用高保真扩增质粒模板，然后用Dpn I 去除原始的甲基化模板，新合成的DNA 通过互补形成带切口的双链质粒，直接用于转化感受态细菌。

产品特点：
1. 直接使用质粒DNA作为模板，免去了制备单链DNA的步骤。
2.基于高保真PCR，对模板DNA 序列没特殊要求，可以用于突变任何序列。同时对模板的需求量很少。
3.一管式，全部在一个优化的缓冲体系中完成，非常简单。
4. 使用Dpn I 去除未突变模板，突变效率高达90%。
5.可用于制备点突变，缺失突变和插入突变。
6. 本产品A型适用于8 kb以下，B型适用于8-15 kb。

试剂盒组成：

成分	10T(A型)	10T(B型)
高保真酶A型	10μl	无
高保真酶B型	无	10μl
5×高保真酶Buffer A型	100μl	无
5×高保真酶Buffer B型	无	100μl
dNTP(2.5mM each)	50μl	50μl
Dpn I酶	10μl	10μl
超纯水	1ml	1ml

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、引物设计及注意事项
用于特定基因突变的引物必须用户单独设计，请参考如下一些基本原则进行设计。
1. 共需设计两条完全互补的一对引物，它们覆盖要扩增的突变区位点，突变位点最好放在引物的中心。可以先集中设计一条，然后就可得互补的另一条引物。
2.引物的长度通常为25-45个碱基。引物中突变位点任何一侧都必需满足Tm大于45的条件，Tm 计算方式为Tm=4×(GC 碱基数)＋2×(AT 碱基数)。例如引物agtcaggccaattcgAAGcagtcgaattgccaag 就达到此标准，它的突变位点AAG 所放位置使左侧Tm＝46；右侧Tm＝48，均大于45。
3. 尽量把引物的GC含量控制在40％-60％，结尾的1-3个碱基最好是G或C。
4. 尽量使引物不要产生非常稳定的二级结构和引物二聚体。
5. 最好使用经过PAGE 纯化的引物或更高纯度的引物。

二、待突变模板质粒的选择
1. 必需使用从dam＋的大肠杆菌(这类菌中质粒可以被甲基化)中抽提得到的质粒用于基因定点突变，否则Dpn I 不能把没有酶切的质粒DNA 切除，产生大量的假阳性。常用的大部分大肠杆菌都是dam＋的，包括DH5α、JM109等。不能使用JM110和SCS110以及其它dcm-菌种。
2. 待突变质粒和目的基因的GC含量应该在40-55％，没有任何GC含量超过70%、长度在50bp以上的区域。如果质粒GC含量过高，请先把目的基因克隆到其它合适的载体上，再进行基因定点突变反应。如果目的基因GC含量过高，而突变位点不在高GC含量区域，可以先把该基因的不含高GC含量的一个区域克隆出来，进行定点突变，然后再把突变后的片断克隆回原基因中。如果突变位点在高GC 区，则可以使用高GC 专用PCR反应试剂。

三、基因定点突变反应
1.在一个塑料离心管中加入下列成分：

待突变模板质粒	0.1-0.5μg
5×高保真酶Buffer	10μl
引物一(10-20 uM)	1μl
引物二(10-20 uM)	1μl
dNTP Mix(2.5mM each)	4μl
补水到	49μl

2. 加入1μl高保真DNA聚合酶，混匀，如果PCR仪没有热盖则需要加少量石蜡油。放入PCR仪器中按下面参数进行PCR：

步骤	温度	时间	循环数
变性	95℃	1min	1次
PCR	95℃	40s	18次
	60℃	1min
	68℃	1min/Kb
延伸	72℃	10min	1次
保存	4℃	长时间保持

四、Dpn I消化
PCR反应后，直接在PCR反应体系中加入1μL Dpn I内切酶(该酶在甘油保存液中会下沉到管底，故用前需要充分混匀)。DpnI可以酶切双链都被甲基化的模板质粒，也能降解一条链被甲基化的双链质粒。混匀后37℃孵育2小时后样品可以直接用于转化，或者-20℃保存备用。

五、转化、挑克隆鉴定：
每100 微升感受态细菌(转化效率必须在107/μg以上)中可以加入5-10微升经过Dpn I 消化后的突变产物，按照所使用的感受态细菌的操作方法进行操作。如果PCR 使用了石蜡油，在转化时千万别把它带入转化反应，否则会严重影响转化效率。
在涂板前通过离心浓缩的办法，把所有被转化后的细菌全部涂布到含有适当抗生素的平板上培养过夜。通常会得到50个以下的克隆，可按常规方法制备质粒并测序。

六、常见问题：
1.转化后没有克隆或克隆数极少：
(1)感受态细菌效率不够高，请检测一下感受态细胞的效率，确保转化效率在107/μg。
(2)把Dpn I 消化后的产物用常规的乙醇沉淀浓缩，这样就可以把所有的产物全部用于转化。
(3)优化基因定点突变中的PCR参数。可以把最初的95℃变性时间延长为2分钟，循环中95℃变性的时间延长至1分钟，把循环中的68℃的延伸时间改为1.5分钟/kb 至2分钟/kb，退火可以改为60-55℃或65-55℃等的touch down，退火时间也可以适当延长。
(4)引物设计有问题。通过突变反应中的PCR 没有很好地扩增出预期的突变质粒。
2.有克隆，但没有或很难检测到预期的突变克隆：
使用的待突变的模板质粒量过多，导致Dpn I 消化时不完全，可减少质粒用量。
3. 有突变克隆，但突变位点不是预期的位点：
(1)引物设计不佳，退火温度过低，导致引物退火到错误的地方。
(2)引物质量较差，没有经过PAGE 纯化。这样引物中通常会含有比设计的引物要短的特异性较差的引物，容易导致非预期的突变。


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乙酸纤维素薄膜 Xylene cyanole FF
BTN81215 一站式Western印迹套装(显色法) One-Stop Western Blotting Pack
NF-237 兔抗羊IgG血清
ARB14126 人可溶性OX40L(sOX40L)含量测试 
ARB13128 小鼠促黄体激素(LH)尿液中含量检测 Mouse luteotropic hormone,lh ELISA KIT
SJ0129 Carrageenan 卡拉胶
BL1267 10×丽春红染色液
ARB13204 小鼠脑肠肽(BGP/GehrelIn)酶免分析 Mouse brain-gut Peptides,bgp/gehrelin ELISA KIT
ARB11014 人补体调节蛋白(CCP)Elisa方法检测 Human complement control protein,ccp ELISA KIT
133-32-4 Indole-3-butyricacid(IBA)吲哚-4-丁酸(水溶)
NF-214 羊抗人C9血清
ARB13858 猪可溶性血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/sFLK-1)定量分析 Porcine soluble vascular endothelial growth factor receptor-2,vegfr-2/sflk-1 ELISA KIT
SJ0716 TES缓冲液(10×)
滑石粉 BES sodiu*(代"m") salt 14807-96-6
ARB13937 猪细胞间粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA检测服务 Porcine intercellular adhesion molecule 2,icam-2 ELISA KIT
ARB14162 人流行性出血热(EHF)ELISA代测服务 
ARB10554 人孕激素/孕酮(PROG)酶联免疫定量检测 Human progesterone,prog ELISA KIT
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·NP40裂解液
编号：BTN131009
英文名称：NP40 Lysis Buffer
规格：250mL
NP-40裂解液是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP和co-IP等。

产品特点：
1．本产品裂解能力强度温和，对膜蛋白的处理能力一般；对核蛋白的提取能力较好；对胞浆蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子处理效果很好。
2．本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂，能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。
3．本产品的主要成分为50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40以及sodiu*(代"m") pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodiu*(代"m") orthovanadate，sodiu*(代"m") fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。
4．用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA法蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

对于培养细胞样品：
1．融解NP-40 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2．对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150～250μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-～250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3．充分裂解后，10000-14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
 裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。

对于组织样品：
1．把组织剪切成细小的碎片。
2．融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3．按照每20mg组织加入150～250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4．用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5．充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6．如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

备注：
1．为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2．裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

我公司生产供应销*(代"售")的RNA纯化正全品类优惠促销，十分期待您的咨询选购BTN90903型无RNase的DNase溶液现货价格。